咖啡醇的医药新用途制造技术

本发明专利技术提供了咖啡醇在制备用于预防和/或治疗肾组织纤维化药物的应用。咖啡醇包括以下应用：a1：制备预防和/或治疗肾组织纤维化的药物；a2：预防和/或治疗肾组织纤维化；a3：抑制Hippo

【技术实现步骤摘要】
咖啡醇的医药新用途


[0001]本专利技术属于天然产物医药
，尤其涉及咖啡醇在制备预防或治疗肾纤维化药物中的应用。

技术介绍

[0002]慢性肾脏病(chronic kidney disease)在全球患病率为10
‑
12％，且呈逐年上升趋势，慢性肾小球肾炎、高血压肾病、糖尿病肾病、肾间质疾病、肾小管性疾病、先天性获得性肾脏疾病以及不合理服用肾毒性药物等均可引起慢性肾脏病，最终进展至终末期肾衰竭(End
‑
stage renal disease)，成为致死的高危因素。肾脏纤维化(renal fibrosis)是各种原因引起的慢性肾脏病发展到终末期肾衰竭的早期关键的、共同的病理改变，严重影响肾脏功能。肾脏纤维化病因和发病机制非常复杂，目前在预防和治疗上均无有效的方法。因此，寻找理想的能干预、逆转肾纤维化的药物靶点及开发有效的逆转肾纤维化的药物，对在早期阶段预防各种慢性疾病导致的终末期肾衰竭的发生具有重要的意义。
[0003]肾脏纤维化的分子机制很复杂，还没有得到很好的阐释。近年来一些研究表明，Hippo信号通路的下游效应子YAP/TAZ在肾组织纤维化的进展中起到了重要作用。在以肾小管间质纤维化为病理特征的IgA肾病或膜性肾病患者的肾脏中，TAZ呈高表达状态。在急性肾损伤后的再生和纤维化阶段，肾小管上皮细胞中的YAP水平升高。在三种不同的小鼠肾病模型(梗阻性、糖尿病和毒素诱导的肾损伤)中，观察到肾小管间质中TAZ核聚集增加。在肾小管上皮细胞中，YAP过表达促进细胞增殖，SAV1缺失引起的YAP/TAZ活化引发EMT样表型改变，促进肾间质纤维化。在腹腔注射嘌呤霉素氨基核苷诱导的肾小球疾病大鼠模型的足细胞中也发现了YAP/TAZ的激活。YAP在足细胞中的过表达增加了几种ECM相关蛋白的水平，如胶原COL6A1、其受体BCAM和基质金属蛋白酶ADAMTS1，从而促进了基底膜的增厚和硬化。体外研究发现，YAP/TAZ可通过机械调节，激活成纤维细胞，并持续诱导ECM的产生。Hippo信号通路可与其它纤维化经典信号相互作用，调节纤维化进程。当Hippo信号激活时，阻止YAP入核，使Smad、β
‑
catenin在核内的积累和转录活性降低，影响TGF
‑
β、Wnt的信号转导。进一步研究表明，Hippo/SAV1通路通过TAZ诱导的TGF
‑
β1和受体II的表达调节肾小管间质纤维化；Wnt5a可能通过上调YAP/TAZ加剧TGF
‑
β1诱导的巨噬细胞M2极化，从而驱动纤维化反应；使用YAP/TAZ抑制剂verteporfin可阻断TGF
‑
β诱导的肾脏成纤维细胞中Smad2/3的信号转导，抑制体内外纤维化发生。Liang等人的研究也证实了抑制YAP/TAZ可以阻断TGF
‑
β1诱导的成纤维细胞转化为肌成纤维细胞(myofibroblast，MF)以及ECM的产生。在UUO小鼠模型中，无论是使用verteporfin抑制还是特异性敲除Gli阳性细胞中的YAP/TAZ，均减轻了肾脏纤维化的发生。此外，他们还发现了大部分激活的YAP(胞核中)位于α
‑
平滑肌肌动蛋白(α
‑
smooth muscle actin,α
‑
SMA，MF的标志物)阳性和PDGFR
‑
α阳性的间质细胞中，肾小管细胞的胞质、胞核中也观察到了YAP；其中，大于80％的PDGFR
‑
α阳性或α
‑
SMA阳性细胞都呈YAP阳性。这些结果说明了PDGFR
‑
α+细胞中，Hippo信号通路的确参与了纤维化调控，对YAP的抑制作用改善肾小管间质炎症和纤维化。
[0004]咖啡醇是一种有机化合物，分子式为C20H28O3，是咖啡中的一种双萜化合物，目前尚未见有关其抑制肾纤维化作用的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的之一在于提供一种咖啡醇的应用，为如下a1、a2、a3或a4：
[0006]a1：制备预防和/或治疗肾组织纤维化的药物；
[0007]a2：预防和/或治疗肾组织纤维化；
[0008]a3：抑制Hippo
‑
YAP信号通路；
[0009]a4：建立肾组织纤维化动物医学模型。
[0010]优选的，所述药物的活性成分包含咖啡醇。
[0011]优选的，所述肾组织纤维化的药物为治疗慢性肾脏病的药物。
[0012]优选的，抑制Hippo
‑
YAP信号通路。
[0013]优选的，所述肾组织纤维化动物医学模型的建立方法包括以下步骤：
[0014]S1：分组：将动物分为假手术组和单侧输尿管结扎组；
[0015]S2：给予结扎组动物一定剂量的咖啡醇；
[0016]S3：造模；
[0017]S4：造模后给药7天后取左肾，进行肾脏病理学分析。
[0018]应当理解，在步骤S1之前、步骤S1和S2之间、步骤S2和S3之间、步骤S3和S4之间及步骤S4之后还可以包括其他步骤，且均在本专利技术的保护范围之内。
[0019]优选的，根据权利要求4所述的应用，其特征在于，在S3中，单侧输尿管结扎组的处理步骤为：将小鼠适应性喂养7天，于第8天在无菌条件下造模；各模型分别以1％戊巴比妥钠(60mL/kg)腹腔注射麻醉后，剪除左腹部毛，依次用聚维酮碘、75％乙醇消毒手术区皮肤；然后依次切开左腹部皮肤、肌肉，暴露左肾，游离输尿管，分别在肾盂处和输尿管上1/3处用4
‑
0丝线结扎后，剪断输尿管，然后逐层缝合，消毒；假手术组依次行上述步骤，但输尿管只游离不结扎。
[0020]优选的，在S2中，咖啡醇的浓度为0.3mg/kg。
[0021]应当理解，本专利技术中的咖啡醇的浓度并不限于以上，本领域技术人员可以根据需要选择任意浓度的咖啡醇，且均在本专利技术的保护范围之内。
[0022]优选的，在S3中，腹部正中切口2cm。
[0023]在本专利技术的一些优选方案中，采用单侧输尿管结扎法建立小鼠肾纤维化模型，实验分为3组：正常对照组、模型组、咖啡醇用药组。
[0024]通过Masson染色法检测肾组织纤维化程度及病理改变，Western blot检测肾组织中α
‑
SMA蛋白表达的变化。
[0025]在本专利技术的一些优选方案中，利用TGF
‑
β重组蛋白诱导NIH 3T3小鼠胚胎成纤维细胞形成肌成纤维细胞来模拟组织纤维化过程。
[0026]用Western blot检测细胞不同浓度咖啡醇对磷酸化YAP蛋白的表达。
[0027]所述四种剂量用药组中咖啡醇用量分别为2.5μM、5μM、10μM、20μM。用In
‑
cell Western检测TGF
‑
β和咖啡醇处理后YAP/TA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.咖啡醇的应用，为如下a1、a2、a3或a4：a1：制备预防和/或治疗肾组织纤维化的药物；a2：预防和/或治疗肾组织纤维化；a3：抑制Hippo
‑
YAP信号通路；a4：建立肾组织纤维化动物医学模型。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物的活性成分包含咖啡醇。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肾组织纤维化的药物为治疗慢性肾脏病的药物。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肾组织纤维化动物医学模型的建立方法包括以下步骤：S1：分组：将动物分为假手术组和单侧输尿管结扎组；S2：给予结扎组动物一定剂量的咖啡醇；S3：造模；S4：造模后给药7天后取左肾，进行肾脏病理学分析。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，在S3中，单侧输尿管结扎组的处理步骤为：将小鼠适应性喂养7天，于第8天...

【专利技术属性】
技术研发人员：王帅玉，董彦君，毛艺融，任亚琪，范开，郝智慧，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：