用于重塑抗体醣型之融合蛋白制造技术

本揭示内容提供融合蛋白，其包含与内切醣苷酶或其截短片段或突变体之N

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于重塑抗体醣型之融合蛋白


[0001]本专利技术是关于醣型重塑；特定地，是关于用于重塑抗体醣型之融合蛋白。

技术介绍

[0002]抗体(亦称为免疫球蛋白(Ig))是在免疫应答中发挥主要作用之醣蛋白。IgG抗体及IgG抗体之片段已开发为用于治疗各种各样疾病之重要生物疗法。天然抗体之恒定(Fc)区通常N
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醣基化。特定醣基化(即，醣型)显著影响Fc效应物功能及抗体之稳定性。因此，改良抗体之治疗效能之一种途径是改质Fc区中之醣型。
[0003]Fc醣型通常包括核心岩藻醣残基。在癌症疗法之情形中，已报导在Fc区中具有醣型且具有较低核心岩藻醣含量之抗肿瘤抗体对NK细胞上之CD16(FcγRIIIA)展示较高结合亲和性。较高亲和性导致对抗肿瘤细胞之抗体依赖性细胞毒性之经改良诱导。
[0004]为产生具有低含量核心岩藻醣之抗体，已开发多种策略。举例而言，可将核心岩藻醣添加所需之岩藻醣基转移酶的抑制剂添加至用于生长抗体产生细胞之培养基。在另一实例中，抗体产生细胞可经遗传工程化以缺失岩藻醣基转移酶活性。
[0005]在不同策略中，可在活体外使用纯化酶以直接以可预测方式改良抗体醣型。此策略之一个优点是可产生抗体且然后经改良以具有明确定义之低核心岩藻醣Fc醣型以及期望之生物性质。此将有助于使用高产量之非哺乳动物表现系统代替通常用于确保适当核心糖基化之哺乳动物表现系统来产生抗体。US 20190185898提供岩藻醣苷酶突变体，所述突变体作为岩藻醣连接酶用于一系列生物醣肽及醣蛋白(包括完整的治疗性抗体)之核心岩藻醣基化。
[0006]然而，现有岩藻醣苷酶在自Fc区裂解核心岩藻醣方面效率低下。业内需要开发可有效且可预测地重塑抗体醣型之酶。

技术实现思路

[0007]融合蛋白提供于本揭示内容中。融合蛋白中多种酶之组装促进酶之协同作用，并展现可预测地重塑抗体醣型之有利作用。
[0008]在一态样中，本揭示内容提供融合蛋白，其包含与内切醣苷酶或其截短片段或突变体之N
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末端或C
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末端融合之岩藻醣苷酶或其截短片段或突变体；其中所述融合蛋白展现岩藻醣苷酶活性及内切醣苷酶活性二者。
[0009]岩藻醣苷酶之某些实施例包括(但不限于)酪蛋白乳酸杆菌(Lactobacillus casei)α
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L岩藻醣苷酶C(Alfc)、脆弱类杆菌(Bacteroides fragilis)岩藻醣苷酶(BF3242)、多形类杆菌(Bacteroides thetaiotamicron)α
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L
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岩藻醣苷酶(BT2970)、寡养菌保所杆菌(Emticicia oligotrophica)α
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L
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岩藻醣苷酶(EO0918)及米尔伊莉萨白菌(Elizabethkingia miricola)α
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(1
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6)岩藻醣苷酶(Emfuc3)、或其片段或其突变体。在一些实施例中，岩藻醣苷酶是酪蛋白乳酸杆菌α
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L岩藻醣苷酶C、米尔伊莉萨白菌α
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(1
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6)岩藻醣苷酶(Emfuc3)、或其截短片段或突变体。
[0010]内切醣苷酶之某些实施例包括(但不限于)酿脓链球菌内切醣苷酶S、酿脓链球菌内切醣苷酶S2或其片段或其突变体。特定地，内切醣苷酶是酿脓链球菌内切醣苷酶S2或其截短片段或突变体。
[0011]在一个实施例中，岩藻醣苷酶或内切醣苷酶是截短片段。内切醣苷酶之截短片段是其IgG结合结构域。在一些实施例中，内切醣苷酶之截短片段是酿脓链球菌内切醣苷酶S或酿脓链球菌内切醣苷酶S2之IgG结合结构域。
[0012]在一个实施例中，岩藻醣苷酶或内切醣苷酶是突变体多肽。特定地，内切醣苷酶突变体是在氨基酸位置
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D233处具有突变、优选
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D233Q之酿脓链球菌内切醣苷酶S。在一些实施例中，内切醣苷酶突变体是在氨基酸位置T138、D182、D184、D186、D226或T227处具有突变；优选具有T138E、T138M、T138Q、T138R、T138L、T138H、T138N、T138K、D182Q、D184M、D184Q、D184T、D184L、D184F、D184S、D184V、D184K、D184W、E186A、D226Q或T227Q之酿脓链球菌内切醣苷酶S2。
[0013]融合蛋白之某些实施例包括(但不限于)与以下各项融合之酪蛋白乳酸杆菌α
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L岩藻醣苷酶C：酿脓链球菌内切醣苷酶S、酿脓链球菌内切醣苷酶S2、酿脓链球菌内切醣苷酶S之IgG结合结构域、酿脓链球菌内切醣苷酶S2之IgG结合结构域、在氨基酸位置D233处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S、在氨基酸位置T138处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2、在氨基酸位置D182处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2、在氨基酸位置D184处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2、在氨基酸位置D186处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2、在氨基酸位置D226处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2或在氨基酸位置T227处具有突变酿脓链球菌内切醣苷酶S2。
[0014]特定地，融合蛋白包含选自由以下组成之群之氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、及204或其实质上类似之序列。优选地，融合蛋白具有选自由以下组成之群之氨基酸序列：SEQ ID NO:34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202及204或其实质上类似之序列。
[0015]在另一态样中，本揭示内容提供表现本文所述融合蛋白之核酸分子。核酸之某些实施例包括(但不限于)SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种融合蛋白，其包含与内切醣苷酶或其截短片段或突变体之N
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末端或C
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末端融合之岩藻醣苷酶或其截短片段或突变体；其中所述融合蛋白展现岩藻醣苷酶活性及内切醣苷酶活性二者。2.如权利要求1之融合蛋白，其中所述岩藻醣苷酶是酪蛋白乳酸杆菌(Lactobacillus casei)α
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L岩藻醣苷酶C(Alfc)、脆弱类杆菌(Bacteroides fragilis)岩藻醣苷酶(BF3242)、多形类杆菌(Bacteroides thetaiotamicron)α
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L
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岩藻醣苷酶(BT2970)、寡养菌保所杆菌(Emticicia oligotrophica)α
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L
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岩藻醣苷酶(EO0918)及米尔伊莉萨白菌(Elizabethkingia miricola)α
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(1
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6)岩藻醣苷酶(Emfuc3)或其片段或其突变体。3.如权利要求1之融合蛋白，其中所述岩藻醣苷酶是酪蛋白乳酸杆菌α
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L岩藻醣苷酶C、米尔伊莉萨白菌α
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(1
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6)岩藻醣苷酶(Emfuc3)或其截短片段或突变体。4.如权利要求1之融合蛋白，其中所述内切醣苷酶是酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)内切醣苷酶S、酿脓链球菌内切醣苷酶S2或其片段或突变体。5.如权利要求1之融合蛋白，其中内切醣苷酶之所述截短片段是其IgG结合结构域。6.如权利要求1之融合蛋白，其中所述内切醣苷酶之所述截短片段是酿脓链球菌内切醣苷酶S或酿脓链球菌内切醣苷酶S2之IgG结合结构域。7.如权利要求1之融合蛋白，其中所述内切醣苷酶突变体是在氨基酸位置D233处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S。8.如权利要求7之融合蛋白，其中所述内切醣苷酶突变体是在氨基酸位置D233Q处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S。9.如权利要求1之融合蛋白，其中所述内切醣苷酶突变体是在氨基酸位置T138、D182、D184、D186、D226或T227处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2。10.如权利要求1之融合蛋白，其中所述内切醣苷酶突变体是在氨基酸位置T138E、T138M、T138Q、T138R、T138L、T138H、T138N、T138K、D182Q、D184M、D184Q、D184T、D184L、D184F、D184S、D184V、D184K、D184W、E186A、D226Q或T227Q处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2。11.如权利要求1之融合蛋白，其包含与以下各项融合之酪蛋白乳酸杆菌α
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L岩藻醣苷酶C：酿脓链球菌内切醣苷酶S、酿脓链球菌内切醣苷酶S2、酿脓链球菌内切醣苷酶S之IgG结合结构域、酿脓链球菌内切醣苷酶S2之IgG结合结构域、在氨基酸位置D233处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S、在氨基酸位置T138处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2、在氨基酸位置D182处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2、在氨基酸位置D184处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2、在氨基酸位置D186处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2、在氨基酸位置D226处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2或在氨基酸位置T227处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2。12.如权利要求1之融合蛋白，其包含与以下各项融合之米尔伊莉萨白菌α
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(1
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6)岩藻醣苷酶：酿脓链球菌内切醣苷酶S、酿脓链球菌内切醣苷酶S2、酿脓链球菌内切醣苷酶S之IgG结合结构域、酿脓链球菌内切醣苷酶S2之IgG结合结构域、在氨基酸位置D233处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S、在氨基酸位置T138处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2、在氨基酸位置D182处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2、在氨基酸位置D184处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2、在氨基酸位置D186处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2、
在氨基酸位置D226处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2或在氨基酸位置T227处具有突变之酿脓链球菌内切醣苷酶S2。13.如权利要求1之融合蛋白，其包含选自以下之氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱国庆，黄琳雅，曾意芳，
申请(专利权)人：醣基生医股份有限公司，
类型：发明
国别省市：