延胡索乙素在制备抗冠状病毒感染药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了延胡索乙素在制备抗冠状病毒感染药物中的用途，属于医药技术领域。本发明专利技术发现了延胡索乙素能够在Huh

【技术实现步骤摘要】
延胡索乙素在制备抗冠状病毒感染药物中的用途


[0001]本专利技术属于医药
，具体涉及延胡索乙素在抗冠状病毒感染中的应用。

技术介绍

[0002]冠状病毒在分类上属于冠状病毒科，冠状病毒属，是一种直径为80
‑
120nm有囊膜的单股正链RNA病毒，因其囊膜表面纤突规则地排列成皇冠状，故被命名为冠状病毒 (Coronaviruses，CoVs)。CoVs最早于1937年由Beaudetie和Hadson在鸡身上分离出来，而后的近百年来，其被发现在自然界中广泛存在，并具有很强的跨物种传播能力，对人类和其他动物造成巨大的生命威胁。根据基因结构和系统发育学分析，冠状病毒科可以分为α
‑
冠状病毒(Alphacoronaviruses)，β
‑
冠状病毒(Betacoronaviruses)，γ
‑
冠状病毒(Gammacoronaviruses) 和δ
‑
冠状病毒(Deltacoronaviruses)。其中，α
‑
CoVs和β
‑
CoVs主要引起哺乳动物感染，如人，猪，牛和马等动物。γ
‑
CoVs和δ
‑
CoV则主要引起禽类感染，如鸡，鸭，鹅等。SARS
‑
CoV
‑
2 高度的公共安全威胁性，迫使各国史无前例地加速了抗SARS
‑
CoV
‑
2药物和疫苗的研发，目前已有多款疫苗获批上市，但抗新冠肺炎病毒感染的药物研究进展缓慢。最近，跨国医药企业默沙东研发的口服新冠肺炎药物Molnupiravir以及辉瑞公司研发的口服新冠肺炎药物 Paxlovid获批上市，为新冠肺炎的药物治疗带来希望，但其大规模临床应用的药效仍有待验证。此外，病毒易变异导致药物失效，这些因素决定了人类必需持续开展抗冠状病毒感染药物研究，以应对新型冠状病毒株及变异毒株对人类生命健康的威胁。由于SARS
‑
CoV
‑
2属于高致病性病原微生物，只能在资源十分紧缺的生物安全三级实验室开展相关研究，普通实验室无法开展针对SARS
‑
CoV
‑
2的药物研究，因此亟需我们利用同属的低致病性冠状病毒进行药物筛选。
[0003]虽然不同亚型的CoVs致病力不同，但不同的CoVs共享着许多关键的基因组及其表达的蛋白，这为在普通生物安全等级的实验室利用低致病性冠状病毒进行前期大量的抗冠状病毒药物筛选提供了可行性。HCoV
‑
OC43和三种致命性冠状病毒同属于β类，但通常仅在人群中引起轻微的感染，如咳嗽、发烧、上呼吸道感染等，由于其较低的生物安全等级，因此适合在普通实验室中用于冠状病毒药物的筛选。
[0004]延胡索乙素(Tetrahydropalmatine，THP)是从中药罂粟科植物延胡索(元胡，Corydalisyanhusuo，W.T.Wang)和伏生紫堇(Corydalisdecumbens(Thunb.)Per.S.)的块茎等其他植物部位提取的一种原小檗碱型生物碱，也可以巴马汀为原料通过化学合成的方法获得延胡索乙素。临床上其主要作为镇痛药物应用。此外，近些年来还发现其具有抗心律失常、降血压、抗血栓、抗胃溃疡病、戒断成瘾药物和抗肿瘤等药理作用。
[0005][0006]有关延胡索乙素抗CoVs感染作用的研究及其在防治CoVs感染上的应用未见报道，也未见相关的专利公开。

技术实现思路

[0007]本专利技术的第一个目的是提供延胡索乙素在制备防治CoVs感染药物中的应用。所述的延胡索乙素是通过化学合成，或从中药延胡索或伏生紫堇获得的生物碱类化合物。
[0008]在一种实施方式中，所述延胡索乙素是从中药延胡索中提取分离，步骤包括：(1)延胡索用粉碎机粉碎后过筛(20目)，用50％体积分数的乙醇溶液60℃水浴搅拌提取，过滤，药渣再提取2次，将3次滤液合并，减压蒸馏及真空干燥后制得粗提物。(2)称取一定量的 D141大孔树脂，湿法装柱，按常规对柱中树脂进行处理。粗提物上柱后以7BV的0.3％NaCl 溶液洗脱去除杂质，以4BV的60％乙醇冲洗柱去除其它成分，再以4BV的90％乙醇进行解吸，收集洗脱液，减压浓缩后冷冻干燥，即为延胡索乙素粗品。(3)延胡索乙素粗品采用硅胶柱层析进行分离，采用不同比例的二氯甲烷
‑
甲醇为洗脱溶剂，获得纯化的延胡索乙素。
[0009]在一种实施方式中，所述CoVs感染包括但不限于由HCoV
‑
OC43和HCoV
‑
229E病毒株，或同源性与其≥90％且具备病毒活性的冠状病毒引起的疾病。
[0010]本专利技术的第二个目的是提供一种由延胡索乙素生成的盐，包括但不限于硫酸延胡索乙素，以及以延胡索乙素和延胡索乙素盐为有效成分制备的医学上可接受的制剂。
[0011]在一种实施方式中，所述药物组合物的剂型为片剂、胶囊、颗粒剂、散剂、糖浆剂、口服液或注射剂。
[0012]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点及有益效果：
[0013]本专利技术发现了延胡索乙素及其盐在抑制冠状病毒中的新用途。在Huh
‑
7细胞上，延胡索乙素对HCoV
‑
OC43和HCoV
‑
229E毒株的半数有效浓度(EC
50
)值分别为8.87μM和28.80μM。同时，延胡索乙素能够有效地降低HCoV
‑
OC43和HCoV
‑
229E在Huh
‑
7细胞中的病毒滴度，在最高给药剂量60μM下，给药72小时后病毒抑制率达到92.16％和93.79％。上述结果表明本专利技术的延胡索乙素对冠状病毒具有显著抑制作用，具有临床治疗或预防CoVs感染的应用价值。此外，硫酸延胡索乙素已被作为止痛药批准用于临床，表明该药对人体安全。
附图说明
[0014]图1是实施例1中评估延胡索乙素对Huh
‑
7细胞的细胞毒性作用(CC
50
)及其在细胞上抗HCoV
‑
OC43和
‑
229E病毒活性(EC
50
)；
[0015]图2是实施例2中免疫荧光法分析不同浓度的延胡索乙素在细胞中对HCoV
‑
OC43
和
‑ꢀ
229E病毒N蛋白合成的抑制作用；
[0016]图3是实施例3中Western Blot分析不同浓度的延胡索乙素在细胞中对HCoV
‑
OC43和
‑ꢀ
229E病毒N蛋白合成的抑制作用；
[0017]图4是实施例4中qRT
‑
PCR分析不同浓度的延胡索乙素在细胞中对HCoV
‑
OC43和
‑ꢀ
229E病毒RNA增殖的抑制作用；
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.延胡索乙素在制备抗冠状病毒感染药物中的用途，其特征在于，所述延胡索乙素作为唯一抗冠状病毒感染的有效成分，可以通过从中药延胡索和伏生紫堇中提取分离，也可以以巴马汀为原料通过化学合成的方法制得。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述延胡索乙素包括延胡索乙素游离碱或其盐。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述延胡索乙素盐包括但不限于硫酸延胡索乙素。4.根据权利要求1所述的应用，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈建新，林琪胜，程梓钰，宋高鹏，贾伟新，马勇江，剡海阔，杨霞，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：