H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株和制备方法及用途技术

本发明专利技术涉及病毒基因工程技术领域，具体涉及一种H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株和制备方法及用途，本发明专利技术提供的一种H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株，以麻疹病毒减毒株为骨架，将所述麻疹病毒减毒株中的融合蛋白编码基因F和血凝素蛋白编码基因H替换为包含H1a基因型麻疹病毒的融合蛋白编码基因F和血凝素蛋白编码基因H的核苷酸序列；本发明专利技术通过以现有的麻疹疫苗减毒株（如Schwarz）为骨架，分别将其免疫原性蛋白F，H替换为H1a基因型相关蛋白F，H，构建的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株，对H1a基因型麻疹病毒有更优的保护效果。麻疹病毒有更优的保护效果。麻疹病毒有更优的保护效果。

【技术实现步骤摘要】
H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株和制备方法及用途


[0001]本专利技术涉及病毒基因工程
，具体涉及一种H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株和制备方法及用途。

技术介绍

[0002]麻疹是一种由麻疹病毒（measles virus，MV）引起的以发热、呼吸道卡他症状和全身斑丘疹为特征的急性病毒性传染病，冬春季高发，严重危害儿童健康，随着麻疹减毒活疫苗的广泛使用，其发病率、死亡率大为下降。但据世界卫生组织(World Health Organization, WHO)报道，麻疹仍是严重威胁儿童健康的公共卫生问题之一。麻疹病毒只有一个血清型，却分8个基因组(A
‑
H)，24个基因型，这些基因型都曾在世界范围内流行。
[0003]现在国内外的麻腮风联合减毒活疫苗中麻疹疫苗为A基因型麻疹病毒。A基因型麻疹病毒免疫后对A基因型麻疹保护效价显著高于对H1a基因型麻疹病毒的保护效价。然而现在缺少针对H1a基因型麻疹病毒的疫苗。因此，本专利技术提供一种H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株和制备方法及用途，对H1a基因型麻疹病毒有更优的保护效果。

技术实现思路

[0004]因此，本专利技术要解决的第一个技术问题在于提供一种H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株和制备方法及用途，对H1a基因型麻疹病毒有更优的保护效果。
[0005]本专利技术要解决的第二个技术问题在于提供一种麻腮风联合减毒疫苗，将传统的麻腮风联合减毒活疫苗中的Schwarz麻疹疫苗替换为本专利技术针对国内流行的H1a基因型麻疹病毒的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株，从而实现对H1a基因型麻疹病毒更好的保护，可刺激机体产生抗麻疹病毒、腮腺炎病毒和风疹病毒的免疫力。
[0006]为此，本专利技术提供了如下的技术方案：本专利技术提供了一种H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株，以麻疹病毒减毒株为骨架，将所述麻疹病毒减毒株中的融合蛋白编码基因F和血凝素蛋白编码基因H替换为包含H1a基因型麻疹病毒的融合蛋白编码基因F和血凝素蛋白编码基因H的核苷酸序列，包含H1a基因型麻疹病毒的融合蛋白编码基因F和血凝素蛋白编码基因H的cDNA核苷酸序列具有如下（a）
‑
（c）中的任意一种：（a）具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或其互补链；或（b）在（a）中的如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经过取代、缺失或添加至少一个或几个的核苷酸得到的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株，且可诱发哺乳动物对H1a基因型麻疹病毒的免疫反应；或（c）具有与（a）中的如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列同源性为≥85％（较佳地≥90％，更佳地≥95％，例如，≥85％、≥86％、≥87％、≥88％、≥89％、≥ 90％、≥91％、≥92％、≥93％、≥94％、≥95％、≥96％、≥97％、≥98％或≥99％)的核苷酸序列，得到的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株，且可诱发哺乳动物对H1a基因型麻疹病毒的免疫反应。
[0007]可选的，所述麻疹病毒减毒株为麻疹疫苗减毒株Schwarz，Shanghai
‑
191，Moratern，或Rubeovax。
[0008]可选的，所述H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株命名为麻疹病毒rMV/FH（H1a），保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国，武汉，武汉大学，邮编:430072，保藏编号为CCTCC NO.V202183，保藏日期为2021年11月14日。
[0009]本专利技术提供了生物材料，包括如下1）
‑
7）中的任意一种：1）编码所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株的重组DNA分子；或2）含有所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株或1）中所述的重组DNA分子的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系；或3）含有所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株的重组病毒；或4）含有所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株或其传代培养病毒或3）中所述的重组病毒或其传代培养病毒的疫苗；或5）含有所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株或其传代培养病毒或3）中所述的重组病毒或其传代培养病毒的疫苗组合物；或6）含有所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株或其传代培养病毒或3）中所述的重组病毒或其传代培养病毒的联合疫苗；或7）含有所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株或其传代培养病毒或3）中所述的重组病毒或其传代培养病毒的免疫原性制剂。
[0010]可选的，所述疫苗为减毒活疫苗或病毒样颗粒。
[0011]可选的，所述疫苗组合物还包括药学上可接受的载体。
[0012]本专利技术提供了一种所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株的制备方法，包括如下步骤：构建所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株的全长cDNA的质粒；所述H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株的拯救。
[0013]可选的，所述H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株的拯救步骤包括如下步骤：将所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株的全长cDNA的质粒与麻疹相关辅助质粒共转染至宿主细胞中；培养所述宿主细胞，然后洗涤，换液，继续培养，将细胞进行传代的同时加入新的细胞，继续培养，直至细胞出现融合病变，收集细胞培养上清。
[0014]可选的，所述麻疹相关辅助质粒为分别包含麻疹病毒中的N基因、P基因和L基因的质粒；可选的，所述麻疹相关辅助质粒为pcDNA3.1
‑
N、pcDNA3.1
‑
P和pcDNA3.1
‑
L。
[0015]可选的，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，所述新的细胞为哺乳动物细胞。
[0016]可选的，所述宿主细胞为BSR
‑
T7/5细胞，所述新的细胞为Vero
‑
Slam细胞。
[0017]本专利技术提供了一种麻腮风联合减毒活疫苗，包括：所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株；或所述的生物材料；或所述的制备方法制备得到的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株。
[0018]可选的，还包括腮腺炎病毒减毒株或其传代培养病毒；和风疹病毒的减毒株或其
传代培养病毒；所述腮腺炎病毒减毒株或其传代培养病毒包括JL，S79或QS
‑
F
‑
SH2；所述风疹病毒的减毒株或其传代培养病毒包括BRD
‑
II或RA27/3。
[0019]可选的，所述麻腮风联合减毒活疫苗每剂量中，所述H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株或其传代培养病毒，腮腺炎病毒减毒株或其传代培养病毒，和风疹病毒的减毒株或其传代培养病毒的含量为：H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株或其传代培养病毒的活病毒不低于3.0 lgCCID
50
；腮腺炎病毒减毒株或其传代培养病毒的活病毒不低于3.7 lgCCID
50
；风疹病毒的减毒株或其传代培养病毒的活病毒不低于3.0 lgCCID
50
。
[0020]可选的，所述H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株或其传代培养病毒，腮腺炎病毒减毒株或其传代培养病毒，和风疹病毒的减毒株或其传本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株，其特征在于，以麻疹病毒减毒株为骨架，将所述麻疹病毒减毒株中的融合蛋白编码基因F和血凝素蛋白编码基因H替换为包含H1a基因型麻疹病毒的融合蛋白编码基因F和血凝素蛋白编码基因H的核苷酸序列，包含H1a基因型麻疹病毒的融合蛋白编码基因F和血凝素蛋白编码基因H的cDNA核苷酸序列具有如下（a）
‑
（c）中的任意一种：（a）具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或其互补链；或（b）在（a）中的如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经过取代、缺失或添加至少一个或几个的核苷酸得到的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株，且可诱发哺乳动物对H1a基因型麻疹病毒的免疫反应；或（c）具有与（a）中的如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列同源性≥85％的核苷酸序列，得到的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株，且可诱发哺乳动物对H1a基因型麻疹病毒的免疫反应。2.根据权利要求1所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株，其特征在于，所述麻疹病毒减毒株为麻疹疫苗减毒株Schwarz，Shanghai
‑
191，Moratern，或Rubeovax。3.根据权利要求1或2所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株，其特征在于，所述H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株命名为麻疹病毒rMV/FH（H1a），保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO.V202183。4.生物材料，其特征在于，包括如下1）
‑
7）中的任意一种：1）编码权利要求1
‑
3任一项所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株的重组DNA分子；或2）含有权利要求1
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3任一项所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株或1）中所述的重组DNA分子的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系；或3）含有权利要求1
‑
3任一项所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株的重组病毒；或4）含有权利要求1
‑
3任一项所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株或其传代培养病毒或3）中所述的重组病毒或其传代培养病毒的疫苗；或5）含有权利要求1
‑
3任一项所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株或其传代培养病毒或3）中所述的重组病毒或其传代培养病毒的疫苗组合物；或6）含有权利要求1
‑
3任一项所述的H1a基因型嵌合麻疹病毒减毒株或其传代培养病毒或3）中所述的重组病毒或其传代培养病毒的联合疫苗；或7）含有权利要求1
‑
3任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：安祺，田大勇，解丽霞，朱凤才，
申请(专利权)人：北京赛尔富森生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：