一种基于磁微粒发光法的细胞因子检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种基于磁微粒发光法的细胞因子检测试剂盒，属于检测试剂技术领域，包括捕获微球混合液、检测抗体、SA

【技术实现步骤摘要】
一种基于磁微粒发光法的细胞因子检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及一种基于磁微粒发光法的细胞因子检测试剂盒，属于检测试剂
，本专利技术是一种可以在一个微孔中，同时测定一个样本中的IL
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1β、IL
‑
2、IL
‑
4、IL
‑
6、IL
‑
10、TNF
‑
α六种细胞因子的检测试剂盒。

技术介绍

[0002]IL
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1β、IL
‑
2、IL
‑
4、IL
‑
6、IL
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10、TNF
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α是人体中常见的细胞因子，然而随着医疗水平的进步，IL
‑
1β、IL
‑
2、IL
‑
4、IL
‑
6、IL
‑
10、TNF
‑
α都能通过现有的检测试剂进行检测，然后再做进一步的治疗，然而当检测一个样本中的IL
‑
1β、IL
‑
2、IL
‑
4、IL
‑
6、IL
‑
10、TNF
‑
α时，需要单独的用六种检测试剂分别对IL
‑
1β、IL
‑
2、IL
‑
4、IL
‑
6、IL
‑
10、TNF
‑
α进行检测，增加了检测时间，降低了检测效率。

技术实现思路

[0003]本专利技术所要解决的技术问题在于：提供一种基于磁微粒发光法的细胞因子检测试剂盒，它解决了当检测一个样本中的IL
‑
1β、IL
‑
2、IL
‑
4、IL
‑
6、IL
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10、TNF
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α时，需要单独的用六种检测试剂分别对IL
‑
1β、IL
‑
2、IL
‑
4、IL
‑
6、IL
‑
10、TNF
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α进行检测的问题。
[0004]本专利技术所要解决的技术问题采取以下技术方案来实现：一种基于磁微粒发光法的细胞因子检测试剂盒，检测试剂盒包括捕获微球混合液、检测抗体、SA
‑
PE、实验缓冲液、洗涤缓冲液和工作液，(1)捕获微球混合液：悬浮液中包含有可辨识的聚苯乙烯微珠,聚苯乙烯微珠分别包被有如下抗体：抗人IL
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1β抗体、抗人IL
‑
2抗体、抗人IL
‑
4抗体、抗人IL
‑
6抗体、抗人IL
‑
10抗体、抗人TNF
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α抗体；(2)检测抗体：原液浓度为0.5mg/mL的情况下用蛋白稳定液稀释62.5倍，使浓度为0.8μg/mL；(3)SA
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PE：原液浓度为1mg/mL的情况下用蛋白稳定液稀释50倍，使浓度为2μg/mL；(4)工作液：原液浓度为40.6mg/mL的情况下用蛋白稳定液稀释6.7倍，使浓度为0.6mg/mL；(5)实验缓冲液：在1000mL的磷酸缓冲液中加入50gBSA，1mLTween
‑
20，3mL Proclin300和0.5mL RPE2520，搅拌30min分钟以上，待溶液澄清无杂质后，进行至少0.45μm的除菌过滤；(6)洗涤缓冲液：在1000mL的磷酸缓冲液中加入5mL Tween
‑
20，3mL Proclin300和0.3mL RPE2520，搅拌30min分钟以上，待溶液澄清无杂质后，进行至少0.45μm的除菌过滤。
[0005]作为优选实例，试剂盒的生产工艺主要有以下几步：
①
制备活化缓冲液，活化缓冲液主要成分包括：即8.0g/L的NaCl试剂，2.9g/L的Na2HPO4
·
12H2O试剂，2.4g/L的KCl试剂，2.4g/L的KH2PO4试剂，0.5g/L的Tris试剂，0.5mL/L的Tween20试剂，0.5g/L的SodiumAzide试剂。
[0006]②
微球的活化与包被，取1mL特定编号微珠加入1.5mL离心管，加入5
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50uLEDC(1
‑
乙基
‑
(3
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二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)和5
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50uLSuLfo
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NHS(N
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羟基硫代琥珀酰亚胺),加入10
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100ug特定抗体，涡旋混匀30秒，超声混匀30秒，2
‑
8℃摇匀过夜。
[0007]③
制备检测抗体：原液浓度为0.5mg/mL的情况下用蛋白稳定液稀释62.5倍，使浓度为0.8μg/mL。
[0008]④
制备SA
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PE：原液浓度为1mg/mL的情况下用蛋白稳定液稀释50倍，使浓度为2μg/mL。
[0009]⑤
制备工作液：原液浓度为40.6mg/mL的情况下用蛋白稳定液稀释6.7倍，使浓度为0.6mg/mL。
[0010]⑥
制备实验缓冲液：在1000mL的磷酸缓冲液中加入50gBSA，1mL Tween
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20，3mL Proclin300和0.5mL RPE2520，搅拌30min分钟以上，待溶液澄清无杂质后，进行至少0.45μm的除菌过滤。
[0011]⑦
制备洗涤缓冲液：在1000mL的磷酸缓冲液中加入5mL Tween
‑
20，3mL Proclin300和0.3mL RPE2520，搅拌30min分钟以上，待溶液澄清无杂质后，进行至少0.45μm的除菌过滤。
[0012]本专利技术的有益效果是：本专利技术包括捕获微球混合液、检测抗体、SA
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PE、实验缓冲液、洗涤缓冲液和工作液，生产工艺按照制备活化缓冲液、微球的活化与包被、制备检测抗体、制备SA
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PE、制备工作液、制备实验缓冲液和制备洗涤缓冲液进行生产，解决了当检测一个样本中的IL
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1β、IL
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2、IL
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4、IL
‑
6、IL
‑
10、TNF
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α时，需要单独的用六种检测试剂分别对IL
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1β、IL
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2、IL
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4、IL
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6、IL
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10、TNF
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α进行检测的问题，缩短了检测时间，从而提高了检测效率。
具体实施方式
[0013]为了对本专利技术的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于磁微粒发光法的细胞因子检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：(1)分别装有捕获微球混合液、检测抗体、SA
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PE、实验缓冲液、洗涤缓冲液和工作液的多个密封试剂瓶，(2)分隔并集中包装这些试剂瓶的试剂盒；微珠是大小均匀的聚苯乙烯微球，用不同的荧光染料对聚苯乙烯微球进行染色并编号，从而获得不同编码的微珠；所述捕获微球混合液中包含各蛋白检测微珠，具体为：所述检测微珠是在不同编码的微珠表面分别包被抗人IL
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1β抗体、抗人IL
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2抗体、抗人IL
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4抗体、抗人IL
‑
6抗体、抗人IL
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10抗体、抗人TNF
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α抗体。2.如权利要求1所述的一种基于磁微粒发光法的细胞因子检测试剂盒，其特征在于，所述微珠的直径为5
‑
7微米。3.如权利要求1所述的一种基于磁微粒发光法的细胞因子检...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏智敏，李志远，范元志，
申请(专利权)人：江苏纳迪芯生命科技研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：