一种制造技术

本发明专利技术公开了一种

【技术实现步骤摘要】
一种
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Zr标记人脐带间充质干细胞的方法


[0001]本专利技术涉及核医学
，具体涉及一种
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Zr标记人脐带间充质干细胞的方法。

技术介绍

[0002]人脐带间充质干细胞(hMSCs)是一种能分化成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞的多能干细胞。其具有强大的增殖能力，且参与构成造血微环境，因此被广泛应用于组织工程，细胞治疗和基因治疗。目前，人脐带间充质干细胞作为一个研究热点被广泛应用于再生医学和组织工程，特别是在骨、心血管和神经系统等疾病的领域。众所周知，干细胞治疗需要将干细胞移植到患者体内，因此确认干细胞在体内的迁移路径对判断干细胞移植的治疗效果至关重要。
[0003]目前常规的用于hMSCs体内分布定量研究的方法是解剖动物取样后用q
‑
PCR的方式检测。但是该方法不够灵敏，检测限比较高，做不到微量检测。
[0004]放射性同位素标记技术能够在活体中对干细胞移植后组织分布和定量进行监测，该技术主要原理是移植携带放射性同位素的干细胞后用单光子发射计算机断层成像术(SPECT)或正电子发射体层扫描(PET)在体扫描，根据各组织器官的放射活性比例可以确定干细胞在体内的数量分布。
[0005]目前有
111
铟(
111
In)、
99m
锝(
99m
Tc)和
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锆(
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Zr)等核素用于细胞标记研究。其中，
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Zr作为常用的PET核素，半衰期为78.4小时，可以连续追踪细胞至少14天，非常适合用来标记细胞。

技术实现思路

[0006]本专利技术要解决的技术问题之一是，针对现有技术中hMSCs体内分布定量的测定方法存在灵敏度低、检测限高、需要解剖动物取样之后才能检测等缺点，提供了一种通过放射性同位素
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Zr标记hMSCs，借助PET对hMSCs在体内的分布和迁移示踪，从而对其进行定量检测的方法。该方法检测灵敏度高，检测限低，可以活体成像。
[0007]本专利技术要解决的技术问题之二是，现有技术中使用的细胞同位素标记的方式存在标记效率低、同位素流出率高、DMSO对细胞的影响大等缺点。而且，现有技术中的细胞同位素标记的方式以实验员的手工操作为主，实验场景涉及化学合成、细胞培养等多种场景切换，时间漫长且难以做到方方面面的放射性防护。
[0008]针对上述技术问题，本专利技术提供的技术方案为：一种
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Zr标记人脐带间充质干细胞hMSCs的方法，所述方法包含的步骤为：将待标记hMSCs细胞与前体
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Zr
‑
oxine混合，孵育，得到
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Zr
‑
hMSCs细胞。
[0009]在本专利技术一优选实施方案中，所述待标记hMSCs细胞与所述前体
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Zr
‑
oxine混合后，所得到的混合液中DMSO的体积百分比不超过总体积的0.5％。
[0010]如技术方案所述的方法，所述待标记hMSCs细胞的重悬方式可为本领域常规，例如，使用DPBS重悬，或者可用含蛋白的HEPES重悬。
[0011]在本专利技术一具体实施方案中，使用含1～5％(v/v)人血白蛋白的HEPES重悬。
[0012]本专利技术中所用1～5％(v/v)的人血白蛋白为使用10～20mM HEPES将20％(v/v)的人血白蛋白(本领域常规)稀释后得到。
[0013]优选地，使用10mM HEPES将20％(v/v)的人血白蛋白(本领域常规)稀释至1％(v/v)。
[0014]如技术方案所述的方法，所述孵育优选室温振荡孵育；所述振荡孵育的转速优选650rpm；所述振荡孵育的时间优选30min。
[0015]如本专利技术技术方案所述的方法，所述前体
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Zr
‑
oxine可为本领域常规，在本专利技术一优选实施方案中，所述前体
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Zr
‑
oxine的制备包括以下步骤：
[0016](1)将pH 7.0～8.0的
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Zr草酸溶液与溶于HEPES的8
‑
羟基喹啉混匀；
[0017](2)加入氯仿，混匀；
[0018](3)分离出下层氯仿相，蒸发氯仿；
[0019](4)用DMSO复溶，得到所述前体
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Zr
‑
oxine。
[0020]在步骤(1)中，所述
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Zr草酸溶液的pH可为7.4。
[0021]在步骤(1)中，所述8
‑
羟基喹啉的浓度可为1mg/mL。
[0022]在步骤(1)中，所述混匀为室温振荡混匀；所述振荡混匀的转速优选3000rpm；所述振荡混匀的时间优选30min。
[0023]在步骤(2)中，加入的氯仿与步骤(1)中的8
‑
羟基喹啉优选为等体积。
[0024]在步骤(2)中，所述混匀可为室温振荡混匀；所述振荡混匀的转速优选3000rpm；所述振荡混匀的时间优选15min。
[0025]在步骤(3)中，所述蒸发氯仿的方式可为本领域常规，优选使用真空离心浓缩仪来蒸发氯仿。
[0026]在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本专利技术各较佳实例。
[0027]本专利技术所用试剂和原料均市售可得。
[0028]本专利技术比现有技术主要的改进点在于：
[0029]①
用HEPES缓冲液而不是氯仿来溶解8
‑
羟基喹啉，一则控制了pH条件的细微差异对标记结果的影响，二则大大提高了
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Zr和8
‑
羟基喹啉的结合效率。
[0030]②
用真空离心浓缩仪来蒸发氯仿，比起用氮气吹干的方法，缩小了最终干燥的
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Zr
‑
oxine的面积，使DMSO的用量减少。本专利技术DMSO的含量不超过0.5％，远低于现有技术中认为的DMSO含量不超过2％。
[0031]③
在细胞标记时保持低速振荡，相比不振荡的标记率要高，且对细胞无损伤。
[0032]本专利技术的积极进步效果在于：
[0033]1.本专利技术的同位素细胞标记方法标记的效率更高，同位素流出率低，投入产出比更高，并降低DMSO了对细胞的影响。
[0034]2.本专利技术的同位素细胞标记方法由于更换了8
‑
羟基喹啉的溶媒、并且在细胞标记时低速振荡孵育，加快了细胞结合前体的速度。
[0035]3.移植放射性同位素
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Zr标记的hMSCs在体内分布定量检测时，灵敏度高，检测限低、可以微量检测。
[0036]4.移植放射性同位素
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Zr标记的hMSCs在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种
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Zr标记人脐带间充质干细胞hMSCs的方法，其特征在于，所述方法包含的步骤为：将待标记hMSCs细胞与前体
89
Zr
‑
oxine混合，孵育，得到
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Zr
‑
hMSCs细胞。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待标记hMSCs细胞与所述前体
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Zr
‑
oxine混合后，所得到的混合液中DMSO的体积百分比不超过总体积的0.5％。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待标记hMSCs细胞用1～5％(v/v)的人血白蛋白重悬。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述孵育为室温振荡孵育。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述前体
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Zr
‑
oxine的制备包括以下步骤：(1)将pH 7.0～...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦天，许波华，周绍联，邵一飞，王舒哲，吕玉鹏，
申请(专利权)人：益诺思生物技术南通有限公司，
类型：发明
国别省市：