本发明专利技术公开了一种铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus)及其在微生物发酵生产己酸中的应用，属于微生物发酵技术领域，该菌株筛选于浓香型大曲酒优质老窖泥，命名为Enterococcus casseliflavus BF
【技术实现步骤摘要】
一种铅黄肠球菌及其在微生物发酵生产己酸中的应用
[0001]本专利技术涉及微生物发酵
，具体涉及到一种铅黄肠球菌及其在微生 物发酵生产己酸中的应用。
技术介绍
[0002]己酸，是一种常见的羧酸，天然存在于动物脂肪和油中，是中链脂肪酸 (MCFA)的最终产物之一。它是导致腐烂的银杏种子皮发出恶臭的化学物 质之一。与短链脂肪酸(SCFA)相比，己酸具有更长的疏水碳链，其在20℃ 下的溶解度仅为10.82g/L。己酸的分离纯化比乙醇蒸馏消耗更少的能量。 同时，从能量的角度来看，己酸分子的O/C值较低，能量密度较高，使其 成为更有利的高附加值产品。己酸可用作生产液体燃料的前体，也可用作合 成化学品(如食品和动物饲料添加剂)的前体。此外，己酸还可用于生产农 业用“绿色”抗菌剂、防腐剂、润滑剂、染料、橡胶和生物降解塑料。
[0003]目前，己酸的工业生产主要依靠原油的大规模化学合成。从经济角度来 看，通过化学合成生产己酸的成本相对较低，但这些生产方法需要高能耗并 造成严重污染。与典型的化学合成方法相比，微生物发酵生产己酸由于以下 优点而越来越受到关注：(1)发酵过程中产生的污染物较少，(2)该过程 有效地利用了有机废物，(3)反应条件一般较温和。现有大多数报道的己 酸生产微生物是厌氧菌，包括梭状芽孢杆菌、芽孢杆菌、瘤胃球科和巨球形 菌，它们可以使用乙醇、乳酸、葡萄糖、葡萄糖和葡萄糖来积累己酸，和 D
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半乳糖醇作为主要碳底物。此外，己酸菌通常被认为是浓香型白酒生态系 统中最重要的功能微生物。因此，己酸菌的分离、筛选、鉴定和育种对于提 高窖泥中己酸菌的数量和质量是具有非常重要的意义。
技术实现思路
[0004]针对上述的不足，本专利技术的目的是提供一种铅黄肠球菌(Enterococcuscasseliflavus)及其在微生物发酵生产己酸中的应用。该菌株对生长性能、免疫和 具有潜在的益生影响，优化了发酵培养基，提高了己酸的产量。该己酸菌可进 一步用于己酸生产，增强接种剂应用浓香型白酒生产过程。
[0005]为达上述目的，本专利技术采取如下的技术方案：
[0006]本专利技术提供一种铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus)，该菌株筛选于浓香 型大曲酒优质老窖泥，命名为Enterococcus casseliflavus BF
‑
1，保藏于中国典型 培养物保藏中心，保藏日期为2021年7月13日，保藏地址为湖北省武汉市武 昌区八一路299号，保藏编号为CCTCC NO:M 2021871。
[0007]本专利技术还提供上述铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus BF
‑
1)在微生物 发酵生产己酸中的应用。
[0008]进一步地，上述应用中的参数为：。
[0009]一种适用于白酒生产的接种试剂，包括上述铅黄肠球菌(Enterococcus
casseliflavus BF
‑
1)。
[0010]综上所述，本专利技术具有以下优点：
[0011]1、本专利技术提供了一种铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus BF
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1)在微生 物发酵生产己酸中的应用，该菌株对生长性能、免疫和具有潜在的益生影响， 优化了发酵培养基，提高了己酸的产量，在现有单一变量优化的基础上，己酸 产量可达3.01g/L；该己酸菌可进一步用于己酸生产，增强接种剂应用浓香型白 酒生产过程。
[0012]2、本专利技术中铅黄肠球菌适宜生长温度为33℃
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37℃，最适生长温度为35℃； 具有较好的酸碱耐受性，pH耐受范围为1～10，最适pH为7；耐乙醇浓度至5％； 耐己酸浓度高达30g/L。
附图说明
[0013]图1为本专利技术中铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus BF
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1)的镜检图；
[0014]图2为本专利技术中铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus BF
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1)序列进化树 图；
[0015]图3为本专利技术中PCR产物电泳图；图4为本专利技术中铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus BF
‑
1)产己酸量检 测结果。
具体实施方式
[0016]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例， 对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解 释本专利技术，并不用于限定本专利技术，即所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施 例，而不是全部的实施例。
[0017]因此，以下对提供的本专利技术的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的 本专利技术的范围，而是仅仅表示本专利技术的选定实施例。基于本专利技术的实施例，本 领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属 于本专利技术保护的范围。
[0018]实施例1铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus BF
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1)的分离和筛选
[0019]采用五点采样法采集了中国安徽省一家浓香型白酒工厂的窖泥样品。每点 取50g窖泥，加入密封袋，将5g窖泥放入装有45mL无菌水的150mL三角形 瓶中；摇晃良好后，将10％接种物接种到乙酸钠富集培养基中。富集培养基含 有以下物质(每1000mL)：醋酸钠15g、酵母提取物10g、硫酸镁7H2O 0.2g、 KH2PO
4 7g、磷酸氢二钾7g、(NH4)2SO
4 0.5g、L
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半胱氨酸0.5g、生物素0.02％、 乙醇20mL；pH 7.0，在35℃下培养4天。然后吮吸200μL窖泥培养液，涂在 固体板上，放入厌氧罐中，35℃培养至菌落生长。选择在平板上生长的单个菌 落，并在固体平板上划线三次。
[0020]将单个菌落接种于100mL电镜中，35℃厌氧培养12小时，培养2代，获 得种子液。将种子液接种到接种量为5％的发酵培养基中，35℃厌氧静培养10 天。
[0021]从坑泥中共筛选出41株，其中19株具有产生己酸的能力。菌株BF
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1的己 酸产率最高(0.88g/L)。因此，选择BF
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1菌株进行进一步研究。
[0022]实施例2铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus BF
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1)的鉴定
[0023](1)菌株形态、培养特征观察
[0024]将实施例1复筛获得的己酸产率最高的菌株接种在乙酸钠富集分离固体培养基，37℃培养18h，观察菌落的形态特征，其镜检图如图1所示，菌落呈浅黄色，圆形扁平，表面湿润，光滑，边缘整齐，不透明，为革兰氏阴性菌。
[0025](2)生理生化特性测定
[0026]生理生化特性测定参照《常见细菌系统鉴定手册》进行，生理生化实验本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus)，其特征在于，所述铅黄肠球菌命名为Enterococcus casseliflavus BF
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1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2021年7月13日，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号，保藏编号为CCTCC NO:M 20...
【专利技术属性】
技术研发人员：邹伟，李韬，郑佳，陈聪，
申请(专利权)人：四川轻化工大学，
类型：发明
国别省市：
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