本发明专利技术的目的是提供一种低分子硫酸软骨素钠的制备方法，其平均分子量为3500～6500D。方法参考依诺肝素钠的制备工艺，以猪来源的硫酸软骨素钠为原料，经过季铵盐盐化、苄基酯化、降解、氧化脱色、分级控制、冻干等工艺，制备出平均分子量在3500～6500D的一种低分子硫酸软骨素钠。该方法操作简单，工艺稳定，因与依诺肝素钠生产工艺相似，可以轻松实现工业化生产。可以轻松实现工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
一种低分子硫酸软骨素钠的制备方法
[0001]本专利技术涉及一种低分子硫酸软骨素钠的制备方法，属于医药领域。
技术介绍
[0002]糖胺聚糖(glycosaminoglycan，GAG)是重复二糖单位组成的线性多糖，此二糖单位由一个己糖胺(D-葡糖胺或D-半乳糖胺)通过糖苷键连接一个糖醛酸(D-葡糖醛酸或L-艾杜糖醛酸)或D-半乳糖组成，二糖单位中至少有一个单糖残基带有负电荷的羧基或硫酸基，因此糖胺聚糖又被称为酸性粘多糖。糖胺聚糖广泛存在于动物细胞表面及细胞基质中，除HA 外，在动物体内常常以蛋白聚糖的形式存在，并通过与一系列特殊蛋白结合参与神经系统发育、组织形态发生、细胞分裂、炎症、肿瘤发生发展和病毒侵染等多种生理和病理过程。根据单糖残基间的连接类型及硫酸基数目和位点的不同，糖胺聚糖可分为以下几个主要成分：透明质酸(hyaluronic acid，HA)、肝素/硫酸乙酰肝素(heparin/heparan sulfate，Hep/HS)、硫酸软骨素/硫酸皮肤素(chondroitin sulfate/dermatan sulfate，CS/DS)和硫酸角质素(keratan sulfate， KS)。
[0003]作为糖胺聚糖的主要种类，硫酸软骨素早在1884年就被Krukenberg等分离出来，但不同类别硫酸软骨素的结构直至20世纪60年代才初步明确。硫酸软骨素是由D-葡萄糖醛酸 (GlcA)和N-乙酰氨基半乳糖(GalNAc)经β-1，3-糖苷键组成的二糖单位经β-1，4-糖苷键重复组成的直链多糖。因硫酸基数目和连接位点的不同可分为多种类型的硫酸软骨素，见表1。自然界中大多数的硫酸软骨素主要是由A单元和C单元两种二糖单位组成的，通常将以A单元为主组分的硫酸软骨素称为CS-A，如来自猪、牛、羊等软骨的硫酸软骨素；以C单元为主组分的硫酸软骨素称为CS-C，如来自于鲨鱼软骨的硫酸软骨素。表1：硫酸软骨素的分类及二糖结构
[0004]硫酸软骨素具有多种重要生物功能如抗氧化、抗炎、降血脂、抗凝血等，此外还具有改善食物风味、口感、光泽及保湿性等作用。2010年硫酸软骨素被《中华人民共和国药典》收录，并将其列为防治心血管疾病和关节病的最佳药物。现在多数市售硫酸软骨素产品为天然提取的大分子硫酸软骨素，分子量约为15000～55000，而低分子硫酸软骨素生物利用度更高，药理作用和治疗效果更优。目前低分子硫酸软骨素的降解方法主要有4类：硫酸软骨素裂解酶降解、氧化剂降解、酸降解和碱降解。开发不同种类的低分子硫酸软骨素是其未来的发展趋势。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的是提供一种低分子硫酸软骨素钠的制备方法，其平均分子量为3500～ 6500D。方法参考依诺肝素钠的制备工艺，以猪来源的硫酸软骨素钠为原料，经过季铵盐盐化、苄基酯化、降解、氧化脱色、分级控制、冻干等工艺，制备出平均分子量在3500～6500D 的一种低分子硫酸软骨素钠。该方法操作简单，工艺稳定，因与依诺肝素钠生产工艺相似，可以轻松实现工业化生产。
[0006]下面对本专利技术方法进行以下具体描述：
[0007](1)季铵盐盐化
[0008]将硫酸软骨素钠溶于纯化水制成硫酸软骨素钠水溶液，将苄索氯铵溶于纯化水制成苄索氯铵水溶液，将苄索氯铵溶液缓慢加入到硫酸软骨素钠溶液中，边加边搅拌，在45～50℃下进行反应，反应结束后离心，用纯化水洗涤沉淀物，干燥得硫酸软骨素季铵盐。
[0009](2)苄基酯化
[0010]将上述硫酸软骨素季铵盐用二氯甲烷溶解后加入氯化苄，在35～40℃下进行酯化反应，酯化结束后冷却至室温，加入饱和乙酸钠乙醇溶液分级沉淀，分离沉淀并用饱和乙酸钠乙醇溶液进行洗涤，沉淀干燥得硫酸软骨素苄酯。
[0011](3)降解
[0012]将上述硫酸软骨素苄酯用纯化水溶解，加入三水合乙酸钠溶解，向溶液中加入氢氧化钠溶液，在55
±
1℃下进行降解反应，反应结束后，调节pH为6.5～7.5，料液冷却至室温。
[0013](4)氧化脱色
[0014]将上述降解后料液，加入30％浓度的过氧化氢进行氧化脱色，氧化过程中维持pH为 10.0～10.5，温度为25～30℃。反应结束后，料液用滤膜过滤，调节pH为6.5～7.5，取样检测分子量。
[0015](5)分级控制
[0016]将上述氧化脱色后料液，加入95％乙醇进行多次分级，离心沉淀用纯化水溶解，取样检测分子量，使其达到目标分子量，在3500～6500D的范围内。
[0017](6)冻干
[0018]将上述满足目标分子量的料液用滤膜过滤，装入冻干盘，设定冻干参数进行冷冻干燥，冻干结束后，取样检测分子量，最终得到一种低分子硫酸软骨素钠。
[0019]其中步骤(1)中所述硫酸软骨素钠水溶液是按每克硫酸软骨素钠加入9～11ml纯化水溶解所得，苄索氯铵水溶液是按每克苄索氯铵加入4～6ml纯化水溶解所得，苄索氯铵用量为硫酸软骨素钠重量的2倍；反应时间为0.5～1小时；洗涤次数为2次，每次洗涤时间为1～ 2小时。
[0020]其中步骤(1)中所述干燥为鼓风干燥，温度为50℃～60℃，干燥判定结束标准为硫酸软骨素季铵盐的卤素水分≤1.0％。
[0021]其中步骤(2)中二氯甲烷用量为每克硫酸软骨素季铵盐加入4～6ml二氯甲烷，氯化苄加入量为每克硫酸软骨素季铵盐加入1～2ml氯化苄；酯化时间为25～30小时；洗涤次数为2次，每次洗涤时间为1～2小时。
[0022]其中步骤(2)中所述干燥为减压干燥，温度为50℃～60℃，真空度为-0.1～-0.09Mpa，干燥判定结束标准为硫酸软骨素苄酯的卤素水分≤10.0％。
[0023]其中步骤(3)中所述硫酸软骨素苄酯和氢氧化钠用纯化水溶解，纯化水总用量按每克硫酸软骨素苄酯加入20ml纯化水计算，三水合乙酸钠用量为料液体积的1.0％，氢氧化钠用量为硫酸软骨素苄酯重量的10～12％；降解时间为80～90分钟。
[0024]其中步骤(4)中所述30％浓度的过氧化氢用量体积为料液体积的1～1.5％；反应时间为20～24小时。
[0025]其中步骤(5)中所述分级，每次分级控制料液乙醇度数为58.0-62.0％(20℃)；分级后离心沉淀用起始物料重量的10倍纯化水溶解，取样检测分子量；分级前加入氯化钠溶解，其加入量是料液体积的1.0％。
[0026]其中步骤(6)中所述冷冻干燥条件为：-35℃预冻4小时；从-35℃升温至-10℃升华干燥，-10℃保持6小时；从-10℃升温至25℃解析干燥，25℃保持6小时；料液装盘高度在 1.0
±
0.1cm范围内。
附图说明
[0027]图1是氢氧化钠用量对降解产物分子量的影响趋势线性图。
具体实施方式
[0028]下述实施例仅用于阐述实现本专利技术的方法，不应理解为对本专利技术的限制，所有基于本专利技术的思路作出的修改和变化都应归于本专利技术的保护范围。...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种低分子硫酸软骨素钠的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)季铵盐盐化：将硫酸软骨素钠溶于纯化水制成硫酸软骨素钠水溶液，将苄索氯铵溶于纯化水制成苄索氯铵水溶液，将苄索氯铵溶液缓慢加入到硫酸软骨素钠溶液中，边加边搅拌，在45～50℃下进行反应，反应结束后离心，用纯化水洗涤沉淀物，干燥得硫酸软骨素季铵盐；(2)苄基酯化：将上述硫酸软骨素季铵盐用二氯甲烷溶解后加入氯化苄，在35～40℃下进行酯化反应，酯化结束后冷却至室温，加入饱和乙酸钠乙醇溶液分级沉淀，分离沉淀并用饱和乙酸钠乙醇溶液进行洗涤，沉淀干燥得硫酸软骨素苄酯；(3)降解：将上述硫酸软骨素苄酯用纯化水溶解，加入三水合乙酸钠溶解，向溶液中加入氢氧化钠溶液，在55
±
1℃下进行降解反应，反应结束后，调节pH为6.5～7.5，料液冷却至室温；(4)氧化脱色：将上述降解后料液，加入30％浓度的过氧化氢进行氧化脱色，氧化过程中维持pH为10.0～10.5，温度为25～30℃。反应结束后，料液用滤膜过滤，调节pH为6.5～7.5，取样检测分子量；(5)分级控制：将上述氧化脱色后料液，加入95％乙醇进行多次分级，离心沉淀用纯化水溶解，取样检测分子量，使其达到目标分子量，在3500～6500D的范围内；(6)冻干：将上述满足目标分子量的料液用滤膜过滤，装入冻干盘，设定冻干参数进行冷冻干燥，冻干结束后，取样检测分子量，最终得到一种低分子硫酸软骨素钠。2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(1)中所述硫酸软骨素钠水溶液是按每克硫酸软骨素钠加入9～11ml纯化水溶解所得，苄索氯铵水溶液是按每克苄索氯铵加入4～6ml纯化水溶解所得，苄索氯铵用量...
【专利技术属性】
技术研发人员：王建强，张建柏，张玉丽，吴晓明，
申请(专利权)人：烟台东诚药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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