【技术实现步骤摘要】
基于石墨烯的黄颡鱼蛋白酶抑制剂含量测定方法及装置
[0001]本专利技术涉及黄颡鱼成分检测领域,特别是基于石墨烯的黄颡鱼蛋白酶抑制剂含量测定方法及装置。
技术介绍
[0002]黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)属于水飞蓟形目中的蓝鲶科,是一种商业上重要的水产养殖鱼类,深受亚洲消费者的喜爱。在中国,黄颡鱼养殖已成为一个新兴产业,2018年的年产量为48万吨,由于其优良的肉质感官品质和丰富的营养,黄鲶养殖呈持续增长趋势。据报道,黄颡鱼含有丰富的粗蛋白质、矿物质元素、多不饱和脂肪、维生素E,必需氨基酸比例较高。然而,国内外市场需求的增加促使黄鲶在密集条件下养殖(约3000kg/667m2)。由于传染病的危害日益严重,养殖黄颡鱼的经济损失巨大。
[0003]沙奎那韦、利托那韦和茚地那韦是有效的选择性蛋白酶抑制剂,通常用作抗病毒药物。蛋白酶抑制剂的工作原理是,如果病毒侵入易感宿主细胞,凭借宿主细胞的酶系统、原料和能量复制其核酸,并在宿主细胞核糖体的帮助下翻译病毒的蛋白质,它就能独立生存。这些药物可以与蛋白酶分子活性中心上的化学基团结合,使蛋白酶活性下降甚至失活,达到抵抗病毒的作用。
[0004]早在2005年,国家农业部就已经禁止在动物养殖中使用人类抗病毒药物。然而,许多非法企业仍然将其用于农业和水产养殖业的感染预防和疾病治疗,以缩短养殖周期,迅速获得经济效益。长期大量使用这些药物会导致动物中毒,诱发病毒株的变异,严重威胁人类健康。因此,建立一种高效的蛋白酶抑制剂的检测方法是非常重要和迫切 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.基于石墨烯的黄颡鱼蛋白酶抑制剂含量测定方法,其特征在于,包括如下流程:A、样品提取物制备:蒸馏水清洗黄颡鱼可食用部分后用高速匀浆器以6000g的浓度均质,最后以改良的QuEChERS方法提取上清液作为样品提取物;B、KCC
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1制备:以改良法制备KCC
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1;C、氧化石墨(GO)制备:采用改进的Hummer发制备GO;D、石墨烯/KCC
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1(G/KCC
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1)复合材料制备:采用水蒸气诱导内水解法制备G/KCC
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1复合材料;E、G/KCC
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1 PT
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SPE;F、UPLC
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MS/MS分析;G、数据统计分析:使用单因素方差分析(ANOVA)对经UPLC
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MS/MS分析获得的数据进行分析并与相应标准相匹配,得出黄颡鱼中蛋白酶抑制剂的种类及含量。2.根据权利要求1所述的基于石墨烯的黄颡鱼蛋白酶抑制剂含量测定方法,其特征在于,步骤A所述的样品提取物制备,其具体步骤如下:从黄颡鱼中取得可食用的鱼肉然后用蒸馏水洗净;用高速匀浆器Ultra Turrax以6000g的浓度进行均质;取5g鱼肉匀浆放入50mL离心管中,加入乙腈/水/乙酸(9:1:0.1,v/v/v,25mL)和中性氧化铝(500mg)溶液混合得混合物;将混合物剧烈震动10分钟后在4℃下9000g离心10分钟;提取离心后的上清液得样品提取物。3.根据权利要求1所述的基于石墨烯的黄颡鱼蛋白酶抑制剂含量测定方法,其特征在于,步骤B所述的KCC
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1制备,其具体步骤如下:B1、将尿素(0.60g)和CPB(1.10g)完全溶解在水(30mL)中;B2、添加环己烷(30mL)和2
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丙醇(0.94mL);B3、逐滴添加正硅酸乙酯(3mL),得B2混合物;B4、在70℃下搅拌B2混合物20小时,得B3溶液;B5、将B3溶液在8000g下离心10分钟;B6、依次用丙酮、去离子水和无水乙醇进行洗涤;B7、真空下干燥12小时后在500℃下煅烧4小时获得KCC
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1。4.根据权利要求1所述的基于石墨烯的黄颡鱼蛋白酶抑制剂含量测定方法,其特征在于,步骤C所述的氧化石墨(GO)制备,其具体步骤如下:C1、取石墨片(3.0g)与高锰酸钾(18.0g)混合,并添加浓H2SO4/H3PO4(9:1,v/v,400mL),冷却至室温,得C1混合物;C2、将C1混合物倒入冰上并用H2O2(30%,5mL)淬火,得C2混合物;C3、将C2混合物在8000g下离心30分钟并取其固体残留物,得C3残留物;C4、将C3残留物在去离子水中透析除盐,最后冻干过夜得GO。5.根据权利要求1所述的基于石墨烯的黄颡鱼蛋白酶抑制剂含量测定方法,其特征在于,步骤D所述的石墨烯/KCC
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1(G/KCC
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1)复合材料制备,其具体步骤如下:D1、将GO分散在水中并进行超声处理,得GO均匀分散体溶液;D2、在GO均匀分散体溶液中以1:1(w/w)的质量比添加KCC
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1,的D2混合物;D3、将D2混合物在120℃下剧烈搅拌2小时,得D3品;D4、用乙醇水溶液(50%,v/v)洗涤D3品,得G/KCC
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1复合材料。
6.根据权利要求1所述的基于石墨烯的黄颡鱼蛋白酶抑制剂含量测定方法,其特征在于,步骤E所述的G/KCC
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1PT
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SPE,其具体步骤如下:E1、使用10%甲醇激活并调节G/KCC
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1尖端;E2、将样品提取物吸入G/KCC
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1尖端并分配回样品管中;E3、重复执行E2不少于20次;E4、使用1%乙酸(3mL)和水甲醇(2%,3mL)清洗G/KCC
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1尖端;E5、在G/KCC
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1针尖上喷洒1mL5%氢氧化铵(...
【专利技术属性】
技术研发人员:沈清,李运燕,颜凯,陈康,朱小芳,赵巧灵,王萍亚,
申请(专利权)人:舟山市食品药品检验检测研究院绍兴山舟检测科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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