新的芽孢杆菌菌株及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种新的芽孢杆菌菌株(Bacillus sp.)Ya

【技术实现步骤摘要】
新的芽孢杆菌菌株及其应用


[0001]本专利技术涉及植物枯萎病防治领域，具体而言，涉及一种防治辣椒枯萎病的芽孢杆菌菌株Ya
‑
1及其应用。

技术介绍

[0002]枯萎病作为一种常见的植物病害已成为制约经济作物发展的一大主要病害，特别是对生姜、黄瓜、番茄、茄子、香蕉等作物造成了巨大经济损失，这些年随产业化集中，辣椒等蔬菜复种指数的提高，枯萎病的发生呈逐年增长趋势，严重影响了我国辣椒质量以及农户的收入。
[0003]辣椒枯萎病是由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)侵染引起，其最为常见表现的是辣椒开花结果期叶片发黄，严重时伴随有大量脱落，部分临近地面的茎叶易受到田间积水的影响，长期处于腐烂状态，甚至影响到上部茎叶，使其凋萎。地下根系生长异常，存在软腐的问题，通过对茎基部的纵面剖析可以发现，其中的维管束普遍转变为褐色，若现场湿度较大，病部还伴随有霉状物，严重影响作物生长。辣椒枯萎病在世界上许多国家均有发生。我国自1955年首次报道(俞大绂，1955)，随后，在陕西、甘肃、湖南、湖北、北京、广东、广西、海南等地相继发生(李静等，2014)。发病率一般为15％～30％，严重时为50％以上，个别地区严重时高达70％～80％，甚至绝产，造成了巨大经济损失。
[0004]为了解决辣椒枯萎病的问题，在实际生产中，培育和选用抗枯萎病品种从根本上解决辣椒枯萎病病害的重要措施，然而至今仍未有合适的抗枯萎病的优良品种，在大田种植过程中，枯萎病仍然普遍发生。由于辣椒枯萎病属典型的土传病害，病菌以厚垣孢子在土壤及病残体中越冬，可以在土壤中存活数年，并且很多宿主不会表现出症状，感病品种的重复种植能够导致厚垣孢子在土壤中大量积累，因而防治难度更大。
[0005]目前国内外关于枯萎病的防治方法主要是通过化学防治，例如选用恶霉灵、甲基托布津、代森锰锌、氟硅唑、吡唑醚菌酯和氰烯菌酯等化学杀菌剂进行灌根防治，然而不同化学杀菌剂对于不同种类、品种的农作物的防治效果不一致，且长期大量使用这些化学药剂，病菌易产生抗药性，防治效果逐年降低，甚至达到无法控制的程度，同时污染环境、破坏生态平衡和农药残留等问题也日益凸显。因此化学防治已经不能作为最合适的手段，需要更安全环保的生物防治剂代替这些化学药剂。
[0006]然而，由于单一菌株的局限性和致病菌的同步进化、现有生物菌株生防机制单一等原因，目前尚未发现能够有效拮抗枯萎病且抗菌谱广的生物菌株制剂。

技术实现思路

[0007]基于上述现有技术中存在的问题，本专利技术提供一株能够从多种机制途径同时发挥作用、协同增效，有效防治多种植物枯萎病的芽孢杆菌(Bacillus sp.)菌株Ya
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1。
[0008]本专利技术提供的芽孢杆菌Bacillus sp.菌株Ya
‑
1，其特征在于，保藏号为CGMCC No.23360。
[0009]进一步地，本专利技术所提供的芽孢杆菌Bacillus sp.菌株Ya
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1，其16S rDNA序列如SEQ ID 1所示。
[0010]本专利技术进一步提供上述芽孢杆菌Bacillus sp.菌株Ya
‑
1在植物枯萎病防治中的应用。
[0011]进一步的，本专利技术提供芽孢杆菌Bacillus sp.菌株Ya
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1的菌体在植物枯萎病防治中的应用。
[0012]优选地，所述菌体的制备方法为：从4℃冰箱中取出，接种于LB液体培养基(LB液体培养基配方为：10g氯化钠，10g蛋白胨，5g酵母粉，1000mL蒸馏水，充分溶解后分装于250mL三角瓶中，每瓶200mL液体LB，121℃灭菌30min，冷却，备用。)中，31℃,200rpm摇床中培养24h后，所得的菌悬体即为活菌体。
[0013]更优选地，所述制备方法为：从4℃冰箱中取出，接种于LB液体培养基(LB液体培养基配方为：10g氯化钠，10g蛋白胨，5g酵母粉，1000mL蒸馏水，充分溶解后分装于250mL三角瓶中，每瓶200mL液体LB，121℃灭菌30min，冷却，备用。)中，31℃,200rpm摇床中培养24h后，所得的菌悬体即为活菌体。
[0014]进一步的，本专利技术提供芽孢杆菌Bacillus sp.菌株Ya
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1的发酵菌液在植物枯萎病防治中的应用。
[0015]优选地，所述发酵菌液的制备方法为：将菌种接种于LB液体培养基中，摇床培养后，收集菌悬体即制得菌体。
[0016]更优选地，所述发酵菌液的制备方法为：先取上述方法制备得到的菌体，接种于LB液体培养基(LB液体培养基配方为：10g氯化钠，10g蛋白胨，5g酵母粉，1000mL蒸馏水，充分溶解后分装于250mL三角瓶中，每瓶200mL液体LB，121℃灭菌30min，冷却，备用。)中，31℃,200rpm摇床中培养24h后，即得到活菌体菌悬液。然后将活菌体菌悬液用酶标仪或紫外分光光度计测量OD600值，并用无菌LB液体培养基调节OD600＝0.6～0.8之间，即制得发酵菌液。
[0017]进一步的，本专利技术提供一种枯萎病防治方法，其特征在于，具体步骤为，采用上述芽孢杆菌Bacillus sp.菌株Ya
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1的发酵菌液对植物进行灌根。
[0018]优选地，所述灌根时间持续10
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20天，进一步优选为20天。
[0019]可选地，所述灌根时期可以为苗期、始花期、结果期和盛果期。
[0020]可选地，所述灌根的方法为：首次采用孢子浓度为度1
×
107孢子/g的发酵菌液100ml对每株植物进行灌根。
[0021]可选地，在20
±
5天内用相同浓度的发酵菌液再次进行灌根。
[0022]进一步地，本专利技术提供包含上述菌体或发酵液和药学上可接受的载体或赋形剂组成的生物制剂。
[0023]更进一步地，本专利技术提供上述生物制剂在植物枯萎病防治中的应用。
[0024]在本专利技术的一些方面，本专利技术提供一种用于制备辣椒枯萎病防治用生物制剂的菌株，其生物保藏号为CGMCC No.23360。
[0025]在本专利技术的一些方面，所述的植物枯萎病为生姜青枯病、辣椒枯萎病或瓜类枯萎病；优选地，所述的植物枯萎病为辣椒枯萎病。
[0026]本专利技术提供的芽孢杆菌(Bacillus sp.)菌株Ya
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1已于2021年9月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3
号)，其生物保藏号为CGMCC No.23360。
[0027]本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：
[0028]1、本专利技术筛选获得的芽孢杆菌(Bacillus sp.)菌株Ya
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1，其菌体和发酵液对于生姜青枯病、辣椒枯萎病和瓜类枯萎病等植物病原菌的直接抑制具有显著作用，抑菌谱广。
[0029]2、本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株芽孢杆菌Bacillus sp.菌株Ya
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1，其特征在于，保藏号为CGMCC No.23360。2.根据权利要求1中所述的芽孢杆菌Bacillus sp.菌株Ya
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1，其特征在于，16S rDNA序列如SEQ ID 1所示。3.权利要求1或2中所述的芽孢杆菌Bacillus sp.菌株Ya
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1在植物枯萎病防治中的应用。4.权利要求1或2中所述的芽孢杆菌Bacillus sp.菌株Ya
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1的菌体在植物枯萎病防治中的应用。5.根据权利要求4中所述的应用，其特征在于，所述菌体的制备方法为：将菌种接种于LB液体培养基中，摇床培养后，收集菌悬体即制得菌体。6.权利要求1或2中所述的芽孢杆菌Bacillus sp.菌株Ya
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1的发酵菌液在植物枯萎病防...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵志祥，严婉荣，肖彤斌，王宝，曾向萍，符美英，
申请(专利权)人：海南省农业科学院植物保护研究所海南省农业科学院农产品质量安全与标准研究中心，
类型：发明
国别省市：