靶向CCR1的嵌合抗原受体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种靶向CCR1的嵌合抗原受体及其应用，包括从氨基端到羧基端依次连接的靶向CCR1的单链抗体、铰链区、跨膜结构域、共刺激结构域和信号转导结构域；所述靶向CCR1的单链抗体包括抗CCR1抗体轻链可变区和抗CCR1抗体重链可变区，所述抗CCR1抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO：1所示，所述抗CCR1抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。利用本发明专利技术上述靶向CCR1的嵌合抗原受体构建的CAR

【技术实现步骤摘要】
靶向CCR1的嵌合抗原受体及其应用


[0001]本专利技术涉及分子生物
，特别是涉及一种靶向CCR1的嵌合抗原受体及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，嵌合抗原受体T细胞(CAR T)疗法在肿瘤治疗中展现出非常好的疗效。CAR
‑
T疗法的全称是Chimeric antigen receptor T cell therapy，即嵌合抗原受体T细胞疗法，原理是应用患者自身的T淋巴细胞，经过实验室重新改造，装载上具有识别肿瘤抗原的受体及共刺激分子，体外扩增后再次回输入患者体内，从而识别并攻击自身的肿瘤细胞。T细胞也叫T淋巴细胞，是人体白细胞的一种，来源于骨髓造血干细胞，在胸腺中成熟，然后移居到人体血液、淋巴和周围组织器官，发挥免疫功能，其能够抵御和消灭感染、肿瘤、外来异物等。在实验室，技术人员通过基因工程技术，将T细胞激活，并装上定位导航装置CAR(嵌合抗原受体)，将T细胞改造成CAR
‑
T细胞，其利用嵌合抗原受体，专门识别体内肿瘤细胞，并通过免疫作用释放大量的多种效应因子，它们能高效地杀灭肿瘤细胞，从而达到治疗恶性肿瘤的目的。
[0003]但是，目前针对不同肿瘤靶点且肿瘤细胞杀伤效果较好的嵌合抗原受体仍然较缺乏。

技术实现思路

[0004]基于此，有必要提供一种能够靶向CCR1且能高效杀灭肿瘤细胞的嵌合抗原受体。
[0005]一种靶向CCR1的嵌合抗原受体，包括从氨基端到羧基端依次连接的靶向CCR1的单链抗体、铰链区、跨膜结构域、共刺激结构域和信号转导结构域；所述靶向CCR1的单链抗体包括抗CCR1抗体轻链可变区和抗CCR1抗体重链可变区，所述抗CCR1抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述抗CCR1抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
[0006]本专利技术构建了一种靶向CCR1的嵌合抗原受体，其包括靶向CCR1的单链抗体、铰链区、跨膜结构域、共刺激结构域和信号转导结构域，靶向CCR1的单链抗体的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。利用本专利技术上述靶向CCR1的嵌合抗原受体构建的CAR
‑
T细胞，对CCR1阳性肿瘤细胞具有特异性靶向作用，经实验证明表达上述靶向CCR1的嵌合抗原受体的T细胞体内外杀伤作用显著，能够有效清除CCR1阳性肿瘤细胞，在肿瘤治疗领域具有重要意义。
[0007]在其中一个实施例中，所述铰链区选自以下至少一种蛋白的铰链区：CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD134、CD137、ICOS和CD154；和/或
[0008]所述跨膜结构域选自以下至少一种蛋白的跨膜区：T细胞受体的α、β或ζ链、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、KIRDS2、OX40、CD2、CD27、ICOS、GITR、CD40、BAFFR、HVEM、SLAMF7、NKp80、CD160、CD19、
IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA1、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA
‑
6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、LFA
‑
1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、ITGB7、TNFR2、DNAM1、SLAMF4、CD84、CD96、CEACAM1、CRTAM、Ly9、PSGL1、CD100、SLAMF6、SLAM、BLAME、SELPLG、LTBR、PAG/Cbp、NKp44、NKp30、NKp46、NKG2D、和NKG2C；和/或
[0009]所述共刺激结构域选自以下至少一种蛋白的胞内结构域：CD27、CD28、4
‑
1BB、OX40、CD30、CD40、PD
‑
1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原
‑
1、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C和B7
‑
H3；和/或
[0010]所述信号转导结构域选自以下至少一种蛋白的胞内结构域：FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b和CD66d。
[0011]在其中一个实施例中，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。
[0012]在其中一个实施例中，所述嵌合抗原受体的氨基端还具有信号肽。
[0013]本专利技术还提供了一种核酸，其编码如上所述的嵌合抗原受体。
[0014]在其中一个实施例中，所述核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。
[0015]本专利技术还提供了一种重组载体，所述重组载体含有如上所述的核酸。
[0016]本专利技术还提供了一种CAR
‑
T细胞，其含有如上所述的核酸或被如上所述的重组载体所转化。
[0017]本专利技术还提供了如上所述的嵌合抗原受体、核酸、重组载体或CAR
‑
T细胞在制备用于治疗癌症的药物中的应用，例如多发性骨髓瘤、急性髓系白血病及多种实体肿瘤等。
[0018]本专利技术还提供了一种药物组合物，其包括如上所述的CAR
‑
T细胞，以及药学上可接受的辅料。
附图说明
[0019]图1为本专利技术实施例1中的嵌合抗原受体CCR1 CAR的结构示意图；
[0020]图2为本专利技术实施例1中的CCR1 CAR的表达载体结构示意图；
[0021]图3为本专利技术实施例2中的肿瘤细胞表达CCR1的检测结果；
[0022]图4为本专利技术实施例4中的流式检测CAR
‑
T细胞CAR表达情况数据；
[0023]图5为本专利技术实施例5中的ELISA检测CAR
‑
T细胞体外杀伤试验结果；
[0024]图6为本专利技术实施例6中的小鼠实验设计示意图；
[0025]图7为本专利技术实施例6中的H929
‑
luc荷瘤小鼠经各组CAR
‑
T细胞治疗后体内肿瘤生长情况；
[0026]图8为本专利技术实施例6中的H929
‑
luc荷瘤小鼠经各组CAR
‑
T治疗前后生存状况数据。
具体实施方式
[0027]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述，并给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0028]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向CCR1的嵌合抗原受体，其特征在于，包括从氨基端到羧基端依次连接的靶向CCR1的单链抗体、铰链区、跨膜结构域、共刺激结构域和信号转导结构域；所述靶向CCR1的单链抗体包括抗CCR1抗体轻链可变区和抗CCR1抗体重链可变区，所述抗CCR1抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述抗CCR1抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述铰链区选自以下至少一种蛋白的铰链区：CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD134、CD137、ICOS和CD154；和/或所述跨膜结构域选自以下至少一种蛋白的跨膜区：T细胞受体的α、β或ζ链、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、KIRDS2、OX40、CD2、CD27、ICOS、GITR、CD40、BAFFR、HVEM、SLAMF7、NKp80、CD160、CD19、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA1、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA
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6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、LFA
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1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、ITGB7、TNFR2、DNAM1、SLAMF4、CD84、CD96、CEACAM1、CRTAM、Ly9、PSGL1、CD100、SLAMF6、SLAM、...

【专利技术属性】
技术研发人员：李光超，罗敏，王学俊，刘劲松，周兆，
申请(专利权)人：广州百暨基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：