一种基于流式荧光技术的肺炎支原体IgM和IgG的同步检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于流式荧光技术的肺炎支原体IgM和IgG的同步检测方法，分别将抗人IgM抗体、抗人IgG抗体共价偶联于不同磁性聚苯乙烯荧光编码微球表面，利用生物素

【技术实现步骤摘要】
一种基于流式荧光技术的肺炎支原体IgM和IgG的同步检测方法


[0001]本专利技术涉及一种检测方法，更具体一点说，涉及一种基于流式荧光技术的肺炎支原体IgM和IgG的同步检测方法，属于生物技术检测领域。

技术介绍

[0002]肺炎支原体(MP)是引起人类肺炎支原体肺炎的病原体。临床研究指出，MP主要经飞沫传播，各年龄段人群均可感染，在儿童及青少年中感染率较高，其与间质性肺炎、支气管肺炎等的发生都有密切联系。因此，早期诊断、早期治疗尤为重要。近年来，肺炎支原体特异性抗体MP
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IgM和MP
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IgG的检测新方法应用于临床，为临床诊断肺炎支原体感染提供了一种血清学诊断手段。
[0003]由于健康人血清中一般不存在MP抗体，故血清中肺炎支原体抗体IgM和IgG检测特异性高。应用血清学方法检测肺炎支原体的抗体IgM和IgG诊断呼吸道肺炎支原体感染，其抗体阳性结果能为肺炎支原体感染提供可靠的实验学依据。MP
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IgM一般在感染后一周内产生，第3
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4周达到高峰后逐渐减弱，持续时间短；MP
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IgG在两周之后逐渐升高，并维持较长时间的高水平。IgM和IgG联合检测、联合分析、综合了IgM的早期诊断优势和IgG特异性强、持续时间长的优点，减少了漏诊、误诊的概率，提高了诊断正确率。在同一样品中同时完成两种抗体的检测，可降低试剂和人工的成本，且结果更可靠，具有较高的临床应用价值，应用前景广阔。
[0004]流式微球技术利用球形基质作为载体,以流式细胞术作为检测平台,可以在较短时间内对生物分子进行大规模检测。该系统主要基于流式荧光编码微球，检测通量大、灵敏度高,可实现同步检测多靶标，具有较为广阔的应用空间。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了一种基于流式荧光技术的肺炎支原体IgM和IgG的检测方法，利用不同荧光编码磁性微球和同一种荧光蛋白实现在同一份样品中同时检测肺炎支原体IgM和IgG。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0007]一种基于流式荧光技术的肺炎支原体IgM和IgG的同步检测方法，该制备方法为：首先，将抗人IgM抗体和抗人IgG抗体分别包被在不同荧光编码磁性微球表面，形成微球
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IgM/G抗体复合物；其次，将微球
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IgM/G抗体复合物与待测样品孵育，洗涤去除待测样品中的未结合成分，形成微球
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IgM/G抗体
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IgM/G复合物；再次，加入生物素标记的MP抗原和链霉亲和素标记的藻红蛋白，形成微球
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IgM/G抗体
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IgM/G
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MP抗原复合物；最后，经仪器检测荧光信号强度完成检测。
[0008]优选的，将抗人IgM抗体和抗人IgG抗体分别包被在不同荧光编码磁性微球表面的包被比例为：20μg抗体包被5
×
106个荧光编码磁性微球，抗体与荧光编码磁性微球的孵育
条件为室温避光震荡1.5h。
[0009]优选的，形成微球
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IgM/G抗体复合物后，利用离心管和磁力架对编码荧光微球进行洗涤和分离，去除未结合抗体。
[0010]优选的，荧光编码磁性微球为固相载体，其为具有羧基基团的磁性聚苯乙烯荧光编码微球，抗人IgM抗体和抗人IgG抗体分别共价偶联于不同荧光编码磁性微球表面，抗体偶联微球分别与待测样本、生物素标记的MP抗原、链霉亲和素标记的藻红蛋白特异性结合，最终形成荧光免疫复合体，根据微球荧光类型和荧光强度进行检测分析。
[0011]优选的，利用抗人IgM/G抗体、MP
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IgM/G、生物素标记的MP抗原、链霉亲和素标记的藻红蛋白，偶联了抗人IgM抗体或抗人IgG抗体的荧光微球首先与稀释的待测样品孵育，将其中IgM或IgG特异性结合，随后与生物素标记的MP抗原和链霉亲和素标记的藻红蛋白孵育。
[0012]优选的，以藻红蛋白作为荧光标记物，微球、抗人IgM/G抗体、MP
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IgM/G和MP抗原形成免疫复合体后，根据藻红蛋白的荧光强度计算待测物含量。
[0013]优选的，MP抗原与藻红蛋白通过生物素
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链霉亲和素系统连接。
[0014]优选的，利用不同荧光编码磁性微球进行编码区分，不同微球分别包被抗人IgM抗体和抗人IgG抗体，最终形成不同免疫复合物，用于同时检测待测样品中MP
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IgM和MP
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IgG的含量。
[0015]优选的，所述微球
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IgM/G抗体复合物是通过活化荧光微球表面的羧基，将羧基与IgM/G抗体上的氨基形成共价键，从而形成复合物。
[0016]优选的，包括试剂盒以及放在试剂盒内的多个药剂盒，其中，具有放置不同荧光编码磁性微球的药剂盒，荧光编码微球包含有分别包被抗人IgM抗体和抗人IgG抗体的荧光编码微球；具有放置MP抗原溶液的药剂盒，MP抗原溶液为生物素标记MP抗原溶液，具有放置藻红蛋白的药剂盒，藻红蛋白为链霉亲和素标记藻红蛋白，具有放置标准品溶液的药剂盒，准品溶液为MP
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IgG和MP
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IgM标准品溶液，具有放置缓冲液的药剂盒，所述缓冲液为pH7.4的PBS缓冲液，试剂盒里设有可发性聚苯乙烯泡沫层，试剂盒包括盒体与盒盖，盒体与盒盖由酚醛塑料材质的连接轴连接，试剂盒底部预制有存放碎冰的冰槽。
[0017]有益效果：本专利技术可以同时检测待测样品中MP
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IgG和MP
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IgM含量，效率高、特异性强、灵敏度高、重复性好，可在临床检测、流行病学调查等方面发挥重要作用；试剂盒使用可发性聚苯乙烯泡沫材质，盒体与盒盖由酚醛塑料材质的连接轴连接，试剂盒底部预制有存放碎冰的冰槽。
附图说明
[0018]图1是本专利技术MP
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IgM检测标准曲线图。
[0019]图2是本专利技术MP
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IgG检测标准曲线图。
具体实施方式
[0020]以下结合说明书附图1
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2，对本专利技术作进一步说明，但本专利技术并不局限于以下实施例。
[0021]为使本专利技术的目的、方法及优点更加清楚明确，下面结合具体实施例对本专利技术做
出详细说明。
[0022]本专利技术一种基于流式荧光技术的肺炎支原体IgM和IgG的同步检测方法的技术方案如下：
[0023]首先，将抗人IgM抗体和抗人IgG抗体分别包被在不同荧光编码磁性微球表面，形成微球
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IgM/G抗体复合物，20μg抗体包被5
×
106个磁珠，抗体与微球的孵育条件为室温避光震荡1.5h。利用离心管和磁力架对编码荧光微球进行洗涤和分离，去除未结合抗体。其次，将微球
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IgM/G抗体复合物与本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于流式荧光技术的肺炎支原体IgM和IgG的同步检测方法，其特征在于该制备方法为：首先，将抗人IgM抗体和抗人IgG抗体分别包被在不同荧光编码磁性微球表面，形成微球
‑
IgM/G抗体复合物；其次，将微球
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IgM/G抗体复合物与待测样品孵育，洗涤去除待测样品中的未结合成分，形成微球
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IgM/G抗体
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IgM/G复合物；再次，加入生物素标记的MP抗原和链霉亲和素标记的藻红蛋白，形成微球
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IgM/G抗体
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IgM/G
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MP抗原复合物；最后，经仪器检测荧光信号强度完成检测。2.根据权利要求1所述的一种基于流式荧光技术的肺炎支原体IgM和IgG的同步检测方法，其特征在于：将抗人IgM抗体和抗人IgG抗体分别包被在不同荧光编码磁性微球表面的包被比例为：20μg抗体包被5
×
106个荧光编码磁性微球，抗体与荧光编码磁性微球的孵育条件为室温避光震荡1.5h。3.根据权利要求1或2所述的一种基于流式荧光技术的肺炎支原体IgM和IgG的同步检测方法，其特征在于：形成微球
‑
IgM/G抗体复合物后，利用离心管和磁力架对编码荧光微球进行洗涤和分离，去除未结合抗体。4.根据权利要求1所述的一种基于流式荧光技术的肺炎支原体IgM和IgG的同步检测方法，其特征在于：荧光编码磁性微球为固相载体，其为具有羧基基团的磁性聚苯乙烯荧光编码微球，抗人IgM抗体和抗人IgG抗体分别共价偶联于不同荧光编码磁性微球表面，抗体偶联微球分别与待测样本、生物素标记的MP抗原、链霉亲和素标记的藻红蛋白特异性结合，最终形成荧光免疫复合体，根据微球荧光类型和荧光强度进行检测分析。5.根据权利要求1或2或4所述的一种基于流式荧光技术的肺炎支原体IgM和IgG的同步检测方法，其特征在于：利用抗人IgM/G抗体、MP
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IgM/G、生物素标记的MP抗原、链霉亲和素标记的藻红蛋白，偶联了抗人IgM抗体或抗人IgG抗体的荧光微球首先与稀...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦源，黄飚，周秀梅，赵雪芹，王毅刚，
申请(专利权)人：浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：