本发明专利技术涉及一种新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒及应用，属于免疫学检测领域。所述试剂盒含有以下试剂：酶标二抗、磁标异硫氰酸荧光素抗体、异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原、定标溶液、阳性对照品、阴性对照品和样本稀释液；所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的新型冠状病毒抗原能与新型冠状病毒抗体特异性结合；所述的磁标异硫氰酸荧光素抗体能与所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的异硫氰酸荧光素特异性结合；所述酶标二抗能与新冠病毒抗体特异性结合；所述酶标二抗上的酶能降解所述发光底物液中的发光底物，使所述发光底物发光。采用所述的试剂盒检测抗体，具有较高的检测限、特异性和准确度的效果。度的效果。度的效果。
【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒及应用
[0001]本专利技术属于免疫学检测领域，特别地，涉及一种新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒及应用。
技术介绍
[0002]国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)于2020年2月11日宣布，新型冠状病毒(2019-nCoV)的正式分类名为严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)。而世界卫生组织(WHO)同日宣布，由这一病毒导致的疾病的正式名称为COVID-19。冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。
[0003]人首次感染新型病毒后，机体的免疫系统会对病毒进行免疫防御，产生特异性的抗体。一般1-2周出现IgM抗体，约4周左右产生IgG抗体。新冠病毒IgM/IgG抗体试剂的使用，为临床提供了血清学的证据，可与核酸检测方法联合使用，从而为新冠病毒的诊断提供更全面、准确的信息。
[0004]抗体测定试剂盒还可助力新型冠状病毒(SARS-CoV-2)疫苗的开发，用于检测接种疫苗后体内产生抗体的情况及疫苗的效果。
[0005]抗体测定试剂盒还可用于流行病学调查，了解人群中有多少个体接触过相应的新型病毒，有助于国家对疫情的整体判断和控制。
技术实现思路
[0006]本专利技术解决了现有技术中新型冠状病毒抗体检测特异性不强、检测限和准确度不高的技术问题。
[0007]按照本专利技术的第一方面，提供了一种新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒，所述试剂盒含有以下试剂：酶标二抗、磁标异硫氰酸荧光素抗体、异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原、定标溶液、发光底物液、阳性对照品和阴性对照品；所述酶标二抗为酶标IgM二抗或酶标IgG二抗；
[0008]所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的新型冠状病毒抗原能与新型冠状病毒抗体特异性结合；
[0009]所述的磁标异硫氰酸荧光素抗体能与所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的异硫氰酸荧光素特异性结合；
[0010]所述酶标二抗能与新冠病毒抗体特异性结合；
[0011]所述酶标二抗上的酶能降解所述发光底物液中的发光底物，使所述发光底物发光。
[0012]优选地，所述酶标二抗为酶标羊抗人二抗、酶标兔抗人二抗或酶标鼠抗人二抗。
[0013]优选地，所述酶标二抗为碱性磷酸酶标记的二抗，所述发光底物液中的发光底物
为3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷或3-氨基苯二甲酰肼。
[0014]优选地，所述酶标二抗为辣根过氧化物酶标记的二抗，所述发光底物液中的发光底物为3-氨基苯二甲酰肼。
[0015]优选地，所述酶标二抗为用4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐活化的碱性磷酸酶与用2-亚氨基硫烷盐酸盐巯基化的二抗反应得到。
[0016]按照本专利技术的另一方面，提供了任一所述的试剂盒应用于检测抗体的方法，包括以下步骤：
[0017](1)将定标溶液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品分别与异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原进行混合，使所述定标溶液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品中的新冠病毒抗体与所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的新型冠状病毒抗原特异性结合；
[0018](2)向步骤(1)得到的产物中加入磁标异硫氰酸荧光素抗体，使所述磁标异硫氰酸荧光素抗体与所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的异硫氰酸荧光素特异性结合，然后进行磁分离，弃上清液后，清洗沉淀物；将酶标二抗加入到上述清洗后的沉淀物中，使酶标二抗上的抗体与所述定标溶液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品的新冠病毒抗体特异性结合，然后进行磁分离，弃上清液后，清洗沉淀物；
[0019](3)向步骤(2)得到的产物中加入发光底物液，使所述发光底物液中的发光底物与特异性结合到所述定标溶液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品的新冠病毒抗体结合的酶标二抗中的酶反应，检测发光值；若待测样本的发光值/定标溶液的发光值≤1.0，则待测样本中的新型冠状病毒抗体为阴性；若待测样本的发光值/定标溶液的发光值＞1.0，待测样本中的新型冠状病毒抗体为阳性。
[0020]优选地，步骤(1)所述将定标溶液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品分别与异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原进行混合后，在20℃-37℃条件下反应10min-15min。
[0021]优选地，步骤(2)中加入磁标异硫氰酸荧光素抗体后，在20℃-37℃条件下反应10min-15min；步骤(2)中加入酶标二抗后，在20℃-37℃条件下反应10min-15min。
[0022]总体而言，通过本专利技术所构思的以上技术方案与现有技术相比，主要具备以下的技术优点：
[0023](1)本专利技术新型冠状病毒抗体的磁免疫化学发光检测试剂盒具有较高的检测限和特异性，并可以同时检测大批样本，技术上有明显的进步；通过对样本抗体的检测，可判定是否既往感染新型冠状病毒。
[0024](2)本专利技术提供的试剂盒应用于检测新型冠状抗体时，具有较高的检测限、特异性和准确度的效果，阴性参照品和阳性参照品的合格率均为100％，而且实现了全自动化检测，缩短检测时间，提高检测通量，减少人为操作误差。
附图说明
[0025]图1为本专利技术磁免疫化学发光检测试剂盒ROC曲线。
具体实施方式
[0026]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。此外，下面所描述的本专利技术各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
[0027]实施例1：试剂盒具体组分的制备
[0028]1、酶标抗体的制备
[0029]A、碱性磷酸酶活化
[0030]以DMSO为溶剂，配制10mM SMCC溶液；向29.5uL 10mM SMCC溶液中加入240uL 5mg/mL碱性磷酸酶，混匀后室温静置15min，再加入2.7uL 1M pH 7.3甘氨酸缓冲液，室温静置5min；0.01M pH 7.4的PBS溶液超滤脱盐，测定280nm的吸光度，酶浓度为：ABS280*稀释因子/1.0，酶质量：酶浓度*产物体积(mg/mL)，2～8℃保存。
[0031]B、羊抗人二抗活化
[0032]以0.1M硼酸盐为溶剂，配制pH 8.0的5mM EDTA.2H2O溶液；取400uL的3mg/mL的单克隆抗体用上述溶液作为流动相，过GE Healthcare Life Science的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有以下试剂：酶标二抗、磁标异硫氰酸荧光素抗体、异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原、定标溶液、发光底物液、阳性对照品和阴性对照品；所述酶标二抗为酶标IgM二抗或酶标IgG二抗；所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的新型冠状病毒抗原能与新型冠状病毒抗体特异性结合；所述的磁标异硫氰酸荧光素抗体能与所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的异硫氰酸荧光素特异性结合；所述酶标二抗能与新冠病毒抗体特异性结合；所述酶标二抗上的酶能降解所述发光底物液中的发光底物，使所述发光底物发光。2.如权利要求1所述的新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述酶标二抗为酶标羊抗人二抗、酶标兔抗人二抗或酶标鼠抗人二抗。3.如权利要求1所述的新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述酶标二抗为碱性磷酸酶标记的二抗，所述发光底物液中的发光底物为3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷或3-氨基苯二甲酰肼。4.如权利要求1所述的新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述酶标二抗为辣根过氧化物酶标记的二抗，所述发光底物液中的发光底物为3-氨基苯二甲酰肼。5.如权利要求1所述的新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述酶标二抗为用4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐活化的碱性磷酸酶与用2-亚氨基硫烷盐酸盐巯基化的二抗反应得到。6.如权利要求1-5任一所述的试剂盒应用于检测抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将定标溶液、待...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨祥良，杨海，张德军，杨宝凤，金伟，宋谦，
申请(专利权)人：武汉纳达康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。