双特异性抗人A-β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法技术

本文提供了双特异性抗人A

【技术实现步骤摘要】
双特异性抗人A
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β
/人转铁蛋白受体抗体及使用方法
[0001]本申请是申请日为2016年9月30日的、专利技术名称为“双特异性抗人A
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β/人转铁蛋白受体抗体及使用方法”的中国专利申请201680056850.0(PCT/EP2016/073411)的分案申请。
专利

[0002]本专利技术涉及抗人A
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β和人转铁蛋白受体的双特异性抗体、其生产方法、含有这些抗体的药物组合物及其用途。
[0003]背景
[0004]所有痴呆病例中的约70％是由于阿尔茨海默病引起的，阿尔茨海默病与对于认知重要的脑区和神经回路的选择性损伤相关。阿尔茨海默病的特征在于神经纤维缠结(特别是在海马的椎体神经元中)和主要含有淀粉样蛋白沉积的致密核心和弥散晕圈(defused halo)的无数淀粉样蛋白斑块。
[0005]胞外神经炎斑块含有大量占主导地位的称为“淀粉样蛋白β”、“A
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β”、“Aβ4”、“β
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A4”或“Aβ”的纤维状肽。参见Selkoe，Ann.Rev.Cell Biol.10(1994)373
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403；Koo PNAS 96(1999)9989
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9990；US 4,666,829；Glenner BBRC 12(1984)1131)。这种淀粉样蛋白源自“阿尔茨海默前体蛋白/P
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淀粉样蛋白前体蛋白”(APP)。APP是整合膜糖蛋白(参见Sisodia PNAS 89(1992)6075)并且被质膜蛋白酶，α
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分泌酶在AP序列内通过内切蛋白水解而断裂(参见Sisodia(1992)，Joe.cit.)。此外，其他分泌酶活性，特别是β
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分泌酶和γ
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分泌酶活性，导致包含39个氨基酸(Aβ39)、40个氨基酸(Aβ40)、42个氨基酸(Aβ42)或43个氨基酸(Aβ43)的淀粉样蛋白
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β(Aβ)的胞外释放(参见Sinha PNAS 96(1999)11094
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1053；Price，Science 282(1998)1078
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1083；WO 00/72880或Hardy，TINS 20(1997)154)。
[0006]值得注意的是，Aβ具有几种天然存在的形式，其中人形式被称为上述的Aβ39、Aβ40、Aβ41、Aβ42和Aβ43。最突出的形式Aβ42具有氨基酸序列(从N
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末端开始)：DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA(SEQ ID NO:05)。在Aβ41、Aβ40、Aβ39中，C
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末端氨基酸A、IA和VIA分别是缺失的。在Aβ43
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形式中，在上述序列的C
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末端包含额外的苏氨酸残基。
[0007]已经证实，使Aβ40原纤维成核需要的时间明显比Aβ42原纤维成核所需的时间长(参见，例如，Lansbury，Jr.，P.T.和Harper，J.D.，Ann.Rev.Biochem.66(1997)385
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407)。如Wagner(J.Clin.Invest.104(1999)1239
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1332)中综述的，Aβ42最常发现与神经炎斑块相关，并且被认为在体外是更具有原纤维形成性的。还表明，Aβ42在有序的非晶体Aβ肽的成核依赖性聚合中作为“种子”(参见，例如，Jarrett，Cell 93(1993)1055
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1058)。改变的APP加工和/或含有蛋白质沉积的胞外斑块产生不仅得知于阿尔茨海默病病理学，而且得知于患有其他神经学和/或神经变性病症的受试者。这些病症特别包括唐氏综合症、遗传性脑出血伴淀粉样变Dutch型、帕金森病、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、Creutzfeldt Jacob病、HIV
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相关的痴呆和运动神经病。
[0008]迄今为止，只有有限的用于淀粉样蛋白相关疾病的医学干预方案得到了描述。例如，胆碱酯酶抑制剂，如加兰他敏(galantamine)、利凡斯的明(rivastigmine)或多奈哌齐(donepezil)，已经描述为在仅为轻度至中度疾病的阿尔茨海默病中是有益的。然而，由于
这些药物的胆碱能作用，也已经报道了不良事件。尽管这些胆碱能
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增强治疗确实产生了一些症状益处，但对于大部分治疗的患者，治疗反应不令人满意。已经估计，在仅有约5％受治疗的患者中出现了明显的认知改善，并且存在很少的证据表明治疗可以显著改变这种渐进性疾病的过程。
[0009]因此，对于更有效的治疗，特别是可以停止或延迟疾病进展的那些治疗，仍然存在极大的临床需求。
[0010]更近来也使用NMDA
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受体拮抗剂，如美金刚(memantine)。然而，由于药理学活性，已经报道了不良事件。此外，使用这些NMDA
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受体拮抗剂的治疗仅可以被认为是对症方法而非改变疾病的方法。
[0011]还提出了用于淀粉样蛋白相关病症治疗的免疫调节方法。WO 99/27944公开了包含部分A
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β肽和载体分子的缀合物，由此所述载体分子应当增强免疫应答。在WO 00/72880中提及了另一种主动免疫方法，其中也使用了A
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β片段来诱导免疫应答。
[0012]在WO 99/27944或WO 01/62801中还提出了使用一般抗
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A
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β抗体的被动免疫方法，以及在WO 02/46237、WO 02/088306和WO 02/088307中描述了针对部分A
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β的特异性人源化抗体。WO 00/77178描述了抗体结合水解过程中由β
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淀粉样蛋白采用的过渡态。WO 03/070760公开了识别A
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β肽上的两个不连续氨基酸序列的抗体分子。
[0013]WO 2014/033074涉及结合血脑屏障上的受体的血脑屏障穿梭体及其使用方法。Pardridge，W.(Exp.Opin.Drug Deliv.12(2015)207
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222)等已经报道了用转铁蛋白受体单克隆抗体进行的IgG融合蛋白的血脑屏障药物递送。Yu,Y.J.等(Sci.Translat.Med.6(2014)261ra154
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261ra154)报道了在非人灵长类中穿过血脑屏障的治疗性双特异性抗体。Sumbria，R.K.等(Mol.Pharm.10(2013)3507
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3513)报道了，用靶向转铁蛋白受体和aβ淀粉样蛋白肽的四价双特异性抗体，每日皮下给药，在阿尔茨海默病转基因小鼠脑中淀粉样蛋白斑块的解聚。Niewoehner，J.等(Neuron 81(2014)49...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单克隆双特异性抗体，其包括a)包含两个抗体轻链和抗体重链对的一个抗体，其中每对为一个抗体轻链和一个抗体重链，其中由每对重链和轻链形成的结合位点特异性地结合第一抗原，和b)一个另外的Fab片段，其中所述另外的Fab片段通过肽接头与抗体的一条重链的C
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末端融合，其中所述另外的Fab片段的结合位点特异性地结合第二抗原，其中所述第一抗原是人A
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β蛋白，而所述第二抗原是人转铁蛋白受体，其中a)中所述的一个抗体包含与SEQ ID NO:01具有70％或更高的序列同一性的轻链、和与SEQ ID NO:2具有70％或更高的序列同一性的重链；其中所述另外的Fab片段包含与SEQ ID NO:03具有70％或更高的序列同一性的轻链、和与SEQ ID NO:4具有70％或更高的序列同一性的重链Fab片段。2.根据权利要求1的抗体，其中a)与另外的Fab片段融合的重链具有三肽LSP作为C
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末端重链氨基酸残基，其中该三肽的脯氨酸经由肽键与另外的Fab片段或肽接头的第一个氨基酸残基直接融合，和b)没有与另外的Fab片段融合的重链具有三肽LSP或SPG或PGK作为C
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末端重链氨基酸残基。3.根据权利要求1至2任一项的抗体，其中抗体是a)具有突变L234A、L235A和P329G的人亚类IgG1的全长抗体，b)在两条重链中都具有突变L234A、L235A和P329G、并且在一条重链中具有突变T366W和S354C以及在相应的另一条重链中具有突变T366S、L368A、Y407V和Y349C的人亚类IgG1的全长抗体，c)在两条重链中都具有突变L234A、L235A、P329G、I253A、H310A和H435A、并且在一条重链中具有突变T366W和S354C以及在相应的另一条重链中具有突变T366S、L368A、Y407V和Y349C的人亚类IgG1的全长抗体，或d)在两条重链中都具有突变L234A、L235A、P329G、M252Y、S254T和T256E、并且在一条重链中具有突变T366W和S354C以及在相应的另一条重链中具有突变T366S、L368A、Y407V和Y349C的人亚类IgG1的全长抗体，或e)在两条重链中都具有突变L234A、L235A、P329G、H310A、H433A和Y436A、并且在一条重链中具有突变i)T366W和ii)S354C或Y349C、以及在相应的另一条重链中具有突变i)T366S、L368A和Y407V和ii)Y349C或S354C的人亚类IgG1的全长抗体。4.根据权利要求1至3任一项的抗体，其中所述双特异性抗体包括具有SEQ ID NO:01的氨基酸序列的轻链、具有SEQ ID NO:02的氨基酸序列的重链、具有SEQ ID NO:03的氨基酸序列的轻链、和包含SEQ ID NO:04的氨基酸序列的抗体Fab片段。5.根据权利要求1至4任一项的抗体，其中所述人A
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β结合位点包含SEQ ID NO:18的VH序列，包括该序列的翻译后修饰，以及SEQ ID NO:19的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。6.根据权利要求1至5任一项的抗体，其中所述人转铁蛋白受体结合位点包含SEQ ID NO:20的VH序列，包括该序列的翻译后...

【专利技术属性】
技术研发人员：H，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：