环状RNACircNFIB在肝内胆管细胞癌诊断、治疗及预后中的用途制造技术

本发明专利技术公开了环状RNA CircNFIB在肝内胆管细胞癌诊断、治疗、预后中的用途，基于发明专利技术人对环状RNA cNFIB(CircBase ID:hsa_circ_0086376)在肝胆管癌细胞生长和转移中的功能和机制研究，提供一种诊断肝内胆管细胞癌的试剂盒、治疗肝内胆管细胞癌的药物组合物，以及环状RNA cNFIB作为治疗靶点在肝内胆管细胞癌的预后、诊断和治疗中的应用。诊断和治疗中的应用。诊断和治疗中的应用。

【技术实现步骤摘要】
环状RNA CircNFIB在肝内胆管细胞癌诊断、治疗及预后中的用途


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及环状RNA CircNFIB在诊断、治疗肝内胆管细胞癌，以及肝内胆管细胞癌预后中的应用。

技术介绍

[0002]肝内胆管细胞癌(Intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC)是第二常见的原发性肝脏恶性肿瘤。由于非酒精性脂肪性肝病和丙型肝炎患病率的增加，肝内胆管细胞癌的发病率在全球范围内呈增长态势，过去10年平均每年增长4.4％。ICC在早期通常是无症状的，大多数患者诊断出ICC时已处于晚期，可选用的治疗手段有限，造成临床效果不佳。
[0003]当前，根治性切除仍是治愈ICC的主要手段，但60％的手术患者存在复发或转移性疾病。因此，迫切需要进一步探寻ICC转移的分子机制，确定能够抑制转移的新治疗靶点以改善ICC患者的生存结果。
[0004]环状RNA(circRNAs)是共价键形成的环形结构的非编码RNA，通常由pre
‑
mRNA的外显子反向剪切产生。深度RNA测序和生物信息学已证明环状RNA在转录物组中大量存在。环状RNA呈封闭式的环状结构，不易被RNase R酶消化，相较于线性RNA能够更稳定地存在于生物体中。越来越多的研究证明环状RNA在肝细胞癌、结直肠癌、胶质母细胞癌、胆管癌的肿瘤发生和进展中发挥着重要的作用。从机制上讲，一些环状RNA通过吸附微小RNA或结合蛋白来调控基因表达，一些环状RNA用作蛋白质相互作用的平台，一些环状RNA可编码功能肽。但是，目前关于环状RNA在ICC转移中的作用研究甚少。
[0005]环状RNA cNFIB(CircBase ID:hsa_circ_0086376)包含基因NFIB的第3个至第6个外显子，其环化的核苷酸序列有363个碱基，目前尚未有任何关于环状RNA cNFIB在诊断、治疗肝内胆管细胞癌，以及肝内胆管细胞癌预后中应用的报道。

技术实现思路

[0006]丝裂原活化蛋白激酶(mitogen
‑
activated protein kinases，MARK)包括三个主要的亚家族：细胞外调节蛋白激酶(ERK)，c
‑
Jun氨基末端激酶(JNK)或应激活化蛋白激酶(SAPK)，以及丝裂原活化蛋白激酶14(MARK14)。其中，ERK信号通路包括激酶RAS、RAF、MEK和ERK，是一个三层或四层的磷酸化级联，将上游信号从膜受体传递到一系列下游效应基质中。RAS/RAF/MEK/ERK通路的失调激活或者依赖性增强是包括ICC在内的许多人类癌症的共同特征。
[0007]cNFIB(CircBase ID:hsa_circ_0086376)，也即circNFIB，其cDNA序列如SEQ ID NO：1所示，cNFIB的序列如SEQ ID NO：2所示。cNFIB的结构为SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列首尾连接而成的环状结构。
[0008]专利技术人通过机理研究发现，环状RNA cNFIB与双特异性丝裂原活化蛋白激酶1(MEK1)竞争性地相互作用，诱导了MEK1与细胞外调节蛋白激酶ERK2分解，阻碍了ERK2的磷
酸化和转录活性，从而抑制了ERK信号通路和肿瘤转移。
[0009]通过分析cNFIB表达与ICC患者临床病理特征之间的关系发现，较低的cNFIB表达与更多的肿瘤数量、更高的CA19
‑
9水平，更晚的肿瘤分期、淋巴结转移、微血管侵犯相关，表明cNFIB参与了ICC进展，且cNFIB表达较低的患者的总生存期(Overall Survival，OS)和无复发生存率(Recurrence
‑
Free Survival，RFS)更短，通过单因素和多因素分析发现，cNFIB的表达降低被认为是OS和RFS的独立危险因素，表明低cNFIB表达水平可以作为ICC患者的重要的预后指标之一。功能性研究表明，cNFIB在体外和体内抑制了ICC细胞的增殖和转移。其中，体外实验表明，cNFIB的过表达能够显著地抑制细胞的生长、迁移和侵袭能力，体内实验表明，cNFIB过表达将抑制肿瘤的生长、肝内转移和肺转移。不仅如此，专利技术人还发现曲美替尼(trametinib)，一种MEK抑制剂，与编码cNFIB的慢病毒载体共同治疗相比于仅采用曲美替尼进行治疗，显示出了更强的肿瘤抑制作用，表明cNFIB的外源性过表达能够增强曲美替尼的抗肿瘤作用。
[0010]以上，实验结果及机理研究均表明环状RNA cNFIB在ICC细胞的生长与转移中发挥至关重要的作用，可作为治疗肝内胆管细胞癌的潜在的药物作用靶点。
[0011]本专利技术的目的在于基于专利技术人对环状RNA cNFIB在肝胆管癌细胞生长和转移中的功能和机制研究，提供一种诊断肝内胆管细胞癌的试剂盒、治疗肝内胆管细胞癌的药物组合物，以及环状RNA cNFIB作为治疗靶点在肝内胆管细胞癌的预后、诊断和治疗中的应用。
[0012]本专利技术的上述目的通过下述技术方案实现：
[0013]一种用于诊断肝内胆管细胞癌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括定量检测环状RNA的试剂，所述环状RNA的CircBase ID为hsa_circ_0086376。
[0014]进一步地，所述定量检测环状RNA的试剂包括用于扩增所述环状RNA的引物。
[0015]作为本专利技术中用于扩增所述环状RNA cNFIB的一种优选引物，所述引物包括如下引物对：
[0016]正向引物：5'
‑
CGAAAGAGATCAAGATTCTGGAC
‑
3'(SEQ ID NO：3)
[0017]反向引物：5'
‑
CCTGGGTTATGGGCGTTCT
‑
3'(SEQ ID NO：4)。
[0018]进一步地，所述试剂盒还包括肝组织RNA提取试剂、逆转录反应体系。所述RNA提取试剂为Trizol试剂，所述逆转录反应体系包括逆转录酶、缓冲液、RNase抑制剂、Oligo、dNTPs等。
[0019]本专利技术还提供一种药物组合物，所述药物组合物包括环状RNA和/或增加所述环状RNA表达量的试剂，以及药物学上可接受的载体，所述环状RNA的CircBase ID为hsa_circ_0086376。本技术方案中，药物组合物可以包含该环状RNA，环状RNA的过表达载体，其他能够增加所述环状RNA表达量的试剂，或者任意组合。
[0020]本专利技术进一步提供上述任一种药物组合物在制备用于抑制肝胆管癌细胞增殖、迁移的药物或治疗肝内胆管细胞癌的药物中的应用。
[0021]本专利技术还提供定量检测环状RNA cNFIB的试剂在制备用于诊断肝内胆管细胞癌的试剂盒中的用途，所述环状RNA cNFIB的CircBase ID为hsa_circ_0086376。
[0022]本专利技术还提供环状RNA cNFIB在制备或筛选治疗肝内胆本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于诊断肝内胆管细胞癌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括定量检测环状RNA的试剂，所述环状RNA的CircBase ID为hsa_circ_0086376。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述定量检测环状RNA的试剂包括用于扩增所述环状RNA的引物。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述引物包括：F：5'
‑
CGAAAGAGATCAAGATTCTGGAC
‑
3'(SEQ ID NO：3)R：5'
‑
CCTGGGTTATGGGCGTTCT
‑
3'(SEQ ID NO：4)。4.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括环状RNA和/或增加所述环状RNA表达量的试剂，以及药物学上可接受的载体，所述环状RNA的CircBase ID为hsa_circ_0086376。5.根据权利要求4所述的药...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书九页序列表二页附图七页，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：