一种药物靶点筛选蛋白质芯片试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及筛选药物靶点技术领域，具体涉及一种药物靶点筛选蛋白质芯片试剂盒。所述试剂盒包括靶点芯片、样品稀释液、反应检测液和清洗液。本发明专利技术通过生物信息学、网络药理学分析，对药物特别是中药小分子药物、天然产物的高频靶点进行了遴选、优化组合，并提出了一种蛋白质芯片制备新方法，进而研发了用于药物靶点筛选的蛋白质芯片试剂盒。与其他产品相比，本发明专利技术填补了无专业药物靶点筛选芯片和试剂盒的空白，具有快速、准确、高效、高通量识别药物靶点的优点。物靶点的优点。物靶点的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种药物靶点筛选蛋白质芯片试剂盒


[0001]本专利技术涉及筛选药物靶点
，具体涉及一种药物靶点筛选蛋白质芯片试剂盒。

技术介绍

[0002]随着现代分子生物学技术的发展，药理学的研究尤其是来源于中药、天然产物的活性分子的研究进入了用分子去解释其作用机制的时代。蛋白质构成了生命的基本结构，参与重要的生命进程和生理过程，尤其是那些在级联调控中发挥重要功能的分子，更是被作为解释重大疾病的关键机制，也成为新药研发的重要靶点。
[0003]中药中存在天然活性物质，可以直接与细胞中的蛋白质发生直接结合，进而调控生理或者病理过程。很多研究发现，中药中存在天然活性小分子，能够直接与蛋白质结合，发挥抗炎、抗肿瘤的效应。中药
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靶蛋白的研究，已经成为中药研究的热点，也是现代分子生物学技术应用于传统中药研究中的重要组成部分。研究和发现中药靶点有助于中药的机制的研究，是中药活性分子成药过程中的必备环节，是中药现代化的关键步骤，也有助于深入了解调控疾病发生和发展的新的重要靶点，为开发新的分子药物提供新的思路。
[0004]至今为止，药物靶点的研究方法是通过基于质谱的高通量的技术。该方法价格高昂，周期长，混合样品容易出现相互干扰，出现假阳性，且检测结果依赖于质谱的分辨率，验证手段复杂。另外，市场上存在的为数不多的中药靶点筛选的产品主要是人类全蛋白质芯片。该产品价格高昂，而且每次只能处理一个样品，通量小。能够通过基因工程得到的人蛋白质都被列举在芯片上，没有针对性。检验结果效率很低，尽管能够得到药物靶点蛋白的结果，但是并不针对药物特异性的靶点，检测结果中还有很多非靶点蛋白，而非靶点蛋白对于研究来说结果冗余。
[0005]中国专利申请CN1719253A公开了一种适用于高通量药物（非药物靶点）筛选的蛋白质芯片，及其制备技术及其检测方法。具体的，该专利技术的高通量筛选反向蛋白质芯片是将单一药物作用靶点相关的蛋白质以薄层形式均匀固定于固相载体表面，然后在蛋白层上以点阵形式分布待筛选样品，将选自荧光、同位素以及其他可检测物质的标记物标记的受体蛋白特异性配体与固相载体表面受体蛋白进行结合，检测结果显示背景为结合配基均匀信号，待测样品与受体蛋白有特异性结合后，阳性结果为反向的暗点。采用该专利技术所述反向蛋白质芯片技术能够实现一个药物作用靶点对化合物、天然产物、中药提取物在生物芯片上的大量快速筛选。但是该芯片不适用于药物靶点筛选，首先，靶点蛋白丰富，不是所有靶点蛋白都能找到适用的配体，也不是所有的配体都能够进行标记，再次配体结合的位点与药物结合位点不一定重合，与药物不一定能够形成竞争结合；然后，该芯片存在靶点通量放大的问题，靶蛋白数量放大后，同时进行多种配体结合的条件和环境难以控制。该芯片在单靶点筛选药物时可能有一定优势，但是作为高通量药物靶点筛选的芯片仍然困难。本专利技术通过遴选适用于药物尤其是天然产物、中药分子的靶点组合，形成了特色的用于药物靶点筛选的蛋白质组芯片。
[0006]随着蛋白质研究的进行，一些关键蛋白作为新的药物被发现在抗炎、抗肿瘤中发挥重要作用，比如PD
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1/L1，PD
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2/L2，CTLA
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4，IL
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2，TNF
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α等。研究发现，中药小分子可以与这些重要分子发生直接结合，引发一系列的级联调控进而发挥抗炎抗肿瘤的作用。因此，研究和开发中等通量的分子生物学方法，去筛选和检测中药小分子、天然产物以及其他药物分子的靶点，并在中药现代化和新靶点筛选领域推广应用快速、高效、精准、经济实用的产品，是解决药物分子机制研究的关键。
[0007]为了解决这个问题，本专利技术提供了一种特异性检测药物（特别是中药小分子药物、天然产物）和药物靶点蛋白相互作用等的蛋白质芯片试剂盒的产品。通过生物信息学和网络药理学方法，综合文献以及专利技术人最新的研究成果（Annexin A2作为中药分子绿原酸的作用靶点(Wang, Du and Chen 2020)、谷胱甘肽合成酶GSS作为虎杖苷的作用靶点(Chen et al. 2020)），确定了一批适用于药物特别是中药小分子高频出现的药物靶点组合，并开发了试剂盒产品。
[0008]在开发试剂盒的过程中，制备芯片过程中存在行业中普遍的一个技术痛点，就是芯片基片的制备问题，普通的醛基、环氧基芯片蛋白固定效率低，凝胶、PVDF等基底膜芯片的制作技术门槛高且制作成本高，各有优缺点。上述芯片的点制思路都是通过芯片的修饰来完成蛋白质的固定，本专利利用反向思维（由修饰基片变为更换点样液），通过改进芯片点样液组成，芯片点样液点样时为液体，蛋白与点样液体固定到芯片基片时会慢慢的变成凝胶固体，这样在有蛋白的点的地方就形成了固体的凝胶，该技术方法操作简单，成本低，普通的光学玻璃片就可以应用，大大的降低了蛋白质芯片的技术门槛，为该芯片的应用推广提供了技术手段。
[0009]综上，目前的专利和文献虽然有一些用于检测的抗体芯片、蛋白质组芯片出现，但是专业的用于药物靶点筛选蛋白质芯片及试剂盒还没有出现。
[0010]因此，开发一种能解决上述技术问题的药物靶点筛选蛋白质芯片试剂盒是非常必要的。

技术实现思路

[0011]本专利技术的目的是克服现有技术的不足而提供一种快速、准确、高效、高通量、低成本识别药物靶点的蛋白质芯片试剂盒。
[0012]本专利技术是通过以下技术方案予以实现的：一种药物靶点筛选蛋白质芯片试剂盒，包括药物靶点芯片、样品稀释液、反应检测液和清洗液。
[0013]优选地，所述药物靶点芯片由芯片、靶蛋白和点样缓冲液制备得到。
[0014]更优选地，所述靶蛋白包括激酶、免疫检查点、信号通路调控蛋白、炎症因子等。
[0015]更优选地，所述靶蛋白包括ALK1；CDK1；CDK2；CDK4；EPHA1；DDR1；FLT1；MEK1；HDAC4；Lck；AKR1B1；TRKa；ABL1 ；ACK；AKT1；ALK4；AurA；AXL ；BTK；CK1；CLK3 ；DAPK1；DCLK1；DYRK3 ；EphB1；FES；FGFR1；FGR；FLT3；GALK1；GSK3B；ITK；JNK1；c
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Kit ；Mer ；PDGFRA ；PRKD2 ；PRKAR1A ；PLK1 ；RET ；MST3 ；TGFBR2 ；TIE2 ；NEDP1；PKM2；ROR1；CKB；HGFR；HTRA2；HER3；DKK
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1；ABP1；ACYP1；ALCAM；ANXA2；ANGPTL4；ApoA1；ApoE；B2M；CD80/B7
‑
1；Bcl
‑
w；BTLA；BTN1A1；CA
‑
I；CALCB；CD137；CD47；CD244；CD27；CD28；CD40；CD59；CD62P；CD86；
CDH1；CDH3；CRYAA；CTLA
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4；CXCL1；CXCL7；DCBLD2；Decorin本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种药物靶点筛选蛋白质芯片试剂盒，其特征在于，包括药物靶点芯片、样品稀释液、反应检测液和清洗液；所述药物靶点芯片由芯片、靶蛋白和点样缓冲液制备得到；所述点样缓冲液按照重量份数计，包括如下组分：0.000001
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0.00001份四甲基乙二胺，0.1
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2.0份过硫酸铵，30
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70份聚乙烯醇，5
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15份丙烯酰胺\甲叉丙烯酰胺，其中丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺质量比为29:0.5
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1，且pH=6.0
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8.0。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述靶蛋白包括ALK1；CDK1；CDK2；CDK4；EPHA1；DDR1；FLT1；MEK1；HDAC4；Lck；AKR1B1；TRKa；ABL1 ；ACK；AKT1；ALK4；AurA；AXL ；BTK；CK1；CLK3 ；DAPK1；DCLK1；DYRK3 ；EphB1；FES；FGFR1；FGR；FLT3；GALK1；GSK3B；ITK；JNK1；c
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Kit ；Mer ；PDGFRA ；PRKD2 ；PRKAR1A ；PLK1 ；RET ；MST3 ；TGFBR2 ；TIE2 ；NEDP1；PKM2；ROR1；CKB；HGFR；HTRA2；HER3；DKK
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1；ABP1；ACYP1；ALCAM；ANXA2；ANGPTL4；ApoA1；ApoE；B2M；CD80/B7
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1；Bcl
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w；BTLA；BTN1A1；CA
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I；CALCB；CD137；CD47；CD244；CD27；CD28；CD40；CD59；CD62P；CD86；CDH1；CDH3；CRYAA；CTLA
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4；CXCL1；CXCL7；DCBLD2；Decorin；EFNA3；EGF；Ephrin
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B2；FABP1；FGF
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1；FGF
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2；FKBP3；FKBP4；GFRA1；GITR；HB
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EGF；HVEM；ICAM
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2；IFNGR1；IFNα2a；IGF
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I；IL
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10RB；IL
‑
17A；IL
‑
18RAcP；IL
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1R3；IL
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2；ISG15；KRAS(G12C)；KRAS4B(G12V, N
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6His)；LEPR；LGALS3；LILRB1；LILRB2；M
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CSFR；MYDGF；NKG2
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A；PD
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1；PDGFRB；PD
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L1；PRDX1；S100A6；SIRPA；SIRPB2；SLAMF7；SNCG；SUMO1；TACI；TNFRSF10B；TNFRSF10...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈鹏，杨洪军，崔钊，黎彩凤，
申请(专利权)人：中国中医科学院医学实验中心，
类型：发明
国别省市：