本发明专利技术公开了一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒及其制备方法，所述荧光免疫层析试剂盒由PVC底板、玻璃纤维膜、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成；结合垫内含有时间分辨荧光微球标记的鼠抗人IgG抗体；硝酸纤维素膜上包含3条检测线：T1线包被环瓜氨酸肽重组蛋白；T2线包被正五聚体蛋白3重组蛋白；T3线包被双特异性磷酸酶11重组蛋白和1条质控C线：C线含有羊抗鼠IgG抗体。该试剂盒能够快速定性检测抗环瓜氨酸肽抗体或抗正五聚体蛋白3抗体或抗双特异性磷酸酶11抗体。该试剂盒对早期诊断类风湿关节炎，具有操作简便、反应快速、灵敏度高、特异性好的优点。特异性好的优点。特异性好的优点。
【技术实现步骤摘要】
一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒及其制备方法
[0001]本专利技术涉及医用试剂盒
，具体为一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒及其制备方法。
技术介绍
[0002]类风湿关节炎(RA)是一种常见的以关节滑膜增生及软骨破坏引起的慢性炎症为主要特征的自身免疫性疾病。大多数情况下RA患者的这种慢性炎症反应会引起关节滑膜增厚最终导致关节的破坏。RA患者在2年以内大约70％的关节破坏症状进行性加重，该病如不及时诊断治疗，即可出现软骨和骨的侵蚀性病变，造成关节结构破坏，最终发展成为关节畸形、强直，导致不同程度的残疾，因此早期诊断至关重要。
[0003]目前，临床实验室诊断RA最常用的是检查血浆中的类风湿因子和抗环瓜氨酸肽抗体。由于类风湿因子受某些抗原、抗体物质的干扰，常出现假阳性，特异性不高，常常只能根据临床症状和x线表现诊断，从而导致误诊和漏诊。
[0004]其次，抗环瓜氨酸肽抗体是以合成的环化瓜氨酸多肽为抗原的自身抗体，对RA的诊断有高度的特异性，但是敏感性较低，仍有三分之一的RA患者血浆抗环瓜氨酸肽抗体为阴性。
[0005]为解决上述问题，早期诊断类风湿关节炎，快速定性检测抗环瓜氨酸肽抗体，专利技术一种三合一的时间分辨荧光免疫层析试剂盒具有重要意义。
技术实现思路
[0006]本专利技术的目的在于提供一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒及其制备方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0007]为了解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒，试剂盒包括试纸条和壳体，所述试纸条由PVC底板、玻璃纤维膜、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成；所述PVC底板上从左往右依次粘贴有玻璃纤维膜、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述结合垫内含有鼠抗人IgG抗体，硝酸纤维素膜上自左向右包被有检测线和质控C线。
[0009]较优化的方案，所述鼠抗人IgG抗体是由时间分辨荧光微球标记的。
[0010]较优化的方案，所述检测线包括T1线、T2线、T3线；所述T1线、T2线、T3线和质控C线自左向右依次排列；T1线包被环瓜氨酸肽重组蛋白；T2线包被正五聚体蛋白3重组蛋白；T3线包被双特异性磷酸酶11重组蛋白；质控C线含有羊抗鼠IgG抗体。
[0011]一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒的制备方法，包括以下步骤：在PVC底板的中间位置贴上硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上包被有T1线、T2线、T3线和质控C线；T1线靠近玻璃纤维膜一端，质控C线靠近吸水纸一端；在PVC底板的左侧贴上玻璃纤维膜，并在硝酸纤维素膜的交接处铺上结合垫；结合垫上含有时间分辨荧光微球标记的鼠抗人IgG抗体免疫复合物，结合垫与硝酸纤维素膜有1～2mm的重叠；在PVC底板的右侧贴上吸水纸，吸水纸
与硝酸纤维素膜有1～2mm的重叠；切条，得到试纸条；将试纸条装入塑料卡形成试剂盒。
[0012]较优化的方案，所述结合垫的制备方法为：
[0013](a)：在时间分辨荧光微球溶液中加入鼠抗人IgG抗体，涡旋混匀，置于37～45℃摇床中震荡16～18h；加入封闭剂，涡旋混匀，置于37～45℃摇床中震荡2～3h；在15000～16000rpm下，高速离心15～20min，去除上清，沉淀，用荧光工作液重旋，超声均匀，荧光工作液加入量为原始时间分辨荧光微球溶液体积的1/2；
[0014](b)：用喷金划膜仪，按照出液量为8
‑
10μL/cm，速度80
‑
100mm/s的喷涂参数，将时间分辨荧光微球溶液喷涂在结合垫(3)上，45～50℃烘箱烘干8～9h，保存备用。
[0015]较优化的方案，步骤(a)中，所述鼠抗人IgG抗体稀释至1～2mg/mL，抗体加入量为每毫升时间分辨荧光微球溶液加入80
‑
100μg。
[0016]较优化的方案，步骤(a)中，所述封闭剂是终浓度为0.5～0.7％的20～25％BSA溶液。
[0017]较优化的方案，步骤(a)中，所述荧光工作液的成分为：硼酸盐缓冲液+2％葡萄糖+0.5％PEG2000+0.01％TWEEN20+0.25％BSA。
[0018]较优化的方案，步骤(a)中，所述时间分辨荧光微球溶液的制备方法为：
[0019](a)：将时间分辨荧光微球用MES缓冲溶液稀释至0.1～0.2％(W/W)，作为时间分辨荧光微球溶液；
[0020](b)：将EDC用MES缓冲溶液溶解至10～15mg/ml，加入到时间分辨荧光微球溶液中，涡旋混匀，加入EDC溶液，置于37～45℃摇床中震荡15～20min；
[0021](c)：15000～16000rpm，15～20min高速离心，去除上清，沉淀用MES缓冲溶液重旋，超声分散2～5min，制得时间分辨荧光微球溶液。
[0022]较优化的方案，所述T1线的制备方法为：用PBS将环瓜氨酸肽重组蛋白稀释至1.0
‑
1.2mg/ml，制得T1线包被液，包被T1线；
[0023]所述T2线的制备方法为：用PBS将正五聚体蛋白3重组蛋白稀释至1.2
‑
1.5mg/ml，制得T2线包被液，包被T2线；
[0024]所述T3线的制备方法为：用PBS将双特异性磷酸酶11重组蛋白稀释至1.5
‑
2.0mg/ml，制得T3线包被液，包被T3线；
[0025]所述质控C线的制备方法为：用PBS将羊抗鼠IgG抗体稀释至2.5
‑
3.0mg/mL，制得质控C线包被液，包被质控C线。
[0026]较优化的方案，所述硝酸纤维素膜的制备方法为：在硝酸纤维素膜上划T1线、T2线、T3线、质控C线，放入45～60℃烘箱烘干8～10h，保存。
[0027]与现有技术相比，本专利技术所达到的有益效果是：
[0028](1)本专利技术的抗环瓜氨酸肽抗体是以合成的环化瓜氨酸多肽为抗原的自身抗体，对RA的诊断有高度的特异性，但是敏感性较低，因其灵敏度较低，仍有三分之一的RA患者血浆ACPA为阴性。本试剂盒能够同时检测抗环瓜氨酸肽抗体或抗正五聚体蛋白3抗体或抗双特异性磷酸酶11抗体，可以有效弥补抗环瓜氨酸肽抗体阴性的类风湿关节炎患者漏检的风险，3种指标联合检测，对于早期诊断类风湿关节炎具有操作简便、反应快速、灵敏度高、特异性好的优点。
[0029](2)本专利技术采用时间分辨荧光微球。时间分辨荧光微球作为一种特殊的功能微球，
与普通荧光微球相比，每个微球中可包裹成千上万个荧光分子，大大提高了荧光的标记效率，有效提高了分析灵敏度；同时，时间分辨荧光微球表面修饰有合适密度的羧基或其它功能基团，用于与蛋白或抗体的共价偶联，提高了标记物的稳定性。时间分辨荧光微球是融合了镧系稀土元素的纳米微球，与免疫层析技术结合，既保留了层析试剂的现场快速检测优点，又加入了时间分辨荧光检测技术的高灵敏度特点，具有灵敏度高、特异性强和稳定性好等本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：试剂盒包括试纸条和壳体，所述试纸条由PVC底板(1)、玻璃纤维膜(2)、结合垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水纸(5)组成；所述PVC底板(1)上从左往右依次粘贴有玻璃纤维膜(2)、结合垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水纸(5)；所述结合垫(3)内含有时间分辨荧光微球标记的鼠抗人IgG抗体免疫复合物，硝酸纤维素膜(4)上自左向右包被有检测线和质控C线(44)。2.根据权利要求1所述的一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述检测线包括T1线(41)、T2线(42)、T3线(43)；所述T1线(41)、T2线(42)、T3线(43)和质控C线(44)自左向右依次排列；T1线(41)包被环瓜氨酸肽重组蛋白；T2线(42)包被正五聚体蛋白3重组蛋白；T3线(43)包被双特异性磷酸酶11重组蛋白；质控C线(44)含有羊抗鼠IgG抗体。3.一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：在PVC底板(1)的中间位置贴上硝酸纤维素膜(4)，硝酸纤维素膜上包被有T1线(41)、T2线(42)、T3线(43)和质控C线(44)；T1线(41)靠近玻璃纤维膜(2)一端，质控C线(44)靠近吸水纸(5)一端；在PVC底板(1)的左侧贴上玻璃纤维膜(2)，并在硝酸纤维素膜(4)的交接处铺上结合垫(3)；结合垫(3)上含有时间分辨荧光微球标记的鼠抗人IgG抗体免疫复合物，结合垫(3)与硝酸纤维素膜(4)有1～2mm的重叠；在PVC底板(1)的右侧贴上吸水纸(5)，吸水纸(5)与硝酸纤维素膜(4)有1～2mm的重叠；切条，得到试纸条；将试纸条装入塑料卡形成试剂盒。4.根据权利要求3所述的一种三合一时间分辨荧光免疫层析试剂盒的制备方法，其特征在于：所述结合垫(3)的制备方法为：(a)：在时间分辨荧光微球溶液中加入鼠抗人IgG抗体，涡旋混匀，置于37～45℃摇床中震荡16～18h；加入封闭剂，涡旋混匀，置于37～45℃摇床中震荡2～3h；在15000～16000rpm下，高速离心15～20min，去除上清，沉淀，用荧光工作液重旋，超声均匀，荧光工作液加入量为原始时间分辨荧光微球溶液体积的1/2；(b)：用喷金划膜仪，按照出液量为8
‑
10μL/cm，速度80
‑
100mm/s的喷涂参数，将时间分辨荧光微球溶液喷涂在结合垫(3)上，45～50℃烘箱烘干8～9h，保存备用。5.根据权利要求4所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：姚松涛，鲁翌，李艳敏，李靖，雷之恒，吴双，
申请(专利权)人：武汉塞力斯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。