一种醉茄素A在制备抗肿瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种醉茄素A在制备抗肿瘤药物中的应用，所述的抗肿瘤药物用于治疗肺癌。试验结果表明，醉茄素A可以抑制NSCLC细胞增殖、促进NSCLC细胞凋亡并且抑制NSCLC细胞迁移能力；同时，醉茄素A与厄洛替尼或奥西替尼的组合，可以发挥较强的协同作用，达到抑制NSCLC增殖，促进NSCLC凋亡的结果。促进NSCLC凋亡的结果。

【技术实现步骤摘要】
一种醉茄素A在制备抗肿瘤药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种醉茄素A在制备抗肿瘤药物中的应用。

技术介绍

[0002]肺癌是目前临床常见的恶性肿瘤之一，对人类健康危害极其严重。相关报道显示，近年来各个国家的肺癌发病率平均增长了15％～65％，已成为全世界范围内发病率和病死率最高的癌症之一。而其5年总体生存率从4％到17％不等，仍低于大多数其他类型的癌症。在所有的肺癌中，非小细胞肺癌(Non
‑
small cell lung cancer,NSCLC)占75％～80％，是临床上最常见的肺癌组织学类型。由于早期疾病通常无症状，大多数患者(61％)诊断为III期或IV期，这时已经失去了手术机会，化学治疗成为其标准治疗方式之一。然而近年来传统细胞毒性药物的疗效已经达到平台，即使辅以多种综合治疗手段，仍然不能显著提高肺癌的生存率。随着NSCLC驱动基因的发现和相应靶向药物的研究和应用，NSCLC的治疗已经走上了以基因为向导的个体化治疗之路。
[0003]醉茄素A(Withaferin A，WA)是从植物南非醉茄中提取出来的活性成分之一，其分子结构式如图1A，数百年来在印度阿育吠陀医学中一直安全有效地被用于治疗各种疾病。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种醉茄素A在制备抗肿瘤药物中的应用，可以用于治疗肺癌，尤其是非小细胞肺癌。
[0005]一种醉茄素A在制备抗肿瘤药物中的应用，所述的抗肿瘤药物用于治疗肺癌；
[0006]所述的抗肿瘤药物包括活性成分和辅料；
[0007]所述的活性成分包含醉茄素A。
[0008]作为优选，所述的抗肿瘤药物用于治疗非小细胞肺癌。
[0009]作为优选，所述的抗肿瘤药物用于抑制NSCLC细胞增殖、促进NSCLC细胞凋亡或者抑制NSCLC细胞迁移。
[0010]作为优选，所述的活性成分由醉茄素A和其他靶向治疗肺癌的化合物组成；作为进一步的优选，所述的其他靶向治疗肺癌的化合物为厄洛替尼、奥西替尼中的一种或者两种。
[0011]作为优选，所述的其他靶向治疗肺癌的化合物为厄洛替尼；作为进一步的优选，所述的醉茄素A和厄洛替尼的摩尔比为0.25～2.5：0.5～10，此时，两种药物具有一定的协同作用；作为进一步的优选，所述的醉茄素A和厄洛替尼的摩尔比为1：0.5～10，此时CI＜0.4，两者具有强协同作用；作为更进一步的优选，所述醉茄素A的浓度为1μM，所述厄洛替尼的浓度为0.5～10μM。
[0012]作为另外的优选，所述的其他靶向治疗肺癌的化合物为奥西替尼；作为优选，所述的醉茄素A和奥西替尼的摩尔比为1～15：1～15。此时，两种药物具有一定的协同作用；作为进一步的优选，所述的醉茄素A的浓度为1μM，所述的奥西替尼的浓度为1～10μM，或者，所述的醉茄素A的浓度为2.5μM，所述的奥西替尼的浓度为10μM，又或者，所述的醉茄素A的浓度
为5μM，所述的奥西替尼的浓度为5～10μM，此时CI＜0.4，两者具有强协同作用。
[0013]同现有技术相比，本专利技术的有益效果体现在：
[0014](1)本专利技术通过试验结果表明，醉茄素A可以抑制NSCLC细胞增殖、促进NSCLC细胞凋亡并且抑制NSCLC细胞迁移能力；
[0015](2)本专利技术通过试验结果表明，醉茄素A与厄洛替尼或奥西替尼的组合，可以发挥较强的协同作用，达到抑制NSCLC增殖，促进NSCLC凋亡的结果。
附图说明
[0016]图1为实施例1中WA抑制NSCLC细胞增殖的结果；
[0017]图2为实施例2中WA促进NSCLC细胞凋亡的结果；
[0018]图3为实施例3中WA抑制NSCLC细胞迁移能力的结果
[0019]图4为实施例4中WA与厄洛替尼联合应用协同抑制NSCLC增殖，促进NSCLC凋亡的结果；
[0020]图5为实施例5中WA与奥西替尼联合应用协同抑制NSCLC增殖，促进NSCLC凋亡的结果。
具体实施方式
[0021]下面结合具体实施例和附图对本专利技术做进一步的描述。
[0022]实施例1
[0023]本实施例通过MTT实验检测WA对三种肺癌细胞(H460、H1975和PC
‑
9)的抗增殖作用。具体过程如下：
[0024]在96孔板以3000
‑
5000/孔的密度铺入肿瘤细胞，置于37℃恒温培养箱内过夜使之贴壁。次日换入100μL新鲜的完全培养基，再加1μL/孔的对应浓度的药物(0.1～20μM)。48h后于避光环境下加入MTT工作液(5mg/ml)25μL/孔。3
‑
4h后弃去上清液，加入DMSO 150μL/孔，震荡5分钟充分溶解后放置于酶标仪内，检测波长选择490nm，测定各孔的吸收值(OD)。结果如图1B所示，WA在H460、H1975和PC
‑
9四种细胞中的半数抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration，IC50)分别是1.572μM、2.441μM和4.980μM。
[0025]接着我们进行了细胞克隆实验考察WA对上述几种肿瘤细胞集落形成能力的影响，以细胞集落形成率与集落形成大小表示细胞独立生存能力。在6孔板内铺入细胞500
‑
800个/孔，置于37℃恒温培养箱内过夜使之贴壁。次日换入1mL新鲜的完全培养基，再加入1μL/孔的对应浓度的药物(0，2.5，5，7.5μM)，以DMSO作为溶剂配制，再放入培养箱继续培养。药物作用6
‑
12h后，换入2mL不含药物的新鲜完全培养基。之后每3日更换一次培养基。2周后弃去上清液，PBS清洗后加4％多聚甲醛固定15分钟。然后再加PBS清洗，加入结晶紫染色液染色20分钟。最后PBS清洗至孔板底部透明无色。静置数天自然干燥，拍照。不同浓度药物处理后的集落形成结果显示，WA可以抑制肺癌细胞株的克隆形成能力，并呈浓度依赖性(图1C)。
[0026]使用EdU检测细胞增殖能力：在6孔板中铺入细胞10w个/孔，置于37℃恒温培养箱内过夜使之贴壁。次日换入1mL新鲜的完全培养基，再加入1μL/孔的对应浓度的药物(0，2.5，5，7.5mM)，以DMSO作为溶剂配制，再放入培养箱继续培养。药物作用24h后加入含EdU试剂的完全培养基(1:1000)，37℃孵育2h。PBS清洗5min后加4％多聚甲醛室温固定30min，
2mg/mL甘氨酸中和5min，PBS清洗5min后加0.5％TritonX
‑
100渗透10min，PBS清洗5min。使用Apollo染色反应液室温避光孵育30min，0.5％TritonX
‑
100清洗10min。使用1X Hoechst 33342反应液室温避光孵育30min，PBS清洗后置于荧光显微镜下成像。EdU增殖实验结果也提示WA处理可抑制细胞增殖活性(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种醉茄素A在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物用于治疗肺癌；所述的抗肿瘤药物包括活性成分和辅料；所述的活性成分包含醉茄素A。2.根据权利要求1所述的醉茄素A在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物用于治疗非小细胞肺癌。3.根据权利要求1所述的醉茄素A在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物用于抑制NSCLC细胞增殖、促进NSCLC细胞凋亡或者抑制NSCLC细胞迁移。4.根据权利要求1～3任一项所述的醉茄素A在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的活性成分由醉茄素A和其他靶向治疗肺癌的化合物组成。5.根据权利要求4所述的醉茄素A在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的其他靶向治疗肺癌的化合物为厄洛替尼、奥西替尼中的一种或者两种。6.根据权利要求5所述的醉茄素A在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的其他靶向治疗肺癌的化合物为...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄晓颖，赵承光，杨乐和，郑丹丹，周峰，朱文静，王岩茂，王丹丹，姚丹，王良兴，
申请(专利权)人：温州医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：