【技术实现步骤摘要】
一种与控制美洲南瓜浅白色果皮紧密连锁的分子标记、引物及应用
[0001]本专利技术属于分子标记
，具体涉及一种与控制美洲南瓜浅白色果皮紧密连锁的分子标记、引物及应用。
技术介绍
[0002]美洲南瓜(Cucurbita pepo L.)是葫芦科作物(Cucurbitaceae)南瓜属(Cucurbita)重要的栽培品种之一，其幼嫩果实可菜用，成熟种子可食用或加工成南瓜籽油，且具有适应性好、栽培容易、产量高等特点。南瓜果色的变化程度是衡量果实发育和成熟状态的重要观察指标，对果实品质判断具有重要指导意义，且对类胡萝卜素和叶绿素的积累和代谢也具有重要研究价值。美洲南瓜果皮颜色是南瓜重要的商品性状，直接影响消费者的购买能力。幼嫩果实的果皮大都为浅绿色或浅黄色，随着果实发育成熟逐渐显现为浅白色、浅黄色、明黄色、浅绿色、墨绿色等。除了遗传因素，环境因素也会影响果实颜色的转色，从而影响其果实品质及商品价值。开展美洲南瓜浅色和绿色性状的研究，并选育出符合消费者喜好的果色，具有广阔的研究应用价值和经济价值。
[0003]传统育种方法利用多年回交方法，根据植株成熟果实的颜色性状进行选育，存在选育周期长、消耗大量人力物力、需要有多年育种经验者等问题。分子标记多态性丰富，辨识度高，检测手段简单、快速，检测结果精确。与目的性状紧密连锁的分子标记可用于标记辅助选择育种，加速育种进程。因此，开发美洲南瓜绿色果皮性状紧密连锁的分子标记，对于提高美洲南瓜果实外观品质，揭示类胡萝卜素和叶绿素的积累和代谢分子机制具有十分重要的意义。>
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的是为了在美洲南瓜的苗期快速、高效鉴定美洲南瓜浅白果皮性状，加速南瓜选育进程。
[0005]本专利技术提供了一种与控制美洲南瓜浅白色果皮紧密连锁的分子标记，所述分子标记为以下(a)或(b)或为(a)和(b)的组合：
[0006](a)SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，该序列与美洲南瓜深绿茎性状基因W连锁；SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，该序列与美洲南瓜浅绿茎性状基因w连锁；
[0007](b)SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列，该序列与美洲南瓜深绿茎性状基因W连锁；SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列，该序列与美洲南瓜浅绿茎性状基因w连锁。
[0008]进一步地限定，扩增所述(a)组核苷酸序列的引物为：SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列和SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列。
[0009]进一步地限定，扩增所述(b)组核苷酸序列的引物为：SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列。
[0010]本专利技术提供了一种鉴定美洲南瓜浅白色果皮的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求
植株自交获得1572株F2分离群体，通过对F2群体的果色表型分析，确定了美洲南瓜浅白果皮属于单基因控制的显性性状，绿果皮属于隐性性状。分别取F2分离群体单株叶片提取DNA，利用BSA
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seq和分子标记的方法筛选出与浅白果皮性状基因W紧密连锁的分子标记。利用高密度图谱的分子标记，最终提供的两个与印度南瓜红果皮紧密连锁的分子标记，分别坐落在控制目标性状基因的两侧，两标记遗传距离为0.7cM，便于浅白果皮分子标记辅助育种体系的建立。本专利技术的InDel紧密连锁分子标记区分果色准确率为99％以上，简单易操作、重复性好、低成本、有效缩短育种周期，可应用于美洲南瓜育种中。
[0023]本专利技术还提供了利用上述分子标记快速培育浅白果皮美洲南瓜的应用。利用连续回交结合分子标记的方法，浅白果皮
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为非轮回亲本，绿果皮
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为轮回亲本，利用本专利技术的两个GP
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01引物(SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6)和GP
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02引物(SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8)扫描回交群体，根据PCR扩增产物的电泳条带，快速准确的改良绿果皮
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的果色性状。利用多态性好的InDel分子标记将有助于建立美洲南瓜浅白果皮性状的分子标记辅助育种体系。
附图说明
[0024]图1为InDel分子标记GP
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01和GP
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02和控制美洲南瓜浅白果皮基因W紧密连锁，每一个叉号代表1个单交换事件；
[0025]图2为InDel标记GP
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01P1，P2，F1，F2群体PCR产物的电泳条带，其中M为D2000Marker，条带长度由高到低分别为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp，P1代表浅白果皮品系
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，P2代表绿果皮品系
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，F1为P1和P2的杂交第一代，F2为F1代自交后代，F2浅白果皮群体和F2绿果皮群体分别表示在F2群体中随机挑选的10株浅白果皮和10株绿果皮植株；
[0026]图3为InDel标记GP
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02P1，P2，F1，F2群体PCR产物的电泳条带，其中M为D2000Marker，条带长度由高到低分别为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp，P1代表浅白果皮品系
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，P2代表绿果皮品系
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，F1为P1和P2的杂交第一代，F2为F1代自交后代，F2浅白皮群体和F2绿果皮群体分别表示在F2群体中随机挑选的10株浅白果皮和10株绿果皮植株。
具体实施例
[0027]下面结合具体实施方法，进一步阐述本专利技术。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0028]浅白果皮的标准：植株果实表皮叶绿素含量大于45mg/L范围内；
[0029]绿果皮的标准：植株果实表皮叶绿素含量小于10mg/L范围内；
[0030]本专利技术提及的果实是指美洲南瓜授粉后40天后果实。
[0031]分子标记GP
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01(SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2)和GP
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02(SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4)。
[0032]实施例1.与控制美洲南瓜浅白果皮性状紧密连锁的分子标记的筛选。
[0033]1.F2群体的构建
[0034]本实例选取美洲南瓜高代自交品系浅白果皮
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和绿果皮
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为杂交亲本，构
建分离群体。F1代表现为浅白果皮，F1代自交产生F2代分离群体，在田间鉴定1572个F2代个体中的浅白：绿果皮表型，用卡方分析进行验证符合3：1比率，因此美洲南瓜浅白果皮性状本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种与控制美洲南瓜浅白色果皮紧密连锁的分子标记，其特征在于，所述分子标记为以下(a)或(b)或为(a)和(b)的组合：(a)SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，该序列与美洲南瓜深绿茎性状基因W连锁；SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，该序列与美洲南瓜浅绿茎性状基因w连锁；(b)SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列，该序列与美洲南瓜深绿茎性状基因W连锁；SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列，该序列与美洲南瓜浅绿茎性状基因w连锁。2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，扩增所述(a)组核苷酸序列的引物为：SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列和SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，扩增所述(b)组核苷酸序列的引物为：SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列。4.一种鉴定美洲南瓜浅白色果皮的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1
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3任一项所述的分子标记组合物。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：10
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Buffer、dNTP、DNA模板、Taq酶和ddH2O。6.一种鉴定美洲南瓜浅白色果皮性状的方法，其特征在于，所述方法的具体步骤为：(1)提取待检测样品的DNA；(2)以步骤(1)所述的DNA为模板，利用SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列和SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列进行PCR反应，再利用SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列进行PCR反应，如果扩增的条带为255nt和291nt，则待检测植株为浅白果皮纯合株，如果扩增的片段大小为291nt和323nt，或255nt和232nt，则待检测植株为绿果皮杂合株。7.一种育种浅白色果皮美洲南瓜的方法，其特征在于，所述方法的具体步骤为：1)以美洲南瓜浅白果皮品系
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为母本，以绿果皮品系为父本，将所述母本与父本进行杂交，所得F1代与所述父本进行回交，得到后代BC1F1，分别利用SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列和SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列与SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列扫描BC1F1群体，选择经SEQ...
【专利技术属性】
技术研发人员：屈淑平，王云莉，罗玉松，徐文龙，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：
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