高组织再生能力的软骨细胞培养物制造技术

本发明专利技术的目的在于提供高组织再生能力的软骨细胞培养物。本发明专利技术通过包括用热可逆性聚合物培养从软骨组织分离的细胞群的步骤的方法来解决。法来解决。法来解决。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】高组织再生能力的软骨细胞培养物


[0001]本专利技术涉及制备软骨细胞培养物的方法、通过该方法制备的软骨细胞培养物、以及使用软骨细胞培养物的治疗方法。

技术介绍

[0002]变形性关节炎的特征在于关节组织的进行性的软骨损伤，由包括老化、关节损伤和肥胖的各种因素而引起，特别是成为老年人关节能力丧失或硬化的原因。
[0003]关节软骨组织由存在于骨端的关节面的薄透明软骨组成。透明软骨具有通过软骨细胞外基质(ECM)填充软骨细胞的细胞间隙的组织结构，所述软骨细胞外基质(ECM)通过透明质酸
‑
聚集蛋白聚糖网络和II型胶原纤维等之间的相互作用而形成高级结构。这样的ECM的分解较大地参与了OA中的软骨组织的损伤过程。
[0004]软骨组织损伤时ECM中的II型胶原纤维被破坏，由此引起透明质酸或聚集蛋白聚糖的游离。游离的透明质酸和聚集蛋白聚糖引起软骨细胞的凋亡和作为炎症性细胞因子的白细胞介素
‑
1的产生，由此促进MMP、ADAMTS及HYBID这样的ECM分解酶的产生和分泌，进而加速软骨组织中的ECM的分解。
[0005]像这样ECM被分解的软骨组织的弹性显著降低而变脆，因此导致即使在轻负荷下也容易损伤的恶性循环。另外，关节组织与通常的组织不同，没有血液供给，而是通过扩散与软骨组织内外进行物质交换，也没有细胞的流入，因此，如变形性关节炎那样，一旦组织的恒常性被破坏，则由于维持其变性状态，因此修复困难(非专利文献1、2)。
[0006]作为这样的变形性关节炎的治疗，可以通过利用来自从关节软骨的非负重部采集的健康软骨组织的软骨细胞的自体培养软骨细胞移植(Autologous Chondrocyte Implantation；ACI)、基质诱导性自体培养软骨细胞移植(Matrix
‑
Induced Autologous Chondrocyte Implantation；MACI)。这样的移植只要如外伤性膝软骨损伤那样在移植部位的周围存在健康软骨组织即是有效的，但即使对如变形性关节炎那样的软骨组织的恒常性被破坏的变性部位实施，虽然观察到暂时的改善，但移植片中的软骨细胞立即因凋亡而死亡，或者形成纤维软骨，无法得到充分的治疗效果(非专利文献3)。
[0007]在像这样的变形性关节炎的治疗中，要求使软骨组织的变性状态正常化，能够长期修复、维持的治疗。
[0008]现有技术文件
[0009]非专利文献
[0010]非专利文献1：Chen等,骨研究.2017年1月17日；5:16044.doi:10.1038/boneres.2016.44.eCollection 2017.(Chen et al.,Bone Res.2017Jan17；5:16044.doi:10.1038/boneres.2016.44.eCollection 2017.)
[0011]非专利文献2：Zhang等,骨研究，第4卷,文章编号:15040,2016(Zhang et al.,Bone Research volume4,Article number:15040,2016)
[0012]非专利文献3：Niemeyera.等.关节,第23卷,第3期,2016年6月,426
‑
435页
(Niemeyera.et al.The Knee,Volume 23,Issue 3,June 2016,Pages 426
‑
435)

技术实现思路

[0013]技术问题
[0014]本专利技术提供制备高组织再生能力的软骨细胞培养物的方法、通过该方法制备的软骨细胞培养物、以及使用软骨细胞培养物的治疗方法。
[0015]解决问题的方案
[0016]即，本专利技术涉及下述内容。
[0017][1]一种制备高组织再生能力的软骨细胞培养物的方法，其包括用热可逆性聚合物培养从软骨组织分离的细胞群的步骤。
[0018][2]根据[1]所述的方法，其中，组织再生能力为软骨细胞培养物的选自SOX9、COL2A1、miR140及miR21中的一种以上的基因的表达能力、miRNA的保持能力、干细胞的含量、或者透明质酸的分泌能力。
[0019][3]根据[2]所述的方法，其中，miRNA为miR140。
[0020][4]根据[2]或[3]所述的方法，其中，干细胞为多能干细胞或分化潜力高的成体干细胞。
[0021][5]根据[2]‑
[4]中任意一项所述的方法，其中，干细胞的含量为软骨细胞培养物中的1
‑
2岩藻糖或α2
‑
6唾液酸的含量。
[0022][6]根据[1]‑
[5]所述的方法，其中，软骨组织来自50岁以上的变形性关节炎的对象。
[0023][7]根据[1]‑
[6]所述的方法，其中，热可逆性聚合物为未添加血清以外的生长因子的热可逆性聚合物。
[0024][8]一种软骨细胞培养物，其通过[1]‑
[7]所述的方法制备。
[0025][9]一种治疗对象的疾病的方法，其包括将有效量的[8]所述的软骨细胞培养物施用于需要的对象。
[0026][10]根据[9]所述的治疗方法，其中，疾病为变形性关节炎。
[0027][1]一种含TGP的组合物，其用于修复损伤的软骨组织。
[0028][2]根据[1]所述的组合物，其中，损伤的软骨组织为由于变形性关节炎而损伤的软骨组织。
[0029][3]根据[1]或[2]所述的组合物，其中，修复为损伤的软骨组织的变性状态的正常化。
[0030][4]根据[1]‑
[3]中任意一项所述的组合物，其中，修复通过选自由软骨细胞的增殖、促进或保持透明质酸的分泌、促进miR140的分泌、CD44阳性细胞的增加、以及间充质干细胞(MSCs)的增殖组成的组中的一种以上的指标表示。
[0031][5]根据[1]‑
[4]中任意一项所述的组合物，其中，修复在体外或体内进行。
[0032][6]根据[1]‑
[5]中任意一项所述的组合物，其中，其包括选自由软骨细胞、软骨前体细胞或MSCs、软骨细胞培养物及软骨组织组成的组中的一种以上的组织或细胞。
[0033][7]根据[1]‑
[6]中任意一项所述的组合物，其中，软骨细胞或软骨组织为自体细胞或自体组织。
[0034][8]一种软骨细胞培养物及培养分泌物的制备方法，其包括在含TGP的组合物中培养来自老年人的软骨组织的细胞的步骤。
[0035][9]根据[8]所述的方法，其中，软骨组织为由于变形性膝软骨关节炎而损伤的软骨组织。
[0036][10]根据[8]或[9]所述的方法，其中，其还包括将软骨细胞培养物与培养分泌物分离的步骤。
[0037][11]一种使未分化细胞增殖或维持的方法，其包括用含TGP的组合物培本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种制备高组织再生能力的软骨细胞培养物的方法，其包括用热可逆性聚合物培养从软骨组织分离的细胞群的步骤。2.根据权利要求1所述的方法，其中，组织再生能力为软骨细胞培养物的选自SOX9、COL2A1、miR140及miR21中的一种以上的基因的表达能力、miRNA的保持能力、干细胞的含量、或者透明质酸的分泌能力。3.根据权利要求2所述的方法，其中，miRNA为miR140。4.根据权利要求2或3所述的方法，其中，干细胞为多能干细胞或分化潜力高的成体干细胞。5.根据权利要求2
‑
4中任意一项所述的方法，其中，干细胞的含量为软骨细胞培养物中的1

【专利技术属性】
技术研发人员：加藤正二郎，S，
申请(专利权)人：JBM株式会社，
类型：发明
国别省市：