一种牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂及其应用，其调节剂中含有促肾上腺皮质激素(ACTH)。本发明专利技术通过采用添加有促肾上腺皮质激素的体外培养液对牛卵泡颗粒细胞培养时，促肾上腺皮质激素能够促进牛卵泡颗粒细胞孕酮的合成，促肾上腺皮质激素能够下调P450arom基因的表达，上调P450scc基因的表达，但对StAR基因和3β

【技术实现步骤摘要】
一种牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂及其应用


[0001]本专利技术属于家畜配子胚胎工程
，具体涉及一种牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂及其应用。

技术介绍

[0002]卵泡颗粒细胞是卵泡中最重要的体细胞，对卵泡局部微环境调节有重要作用。早期颗粒细胞是由卵泡上皮细胞分化而来。颗粒细胞作为重要的类固醇激素合成细胞，可以促进卵巢合成与分泌雌激素和孕激素等多种激素及生长因子，通过缝隙连接调控卵泡膜细胞和卵母细胞的生长、分化和成熟，进而调控卵泡发育、成熟、排卵以及卵泡闭锁等过程。
[0003]奶牛在各种应激状态下，能通过激活下丘脑
‑
垂体
‑
肾上腺轴，引起肾上腺皮质激素分泌(Dobson等，2000)。皮质激素降低LH分泌的脉冲频率，最终使排卵前LH峰无法出现，从而导致排卵失败，诱发卵巢囊肿(Dobson等，2006；Ribadu等，2000；Colitti等，2007；Paredes等，2011)。卵巢囊肿是引起奶牛不孕症最常见的原因之一，其严重影响着奶牛的繁殖效率，制约着奶牛场的发展和养殖业的经济效益。据国外研究报道表明，卵巢囊肿的发病率为6.7％～13.1％(Wiltbank等，2002)。卵巢囊肿能够降低受胎率，延长产犊间隔，增加配种次数及淘汰率，从而影响奶牛的繁殖力，最终降低奶牛场的经济效益，给奶牛业造成严重的经济损失。
[0004]外源促肾上腺皮质激素(ACTH)可诱导奶牛发生卵泡囊肿，其主要通过激活下丘脑
‑
垂体
‑
肾上腺轴，改变LH分泌的脉冲频率，使排卵前LH峰无法出现而不能排卵，继而形成卵巢囊肿，其机理与应激导致卵巢囊肿一致(Amweg等，2013；Biran等，2015；Velazquez等，2013)。而奶牛卵泡囊肿形成的影响因素较多，其行成是一个涉及多组织、激素及信号通路调控的及其复杂的生物学过程，以前的研究多从卵泡囊肿奶牛血清、卵泡液激素变化及受体基因表达变化展开，虽取得了一些进展，但因生产实践中，当明确为卵泡囊肿时，所进行研究表现出的激素及基因表达变化，在时间上不能完全说明卵泡无法正常排卵时的机体异常变化状态，加上卵泡囊肿形成的不可预知性，造成研究者解析其形成的分子机制有一定困难性。目前，没有有关促肾上腺皮质激素对牛卵泡颗粒细胞影响的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂，用于促进牛卵泡颗粒细胞体外培养合成孕酮。
[0006]本专利技术的目的还在于提供促肾上腺皮质激素的一种新的用途，具体为促肾上腺皮质激素用于促进牛卵泡颗粒细胞孕酮的合成中的应用。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用以下的技术方案为：
[0008]一种牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂，用于促进牛卵泡颗粒细胞体外培养合成孕酮，其包括含有浓度为10
‑
10
～10
‑6mol/L的促肾上腺皮质激素的基础培养液。
[0009]如上所述的牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂，优选地，所述基础培养液为DMEM和
Ham
’
s F
‑
12按体积比为1:1的混合液。
[0010]如上所述的牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂，所述基础培养液还包括有按体积比的10％的胎牛血清，浓度为100U/mL的青霉素和浓度为0.1mg/ml的链霉素。
[0011]如上所述的牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂，优选地，促肾上腺皮质激素的浓度为10
‑7mol/L。
[0012]如上所述的牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂，优选地，所述促肾上腺皮质激素是重组鼠源促肾上腺皮质激素蛋白。
[0013]一种促进牛卵泡颗粒细胞体外分化的培养方法，其是将牛泡颗粒细胞在如上所述的牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂中培养。
[0014]促肾上腺皮质激素在促进牛卵泡颗粒细胞体外合成类固醇激素中的应用。
[0015]促肾上腺皮质激素在制备用于促进牛卵泡颗粒细胞体外分化合成药物中的应用。
[0016]促肾上腺皮质激素在用于促进牛卵泡颗粒细胞体外合成孕酮中的应用。
[0017]如上所述的应用，优选地，所述促肾上腺皮质激素在牛卵泡颗粒细胞体外培养中所用的浓度为10
‑
10
～10
‑6mol/L。
[0018]进一步，优选地，所述促肾上腺皮质激素在牛卵泡颗粒细胞体外培养中所用的浓度为10
‑7mol/L。
[0019]如上所述的应用，优选地，牛卵泡颗粒细胞体外培养所用的培养基为含有按体积比为1:1的DMEM和Ham
’
s F
‑
12培养液为基础培养基，并添加体积比为10％的胎牛血清和浓度为100U/mL的青霉素及浓度为0.1mg/ml的链霉素。
[0020]本专利技术的有益效果在于：
[0021]本专利技术提供了一种牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂，用于在牛卵泡颗粒细胞进行体外培养时，促肾上腺皮质激素可促进P450scc的表达，抑制P450arom的表达，但对StAR和3β
‑
HSD表达无影响。促肾上腺皮质激素作为牛卵巢功能的内分泌调控因子，通过上调类固醇激素的合成，进而加速颗粒细胞的分化。
[0022]本专利技术提供了促肾上腺皮质激素的一种新的用途，用于促进牛卵泡颗粒细胞体外培养中孕酮的合成。进一步地，将促肾上腺皮质激素应用在牛卵泡颗粒细胞的促进类固醇合成的制剂中，具有良好的应用价值。促肾上腺皮质激素可作为新型的牛卵泡颗粒细胞促进类固醇激素合成药物制剂在家畜胚胎工程上推广应用。
附图说明
[0023]图1为不同浓度的促肾上腺皮质激素在添加IGF1处理时，颗粒细胞孕酮合成情况的比较图。
[0024]图2为全部加IGF1时，在不加和加促肾上腺皮质激素处理时，颗粒细胞P450scc基因的表达结果图。
[0025]图3为全部加IGF1时，在不加和加促肾上腺皮质激素处理时，颗粒细胞P450arom基因的表达结果图。
[0026]图4为全部加IGF1时，在不加和加促肾上腺皮质激素处理时，颗粒细胞StAR基因的表达结果图。
[0027]图5为全部加IGF1时，在不加和加促肾上腺皮质激素处理时，颗粒细胞3β
‑
HSD基因
的表达结果图。
[0028]其中，上述图中*表示存在差异(P<0.05)，mol/L简写为M。
具体实施方式
[0029]以下实施例用于进一步说明本专利技术，但不应理解为对本专利技术的限制。在不背离本专利技术精神和实质的前提下，对本专利技术所作的修饰或者替换，均属于本专利技术的范畴。
[0030]若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。本专利技术实施例中所用卵巢采自河北省大厂县屠宰场，促肾上腺皮质激素由南京莱昂生物科技有限公司合成。所用试剂来源如下：Ham
’
s F
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂，其特征在于，用于促进牛卵泡颗粒细胞体外培养合成孕酮，其包括含有浓度为10
‑
10
～10
‑6mol/L的促肾上腺皮质激素的基础培养液。2.如权利要求1所述的牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂，其特征在于，所述基础培养液为DMEM和Ham
’
s F
‑
12按体积比为1:1的混合液。3.如权利要求2所述的牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂，其特征在于，所述基础培养液还包括有按体积比的10％的胎牛血清，浓度为100U/mL的青霉素和浓度为0.1mg/ml的链霉素，所述促肾上腺皮质激素是重组鼠源促肾上腺皮质激素蛋白。4.一种促进牛卵泡颗粒细胞体外分化的培养方法，其特征在于，其是将牛泡颗粒细胞在如权利要求1
‑
4中所述的牛卵泡颗粒细胞体外培养调节剂中培养。5.促肾上腺...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘彦，杨婷，许晓玲，白佳桦，冯涛，秦玉圣，宋玉清，肖霖力，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：