一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒，属于生物检测技术领域。本发明专利技术使用实时荧光定量交叉引物等温扩增技术检测新型冠状病毒，设计了两组适用于这一技术的引物。两组引物分别针对型冠状病毒基因组中的ORF1ab基因和型冠状病毒基因组中的S基因进行检测。本发明专利技术新型冠状病毒核酸检测试剂盒特异性强，灵敏度高，不仅可以对样品进行定性定量的检测，还可以实时观测数据的变化，有利于对样品数据的全面收集，方便进行下一步的研究。因此本发明专利技术不仅适用于现场快速检测，还适用于以科研为目的的检测。研为目的的检测。研为目的的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物检测
，尤其涉及一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒。

技术介绍

[0002]冠状病毒(Coronavirus，CoV)是一类具有囊膜，基因组为线性单股正链的RNA病毒，是自然界广泛存在的一大类病毒。冠状病毒分为α、β、γ和δ共4个属，其中α和β冠状病毒可以感染哺乳动物，而γ和δ冠状病毒主要感染鸟类。此前已经发现有6种冠状病毒可感染人类：α冠状病毒(HCoV
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229E、HCoV
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NL63)和β冠状病毒（HCoV
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HKU1，HCoV
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OC43、MERS
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CoV、SARS
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CoV），患者表现从普通感冒到重症肺部感染。新型冠状病毒（严重急性呼吸综合征冠状病毒2，SARS
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CoV
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2）是一种先前尚未在人类中发现的β属冠状病毒，在人群中具有极强的传染性，主要通过呼吸道飞沫、呼吸道分泌物和直接接触传播。COVID
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19患者通常表现出特定的相似症状，例如发烧、全身乏力和咳嗽。大多数患者都表现出轻度的流感样症状，预后良好，少数患者病情危重。
[0003]目前病毒的检测方法主要包括病毒分离法、免疫学方法和分子诊断法。病毒分离法耗时长、不能大规模应用于临床快速、准确的检测；免疫学方法（ELISA、抗原抗体检测等）可以快速检出，但灵敏度不足，多在患病后才能检出，比较滞后，不利于筛查，也无法确诊；现代分子生物学诊断方法特异性好、灵敏度高，目前市面上大多采用RT
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PCR方法进行检测。
[0004]为了控制疫情，诊断试剂盒的研制成为热门领域，但由于新型冠状病毒的发现时间短，对其基因组特征、结构特征、发病机理等方面还在不断的研究当中。目前的新型冠状病毒抗体检测试剂盒，也因研发周期短，检测试剂盒的灵敏度和特异性都有待提高。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种利用实时荧光定量交叉引物等温扩增技术特异、快速、高效地检测新型冠状病毒的试剂盒。
[0006]为达到上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：本专利技术公开了一种检测新型冠状病毒的引物，包括两组引物，每组引物包含一对剥离引物、一对交叉扩增引物、一对检测引物，分别是：第一组：剥离引物：如SEQ ID NO.1所示的正向引物和SEQ ID NO.2所示的反向引物；交叉扩增引物：如所SEQ ID NO.3示的正向引物和SEQ ID NO.4所示的反向引物；检测引物：如SEQ ID NO.5所示的正向引物和SEQ ID NO.6所示的反向引物；第二组：剥离引物：如SEQ ID NO.7所示的正向引物和SEQ ID NO.8所示的反向引物；交叉扩增引物：如SEQ ID NO.9所示的正向引物和SEQ ID NO.10所示的反向引物；检测引物：如SEQ ID NO.11所示的正向引物和SEQ ID NO.12所示的反向引物。
[0007]优选地，检测新型冠状病毒的两组引物均适用于实时荧光定量交叉引物等温扩增
技术。该技术是一种方便快速的检测方法，具有操作简单、耗时短、特异性强、灵敏度高及可视化的优点。
[0008]优选地，第一组引物用于检测新型冠状病毒基因组中的ORF1ab基因；第二组引物用于检测新型冠状病毒基因组中的S基因。试剂盒设计两个靶基因和位点检测能有效降低漏检和错检的概率，提高试剂盒检测的准确性。
[0009]本专利技术还公开了一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒，包括如上所述的检测新型冠状病毒的引物。本专利技术新型冠状病毒核酸检测试剂盒的检测原理是利用具有链置换活性的DNA聚合酶（Bst DNApolymerase），使用可视化的实时荧光定量交叉引物等温扩增技术，特异、快速、高效地完成的扩增反应。在扩增反应发生的同时，可以使用荧光实时监测设备监测扩增情况。本专利技术使用该技术进行核酸检测，不仅可以对样品进行定性定量的检测，还可以实时观测数据的变化，有利于对样品数据的全面收集，方便进行下一步的研究。因此本专利技术不仅适用于现场快速检测，还适用于以科研为目的的检测。
[0010]优选地，本专利技术新型冠状病毒核酸检测试剂盒还包括缓冲液、dNTPs、Mg
2+
、Bst DNA聚合酶、逆转录酶和RNase抑制剂、荧光染料。
[0011]更优选地，新型冠状病毒核酸检测试剂盒还包括环己醇琥珀酸酯。添加环己醇琥珀酸酯可以使扩增更稳定，更容易进行，即使在样本含量极低的情况下也能进行准确的扩增。
[0012]更优选地，荧光染料为SYBR Green I。
[0013]优选地，新型冠状病毒核酸检测试剂盒还包括阳性对照组和阴性对照组。
[0014]更优选地，阳性对照组为携带新型冠状病毒基因组中的ORF1ab基因片段或新型冠状病毒基因组中的S基因片段的质粒。使用携带质粒ORF1ab或S基因片段的质粒作为阳性对照，制备方便并且位点信息准确；相比于使用携带外源基因的RNA假病毒更加准确，相比于临床样品SARS
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CoV
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2病毒更加容易获取并且不易发生生物安全问题。
[0015]更优选地，阴性对照组为无菌去离子水。
[0016]更优选地，新型冠状病毒核酸检测试剂盒包括六个容器，分别为：第一容器包括dNTPs、缓冲液；第二容器包括两组引物和荧光染料；第三容器包括Bst DNA聚合酶、逆转录酶和RNase抑制剂；第四容器包括Mg
2+
阳性对照组；第五容器包括阳性对照；第六容器包括阴性对照。本专利技术新型冠状病毒核酸检测试剂盒中所有的试剂均不需要低温储存和冷链运输，因此可以大大减少储存和运输成本，并且可以在不同区域进行使用。
[0017]更优选地，新型冠状病毒核酸检测试剂盒包括六个容器，分别为：第一容器包括dNTPs、缓冲液、环己醇琥珀酸酯；第二容器包括两组引物和荧光染料；第三容器包括Bst DNA聚合酶、逆转录酶和RNase抑制剂；第四容器包括Mg
2+
阳性对照组；第五容器包括阳性对照；第六容器包括阴性对照。
[0018]本专利技术还公开了使用新型冠状病毒核酸检测试剂盒检测新型冠状病毒的方法，包括如下步骤：提取样品DNA后，使用实时荧光定量单交叉引物等温扩增体系进行检测；所述体系包括PCR反应液、检测液、酶液、MgCl2、样品/阳性对照/阴性对照，去离子水。
[0019]优选地，使用本专利技术试剂盒进行检测后的结果判定标准包括如下条件：阴性对照品：无CT值并且无典型的扩增曲线；
阳性对照品：CT值≤36且出现典型的扩增曲线。
[0020]本专利技术有如下优点：本专利技术新型冠状病毒核酸检测试剂盒可以对两个基因靶位同时进行检测，可以有效避免假阴性或者假阳性结果的出现。本专利技术提供的新型冠状病毒核酸检测试剂盒的操作方法仅需要进行一次加样，有效避免了污染样本，并且还能减少操作人员与样品的接触，尽可能本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测新型冠状病毒的引物，包括两组引物，每组引物包含一对剥离引物、一对交叉扩增引物、一对检测引物，分别是：第一组：剥离引物：如SEQ ID NO.1所示的正向引物和SEQ ID NO.2所示的反向引物；交叉扩增引物：如所SEQ ID NO.3示的正向引物和SEQ ID NO.4所示的反向引物；检测引物：如SEQ ID NO.5所示的正向引物和SEQ ID NO.6所示的反向引物；第二组：剥离引物：如SEQ ID NO.7所示的正向引物和SEQ ID NO.8所示的反向引物；交叉扩增引物：如SEQ ID NO.9所示的正向引物和SEQ ID NO.10所示的反向引物；检测引物：如SEQ ID NO.11所示的正向引物和SEQ ID NO.12所示的反向引物。2.根据权利要求1所述的检测新型冠状病毒的引物，其特征在于，所述两组引物均适用于实时荧光定量交叉引物等温扩增技术。3.根据权利要求1所述的检测新型冠状病毒的引物，其特征在于，所述第一组引物用于检测新型冠状病毒基因组中的ORF1ab基因；所述第二组引物用于检测新型冠状病毒基因组中的S基因。4.一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒，包括权利要求1
‑
3任一项所述的检测新型冠状病毒的引物。5. 根据权利要求4所述的新型冠状病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、缓冲液、Mg
2+
、Bst DNA聚合酶、逆转录酶、...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯瑞娟，章贤骏，李海锋，陈倩倩，
申请(专利权)人：杭州安誉科技有限公司，
类型：发明
国别省市：