用于治疗肿瘤的药物组合物、药盒和方法技术

本发明专利技术公开了一种用于治疗对象中肿瘤的组合物，其包含治疗有效量的携带靶向CTLA4的miRNA的外泌体和治疗有效量的表达免疫刺激剂或表达免疫刺激剂和抗PD

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗肿瘤的药物组合物、药盒和方法


[0001]本专利技术涉及一种用于治疗肿瘤的药物组合物，特别涉及包含治疗有效量的携带靶向CTLA4的miRNA的外泌体和治疗有效量的溶瘤性单纯疱疹病毒（oHSV）的药物组合物。本专利技术还涉及一种包含携带靶向CTLA4的miRNA的外泌体和oHSV的药盒，以及使用所述药物组合物和所述药盒治疗肿瘤的方法。

技术介绍

[0002]癌症作为一种疾病是多方面的敌人，它可以屈服于指定的治疗方法，也可以对各种疗法产生抵抗力。肿瘤内的细胞子集对常规治疗方式有抵抗力，并且可以导致疾病复发。
[0003]手术治疗癌症是常见的局部治疗。除了血液系统的某些恶性肿瘤（例如白血病，淋巴瘤等）外，其他各种恶性肿瘤还具有一种或多种可以通过手术移除的有形实体瘤。但是，手术总是有一定的风险，并且经常有其他并发症或潜在的器官功能障碍。
[0004]迄今为止，非手术治疗癌症（主要是常规化学疗法、靶向生物疗法和放射疗法）尚未取得完全令人满意的结果。持续存在的问题包括靶标选择性低、耐药性、无法有效解决转移性疾病和严重的副作用。相反，目前整体上激发宿主免疫力来诱导针对肿瘤的全身反应的免疫疗法提供了许多临床前景。
[0005]溶瘤性单纯疱疹病毒（oHSV）正被广泛地进行实体瘤治疗的研究。溶瘤性单纯疱疹病毒在整体上相比传统癌症疗法有很多优点。具体而言，oHSV通常包含突变以使它们易受先天性免疫的抑制。因而，它们能够在癌细胞中复制，而不能在正常细胞中复制，因为在这些癌细胞中，一种或多种对感染的先天免疫反应受损害，而在正常细胞中这些免疫反应是完整的。oHSV通常被直接递送至肿瘤实体中，病毒可以在肿瘤实体中复制。因为病毒被递送至靶组织而不是全身性地给药，所以这种抗癌药不会产生任何副作用。病毒的一个特征是能够诱导获得性免疫反应，这导致它们不能被多次施用。oHSV已被多次施用至肿瘤，但没有证据显示它们的效力丧失或诱导出副反应（如炎症反应）。HSV是大的DNA病毒，其能够将外源DNA加入到它们的基因组中并在施用至肿瘤后调节这些基因的表达。适合与oHSV一起使用的外源基因是那些能够帮助对肿瘤诱导出获得性免疫反应的基因。
[0006]克服细胞先天免疫反应的缺陷决定了该病毒作为抗癌剂能够溶瘤的肿瘤范围。缺失的序列越多，能够被治疗的癌细胞的范围就越窄，oHSV的有效性取决于被缺失的病毒基因的功能。大多数最近的oHSV加入了至少一个细胞基因以支持其抗癌活性。
[0007]oHSV疗法的成功取决于对癌细胞的破坏程度。在oHSV疗法的早期开发过程中就意识到，HSV无法单独杀死实体瘤中的所有癌细胞，oHSV治疗不太可能可以有效地消除所有癌细胞，在临床试验中，oHSV对肿瘤的破坏必须包括对肿瘤的获得性免疫反应。进一步的研究显示，由受感染的肿瘤细胞碎片引起的抗肿瘤免疫反应可通过加入细胞因子而被放大。无细胞因子基因的oHSV与加入免疫刺激性细胞因子的oHSV的比较结果证实了这种猜想并且最终导致将GM
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CSF加入到oHSV中，用于治疗黑素瘤。
[0008]加入编码免疫刺激性细胞因子的基因可增强对肿瘤的免疫反应，但不会有效地增
强由T细胞导致的细胞毒作用，后者对于抗肿瘤作用至关重要。肿瘤通过PD
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1和CTLA4抑制途径来使免疫系统沉默。PD
‑
1在活化的T细胞上以及其他造血细胞上表达，而CTLA4表达于活化的T细胞，包括调节性T细胞。肿瘤使用PD
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1和CTLA4抑制途径来逃避宿主免疫反应。
[0009]尽管在临床前和临床环境中进行了广泛的研究和测试，但用于治疗肿瘤的方法仍然存在未满足的需求。
[0010]概述在一方面，本专利技术涉及一种药物组合物，其包含治疗有效量的携带靶向CTLA4的miRNA的外泌体，以及治疗有效量的表达免疫刺激剂或免疫刺激剂和抗PD
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1抗体的溶瘤性单纯疱疹病毒（oHSV）。
[0011]外泌体包含外泌体包装相关的基序（下文中也指“外泌体基序”），该基序任选地通过连接子可操作地连接至靶向CTLA4的miRNA。在一个实施方案中，所述外泌体包含抑制量的靶向CTLA4的miRNA，其中靶向CTLA4的miRNA具有结合CTLA4的mRNA的种子序列；并且外泌体基序与靶向CTLA4的miRNA的种子序列可操作地连接以增强靶向CTLA4的miRNA包装至外泌体中。在一些实施方案中，外泌体基序位于靶向CTLA4的miRNA的种子序列的下游并与其共价连接。在一些实施方案中，外泌体基序位于靶向CTLA4的miRNA的种子序列的下游并通过连接子与其连接。在一些实施方案中，外泌体基序是通过突变靶向CTLA4的miRNA的除种子序列以外的一个或多个核酸而获得的。在一些实施方案中，外泌体基序是通过两个单个外泌体基序的组合产生的双倍基序。在一些实施方案中，当可操作地连接时，靶向CTLA4的miRNA与外泌体基序共享至少一个或两个核苷酸。
[0012]oHSV是表达免疫刺激剂或表达免疫刺激剂和抗PD
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1抗体的重组溶瘤HSV
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1。
[0013]本专利技术的另一方面涉及一种药物组合物，其包含治疗有效量的携带靶向CTLA4的miRNA的外泌体、治疗有效量的oHSV和药学上可接受的载体。外泌体包含外泌体包装相关的基序，该基序任选地通过连接子可操作地连接至靶向CTLA4的miRNA。oHSV表达免疫刺激剂，或表达免疫刺激剂和抗PD
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1抗体。
[0014]本专利技术的另一方面涉及一种用于治疗肿瘤的药盒，其包含携带靶向CTLA4的miRNA的外泌体和表达免疫刺激剂或表达免疫刺激剂和抗PD
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1抗体的oHSV。药盒可以进一步包含使用外泌体和oHSV治疗肿瘤的说明。
[0015]本专利技术的另一方面涉及一种用于治疗对象中的肿瘤的方法，该方法包含同时向该对象施用治疗有效量的携带靶向CTLA4的miRNA的外泌体和治疗有效量的表达免疫刺激剂或表达免疫刺激剂和抗PD
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1抗体的oHSV。
[0016]本专利技术的另一方面涉及一种用于在对象中增强oHSV疗法的功效的方法，除oHSV疗法外，该方法包含向有此需要的对象施用治疗有效量的携带靶向CTLA4的miRNA的外泌体。
[0017]通过阅读下面的描述，将容易获得本专利技术的其他方面。
附图说明
[0018]图1。图A是编码靶向CTLA4的miRNA的质粒的示意图。该质粒由编码EGFP的序列组成，在其3'
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UTR中包含编码设计的靶向CTLA4基因的miRNA（miR
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CTLA
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4）的序列。图B示出了靶向小鼠CTLA4基因的miRNA的核苷酸序列。以粗体、斜体和下划线突出显示的核苷酸表示外泌体包装相关的基序（外泌体基序）。图C示出了设计的miRNA对CTLA4的下调。将接种在24
孔板中的HEp
‑<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于治疗对象中肿瘤的药物组合物，其包含：治疗有效量的外泌体，治疗有效量的溶瘤性单纯疱疹病毒，以及药学上可接受的载体，其中所述外泌体包含抑制量的靶向CTLA4的miRNA和外泌体基序，所述外泌体基序与所述靶向CTLA4的miRNA的种子序列可操作地连接以增强所述靶向CTLA4的miRNA包装至所述外泌体中，并且其中所述溶瘤性单纯疱疹病毒表达免疫刺激剂，或表达免疫刺激剂和抗PD
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1抗体。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述靶向CTLA4的miRNA的种子序列包含SEQ ID NO. 1至SEQ ID NO. 4的核酸序列中的任何一个。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述外泌体基序为选自SEQ ID NO. 21至SEQ ID NO. 49的核酸序列。4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述外泌体基序位于所述靶向CTLA4的miRNA的种子序列的下游并与其共价连接。5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述外泌体基序是通过突变所述靶向CTLA4的miRNA的除种子序列以外的一个或多个核酸而获得的。6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述外泌体基序是通过两个单个外泌体基序的组合产生的双倍基序，其中所述两个单个外泌体基序中的任何一个是选自SEQ ID NO. 21至SEQ ID NO. 47的核酸序列。7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述双倍基序具有SEQ ID NO. 48的核酸序列。8.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中，当可操作地连接时，所述靶向CTLA4的miRNA和所述外泌体基序共享至少一个核苷酸或两个核苷酸或通过连接子连接。9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述连接子由两个或更多个选自腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胞嘧啶（C）、胸腺嘧啶（T）和尿嘧啶（U）的核苷酸组成。10.根据权利要求9所述的组合物，其中所述连接子是
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GC
‑
。11.根据权利要求1至10中任一项所述的组合物，其中，当可操作地连接时，所述靶向CTLA4的miRNA和所述外泌体基序具有SEQ ID NO. 7的核酸序列。12.根据权利要求1至11中任一项所述的组合物，其中所述免疫刺激剂选自GM
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CSF、IL
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2、IL
‑
5、IL
‑
12、IL
‑
15、IL
‑
24和IL
‑
27。13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述免疫刺激剂是IL
‑
12。14.根据权利要求1至13中任一项所述的组合物，其中所述溶瘤性单纯疱疹病毒表达IL
‑
12。15.根据权利要求1至14中任一项所述的组合物，其中所述溶瘤性单纯疱疹病毒表达IL
‑
12和抗PD
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1抗体。16.根据权利要求1至15中任一项所述的组合物，其中所述溶瘤性单纯疱疹病毒是表达IL
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12和抗PD
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1抗体的HSV
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1。17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述HSV
‑
1是HSV
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1的F毒株。18.根据权利要求17所述的组合物，其中天然骨架的117005至132096的核苷酸序列片
段被删除。19.根据权利要求1至18中任一项所述的组合物，其中所述肿瘤是恶性肿瘤。20.根据权利要求19所述的组合物，其中所述恶性肿瘤选自黑色素瘤、纤维肉瘤、粘液肉瘤、软骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺瘤、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯瘤、宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、视网膜母细胞瘤、胃癌和前胃癌。21.根据权利要求1至20中任一项所述的组合物，其中所述对象是人。22.一种用...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓庆，周旭莎，伯纳德，
申请(专利权)人：深圳市亦诺微医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：