METTL3作为鼻咽癌预后预测标志物及检测引物与试剂盒制造技术

本发明专利技术公开METTL3作为鼻咽癌预后预测标志物及检测引物与试剂盒，涉及鼻咽癌分子生物技术领域。本发明专利技术以METTL3作为复发鼻咽癌预后预测标志物，开发检测METTL3表达的分子引物，通过METTL3表达的分子引物检测复发鼻咽癌的METTL3表达情况，预测该类的预后情况，加强预后不良的复发NPC患者治疗后的管理或加强治疗，有望将预后不佳的复发NPC患者的2年生存期分别提高65％与55％；本发明专利技术针对复发NPC这一预后相对较差的人群，通过本试剂盒对其预后的预测，有望较大幅度的提高该类患者的2年甚至是5年生存率。是5年生存率。

【技术实现步骤摘要】
METTL3作为鼻咽癌预后预测标志物及检测引物与试剂盒


[0001]本专利技术涉及METTL3作为鼻咽癌预后预测标志物及检测引物与试剂盒，涉及鼻咽癌分子生物


技术介绍

[0002]鼻咽癌(NPC)是一种头颈鳞癌，在世界上具有极大的地理分布与种族异质性，以东南亚地区人类发病为主，其中中国南方发病率最高。放射治疗被推荐为初发NPC的主要治疗手段，随着放疗技术结合化疗、靶向治疗等综合治疗技术的发展，NPC的5年OS率可达50
‑
64％，但仍有25％的患者在第一次治疗和病情好转后出现复发。对于可切除的复发NPC，抢救性鼻咽切除术的2年和5年整体生存率(OS)分别为48.6％
‑
100.0％，38.3％
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88.9％。如果实施再次放射治疗，2年和5年生存率为44.3
‑
77.7％，27.5％
‑
57.2％。可见相比于原发NPC，复发的患者不论接受哪种治疗模式，其预后都是欠佳的。
[0003]复发NPC的患者均接受过多次治疗(手术或放疗)，对其预后的监测其实是非常重要的。对于预后可能不良的复发NPC患者，应遵循早预防早诊断早治疗的原则，争取延长这部分患者的生存期，而目前尚未有很好的办法预测复发NPC的预后。
[0004]综上所述，针对复发NPC患者的预后的预测，现有技术中没有成熟的方法，如何及早预测出预后较差的复发NPC患者，并及早给予他们相应的检查或者治疗以提高他们的2年或5年OS，是本领域亟需解决的技术问题；本专利技术通过开发试剂盒，在复发NPC患者的早期治疗后进行预后预测，对预后可能较差的患者给予更频繁的复查，或者加强他们的治疗，从而较好的提高他们的2年获5年OS。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供以METTL3作为鼻咽癌预后预测标志物，开发METTL3分子引物序列的试剂盒，检测METTL3在复发NPC患者中的表达，对复发NPC预后预测，并作为复发NPC治疗后的管理及加强治疗的依据，提高此类患者的生存率。
[0006]为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本专利技术是通过以下技术方案实现：
[0007]METTL3作为复发鼻咽癌预后预测标志物的应用。
[0008]进一步的，所述应用为检测复发鼻咽癌患者METTL3的表达，预判患者的预后好坏，利用qRT
‑
PCR检测技术对复发NPC的活检样本中METTL3的表达进行定量检测，高METTL3表达者预后较低表达的患者明显更差。
[0009]本专利技术的另一目的在于，提供一种检测METTL3表达的分子引物在制备预测复发鼻咽癌预后产品中的应用。
[0010]进一步的，所述检测METTL3表达的分子引物为：
[0011]METTL3上游引物：5
’‑
CGTACTACAGGATGATGGCTTTC
‑3’
；下游引物：5
’‑
TTTCATCTACCCGTTCATACCC
‑3’
。
[0012]进一步的，所述预测复发鼻咽癌预后产品为METTL3检测试剂盒。
[0013]本专利技术的另一目的在于，提供一种预测复发鼻咽癌预后的试剂盒，所述试剂盒为上述检测METTL3表达的分子引物试剂盒。
[0014]本专利技术的有益效果：
[0015]本专利技术以METTL3作为复发鼻咽癌预后预测标志物，开发检测METTL3表达的分子引物，通过检测METTL3表达的分子引物检测复发鼻咽癌的METTL3表达情况，以预判患者的预后好坏，原理即为qrt
‑
PCR的基本原理，检测出患者样本中MRTTL3的表达量与已建立数据库中METTL3表达量的中位数进行比较，较高者即可判定为预后可能相对欠佳者，反之则可判定为预后可能相对良好者；对于预后可能欠佳的患者，给予强度更高的治疗方案与更为严格的复查原则，以尽可能延长他们的生存期。本专利技术操作简单易于推广，检测利用患者活检或手术样本，无需患者受二次有创伤害；
[0016]本专利技术通过检测METTL3在复发NPC患者中的表达，预测该类的预后情况，加强预后不良的复发NPC患者治疗后的管理或加强治疗，有望将预后不佳的复发NPC患者的2年生存期提高65％；
[0017]本专利技术针对复发NPC这一预后相对较差的人群，通过本试剂盒对其预后的预测，有望较大幅度的提高该类患者的2年甚至是5年生存率。
[0018]当然，实施本专利技术的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
附图说明
[0019]图1为本专利技术实施例所述METTL3分子引物检测复发NPC患者活检组织中表达量与患者治疗后生存期分子的K
‑
M曲线图；
[0020]图2为本专利技术实施例所述siRNA沉默NPC细胞中METTLL3表达量的效果验证；
[0021]图3为本专利技术实施例所述用control组细胞与siRNA调低了METTL3表达量的细胞行划痕实验，24小时后的愈合情况示意图；
[0022]图4为本专利技术实施例所述划痕实验的统计图；
[0023]图5为本专利技术实施例所述Transwell侵袭实验，24小时后对比图；
[0024]图6为本专利技术实施例所述Transwell侵袭实验统计图；
具体实施方式
[0025]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将结合附图对实施例对本专利技术进行详细说明。
[0026]实施例1
[0027]本专利技术的目的基因引物的设计是通过NCBI Blast网站在线设计，并通过电子邮件发送给生工生物工程股份有限公司合成。
[0028]检测METTL3表达的分子引物设计：
[0029]METTL3上游引物：5
’‑
CGTACTACAGGATGATGGCTTTC
‑3’
；下游引物：5
’‑
TTTCATCTACCCGTTCATACCC
‑3’
；
[0030]通过上述引物开发为试剂盒产品，在检测复发鼻咽癌患者METTL3的表达中应用。
[0031]实施例2
[0032]METTL3分子引物检测复发NPC患者活检组织中表达量，并与患者治疗后生存期分
子做分析；
[0033]于中南大学湘雅医院采集24名只接受了手术治疗的复发NPC患者的样本并跟踪随访，中位生存期为16月，至目前随访生存时间最短2月最长为40月。以上患者均提取样本RNA并逆转录成cDNA，并通过实时荧光定量PCR检测基因表达量；
[0034]具体操作如下：
[0035]1)采集患者新鲜组织样本后，立即放入液氮罐中保存,随后搜集所有病人的相关临床资料所有实验用组织样本采集均获得中南大学湘雅医院伦理委员会授权和病人同意。
[0036]2)对所有患者的组织进行RNA的提取，操作均在冰上进行；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.METTL3作为复发鼻咽癌预后预测标志物的应用。2.如权利要求1所述的METTL3作为复发鼻咽癌预后预测标志物的应用，其特征在于：所述应用为检测复发鼻咽癌患者METTL3的表达，预判患者的预后好坏，利用qRT
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PCR检测技术对复发NPC的活检样本中METTL3的表达进行定量检测，高METTL3表达者预后较低表达的患者明显更差。3.一种检测METTL3表达的分子引物在制备预测复发鼻咽癌预后产品中的应用。4.如权利要求3所述的检测METTL3表达的分子引物在制备预测复发鼻咽癌预后产品中的应用，其特征在于：所述检测METTL3表...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭洲莹，蒋卫红，王裕民，谢志海，章华，范若皓，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：