一种蛋白质稳定剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种蛋白质稳定剂及其制备方法，包括下述原料：高分子量透明质酸，中分子量透明质酸，低分子量透明质酸，寡聚透明质酸，乙酰化透明质酸，聚丙烯酸钠，乙二胺四乙酸二钠二水合物，苯甲基磺酰氟，氯化镁，聚乙二醇甲醚，氯化钠或氯化钾，ProClin 950，ProClin 300，牛血清白蛋白，胶原蛋白，二丙二醇或丙三醇，磷酸盐或Tris

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白质稳定剂及其制备方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种蛋白质稳定剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]蛋白质是一种具有复杂的空间立体结构的大分子物质，易受外界条件的影响发生变性。蛋白质稳定性与组成中的氨基酸种类有关系，例如含有巯基的氨基酸，最常见的是半胱氨酸，会降低蛋白质的稳定性，尤其在某些金属离子，Cu
2+
、Zn
2+
等存在时，蛋白质对空气中的氧更为敏感，而易发生不可逆变性。蛋白质活性的保存已经成为生物
的重大难题。目前，蛋白质的长期保存一般用真空冷冻干燥方法保存，该保存方法的优点是，活性保存效果理想，保存时间长，但是存在缺点是操作繁琐，需要特殊的仪器，成本高，需要水做复溶剂等，蛋白质以冻干形式和溶液形式使用和存储。如果在制备，储存和处理的关键阶段未使用适当的稳定条件，则干燥和冷冻过程可能导致蛋白质变性。
[0003]在临床检测、生命科学研究中，蛋白质检测试剂不仅要有一定的敏感度和特异性，其重复性和稳定性也是非常重要的。良好的稳定性，是其数据可靠性的一个重要标志。但是，一些酶类及蛋白标记物质，其稳定性是非常差的，在一般条件下极易降解或变性，导致检测试剂的整体失效。如在化学发光免疫分析(CLIA)中，酶结合物经稀释后很容易丧失活性，而酶活性的降低或丧失，都直接影响检测结果的准确性。因此，如何保持蛋白质尤其是酶的活性的稳定是蛋白质检测中的关键技术。又如胃泌素17(Gastrin 17，G
‑
17)是小分子多肽，在离体血液中很不稳定，采血之后就开始快速降解，理论上在2
‑
8℃保存时间只有3h，要开发胃泌素17检测试剂盒，如何保证G
‑
17的稳定是一个难点。
[0004]近年来，人们发现了一些有助于提高蛋白质溶液稳定性的物质，目前常见的用来增加蛋白质稳定性的方法：1.选择各种添加剂，例如甘油，山梨醇，海藻糖。2.使用市场上可售的稳定剂成品：比如高甲氧基果胶和丙二醇藻酸盐组成用于稳定酸性水成液如汁液中蛋白质悬浮体的蛋白质稳定剂。但他们都有着很明显的局限性：要么保持蛋白质稳定性的能力不够，要么跟后续的实验体系产生冲突；所以应用性十分有限。可以在一定程度上保持蛋白质的活性，但是效果仍然不理想。
[0005]一般认为蛋白质的结构和环境条件决定了蛋白质的稳定性。外部因素，如温度、pH值和盐、金属离子或其他污染物的存在可能使蛋白质变性。当蛋白质被吸附到实验容器的一侧时，也会变性。蛋白质必须在稳定其天然结构的环境中储存和使用。

技术实现思路

[0006]本申请的主要目的在于提供一种成本低廉，能长时间保护蛋白活性的蛋白质稳定剂及其制备方法。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]一种蛋白质稳定剂，包括下述重量份的原料：高分子量透明质酸0.2
‑
2份，中分子量透明质酸0.1
‑
3份，低分子量透明质酸0.1
‑
3份，寡聚透明质酸0.1
‑
5份，乙酰化透明质酸
0.05
‑
2份，聚丙烯酸钠0.1
‑
3份，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.01
‑
1份，苯甲基磺酰氟0.005
‑
2份，氯化镁0.05
‑
2份，聚乙二醇甲醚0.01
‑
2份，氯化钠或氯化钾0.05
‑
2份，ProClin 950 0.01
‑
0.9份，ProClin 300 0.01
‑
0.9份，牛血清白蛋白0.1
‑
6份，胶原蛋白0.05
‑
7份，二丙二醇或丙三醇0.1
‑
1份，磷酸盐或Tris
‑
HCl缓冲溶液。
[0009]上述一种蛋白质稳定剂，作为一种优选的实施方案，包括下述重量份的原料：高分子量透明质酸0.5份，中分子量透明质酸0.1份，低分子量透明质酸0.2份，寡聚透明质酸0.3份，乙酰化透明质酸0.05份，聚丙烯酸钠0.3份，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.03份，苯甲基磺酰氟0.5份，氯化镁0.5份，聚乙二醇甲醚0.1份，氯化钾0.09份，ProClin 950 0.05份，ProClin 300 0.06份，牛血清白蛋白0.2份，胶原蛋白6份，二丙二醇或丙三醇0.3份，磷酸盐或Tris
‑
HCl缓冲溶液。
[0010]上述一种蛋白质稳定剂，作为一种优选的实施方案，包括下述重量份的原料：高分子量透明质酸0.4份，中分子量透明质酸0.8份，低分子量透明质酸0.3份，寡聚透明质酸0.1份，乙酰化透明质酸0.6份，聚丙烯酸钠0.5份，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.5份，苯甲基磺酰氟1份，氯化镁0.2份，聚乙二醇甲醚0.9份，氯化钾0.9份，ProClin 950 0.9份，ProClin 300 0.9份，牛血清白蛋白4份，胶原蛋白7份，二丙二醇1份，磷酸盐或Tris
‑
HCl缓冲溶液。
[0011]优选地，所述高分子量透明质酸为分子量＞2000Kda的透明质酸；所述中分子量透明质酸为500Kda≤分子量≤2000Kda的透明质酸；所述低分子量透明质酸为10Kda≤分子量＜500Kda的透明质酸；所述寡聚透明质酸为分子量＜10Kda的透明质酸。
[0012]其中缓冲液为调节稳定剂的pH值，起到缓冲作用，高中低及寡聚透明质酸和乙酰化透明质酸保护蛋白骨架和构象不受外界影响，起到稳定蛋白作用，高分子聚丙烯酸钠和聚乙二醇甲醚保护蛋白骨架，牛血清白蛋白和胶原蛋白保护蛋白，起到载体作用，二丙二醇或丙三醇为分散剂，乙二胺四乙酸二钠二水合物和苯甲基磺酰氟为蛋白酶抑制剂，ProClin 950和ProClin 300为防腐剂。本专利技术所述蛋白质稳定剂的各原料相互作用，能有效保持蛋白质的稳定性。
[0013]本申请的第二方面，提供一种蛋白质稳定剂的制备方法，包括以下步骤：
[0014](1)将上述各组分加入到磷酸盐或Tris
‑
HCl缓冲溶液中，并混合搅拌至完全溶解；
[0015](2)用氢氧化钠或盐酸调节pH值在7.0
‑
8.0之间，加入缓冲液将混合液调至100份；
[0016](3)过滤步骤(2)所得混合液，罐装得所述蛋白质稳定剂。
[0017]上述一种蛋白质稳定剂的制备方法，作为一种优选的实施方案，步骤(1)中，混合搅拌的速度为20
‑
3000rpm。
[0018]上述一种蛋白质稳定剂的制备方法，作为一种优选的实施方案，所述过滤为采用0.2
‑
0.8微米的滤膜或惰性材质的过滤填充柱进行过滤。
[0019]上述一种蛋白质稳定剂的制备方法，作为一种优选的实施方案，所述罐装为在洁净区进行，根据客户需求灌装一定量，密封室温保存。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蛋白质稳定剂，其特征在于，包括下述重量份的原料：高分子量透明质酸0.2
‑
2份，中分子量透明质酸0.1
‑
3份，低分子量透明质酸0.1
‑
3份，寡聚透明质酸0.1
‑
5份，乙酰化透明质酸0.05
‑
2份，聚丙烯酸钠0.1
‑
3份，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.01
‑
1份，苯甲基磺酰氟0.005
‑
2份，氯化镁0.05
‑
2份，聚乙二醇甲醚0.01
‑
2份，氯化钠或氯化钾0.05
‑
2份，ProClin 950 0.01
‑
0.9份，ProClin 300 0.01
‑
0.9份，牛血清白蛋白0.1
‑
6份，胶原蛋白0.05
‑
7份，二丙二醇或丙三醇0.1
‑
1份，磷酸盐或Tris
‑
HCl缓冲溶液。2.根据权利要求1所述一种蛋白质稳定剂，其特征在于，包括下述重量份的原料：高分子量透明质酸0.5份，中分子量透明质酸0.1份，低分子量透明质酸0.2份，寡聚透明质酸0.3份，乙酰化透明质酸0.05份，聚丙烯酸钠0.3份，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.03份，苯甲基磺酰氟0.5份，氯化镁0.5份，聚乙二醇甲醚0.1份，氯化钾0.09份，ProClin 950 0.05份，ProClin 300 0.06份，牛血清白蛋白0.2份，胶原蛋白6份，二丙二醇或丙三醇0.3份，磷酸盐或Tris<...

【专利技术属性】
技术研发人员：高俊顺，高俊莉，高金波，王洪，
申请(专利权)人：杭州广科安德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：