用于治疗出血性中风后不良继发性神经学后果的触珠蛋白制造技术

本发明专利技术一般涉及治疗或预防伴随血管外红细胞溶解和无细胞血红蛋白(Hb)释放进入脑脊液(CSF)的出血性中风后受试者的不良继发性神经学后果的方法，包括使有此需要的受试者CSF暴露于治疗有效量的触珠蛋白(Hp)并持续足以允许Hp或其功能类似物与无细胞Hb形成复合物的时间段，且由此中和无细胞Hb。本发明专利技术的方面还涉及包含Hp的人工CSF的组合物和试剂盒。还涉及包含Hp的人工CSF的组合物和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗出血性中风后不良继发性神经学后果的触珠蛋白


[0001]本专利技术通常涉及用于治疗和/或预防受试者在出血性中风(haemorrhagic stroke)进入脑脊液(CSF)隔室之后，特别是在蛛网膜下腔出血(SAH)之后的不良继发性神经学后果(neurolgical outcome)的方法和组合物。

技术介绍

[0002]本说明书中引用的所有参考文献、包括任何专利或专利申请通过引用并入本文，以便能够充分理解本专利技术。尽管如此，但是这些参考文献不应被视为构成本领域、澳大利亚或任何其他国家的公知常识的这些文献组成部分之一的承认。
[0003]出血性中风涉及脑内部或表面的血管破裂，出血进入周围组织。出血性中风的实例包括：i)脑内出血(本文称作ICH)，它涉及大脑中的血管破裂；ii)脑室出血(本文称作IVH)，其为出血进入脑室系统；和iii)蛛网膜下腔出血(本文称作SAH)，它涉及大脑与覆盖大脑的组织之间的空间称作蛛网膜下腔出血。大多数情况下，SAH由爆裂性神经瘤(本文称作aSAH)引起。SAH的其他原因包括头部损伤、出血性疾病和使用血液稀释剂。
[0004]约30％的IVH主要局限于受试者的脑室系统，且典型地由脑室内(intraventricular)创伤、动脉瘤、血管畸形或肿瘤引起，尤其是脉络丛。其余70％实际上是继发性的，是由于现有出血(无论是脑实质内(intraparenchymal)出血还是SAH出血)的扩大所致。已经发现IVH出现在35％的中度至重度创伤性脑损伤中。因此，如果没有广泛的相关损害，则IVH通常不会发生。
[0005]动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aSAH)是SAH最常见的病因，并且与最高的死亡率和长期神经功能失能(disability)相关
1,2
。尽管在动脉瘤修复和神经重症监护方面取得了进展，但欧洲的中位住院病死率为44.4％，美国为32.2％3。35％的幸存者报告出血事件发生后1年总体生活质量较差，83
‑
94％无法恢复工作4‑6。在美国因颅内动脉瘤破裂导致的aSAH的发病率估计为每10000人1例，每年约产生27000例新病例。此外，aSAH在女性中比男性更常见(2:1)；发病率最高的是55至60岁的人。
[0006]尽管在过去几十年中，在处置出血性中风患者方面有所改进并且随着死亡人数降低，但是该人群的残疾(disability)和死亡率仍然很高。脑损伤可在SAH后的第一天立即发生。这种早期脑损伤可以归因于对大脑的物理影响例如颅内压升高、疝气、脑内出血、脑室内出血和脑积水。随后出现了不良继发性神经学后果，包括血管造影脑血管痉挛(ACV)，在更严重的情况下，可导致迟发性脑缺血(DCI)和脑梗死。发生迟发性缺血性神经功能缺损(DIND)的不良继发神经学后果典型地在初次出血或出血后的第4天至第14天发生，并且是这些患者残疾和死亡的主要原因。DIND是一种独特的脑缺血综合征。头痛、脑膜炎和体温增加典型地伴随着意识的波动性下降和局灶性(focal)神经症状的出现。临床DIND可以通过延迟意识下降至少两个格拉斯哥昏迷量表(GCS)水平和/或新的局灶性神经功能缺损来定义。可在术后、临床恶化时以及监测期后进行连续CT扫描，以筛查迟发性梗死。这可以通过选定病例的MRI进行补充。DIND的发病机制仅部分了解，但被广泛认为是多因素的7。例如，
神经炎症在损伤扩展和脑损伤中起着关键作用。红细胞分解产物可导致炎症细胞因子的释放，从而触发血管痉挛和组织损伤8。外周免疫细胞在受损组织中被募集和激活。这些细胞可以进入脑实质并释放炎性细胞因子9。此外，固有的toll
‑
样受体在梗死后上调，导致广泛的神经炎症。神经炎症也与SAH后发生不良继发性后果有关
10
。发生脑血管痉挛(CV)的血管的白细胞粘附能力增加，导致迟发性神经功能恶化
15
。
[0007]炎症、脑微血栓形成、皮质弥漫性缺血、血脑屏障破坏和迟发性脑缺血(DCI)也可能导致脑损伤。
[0008]令人遗憾地，目前还没有针对这些过程的药物治疗在出血性中风中显示出功效。肠内尼莫地平和血管内治疗aSAH中的罪魁祸首动脉瘤仍然是唯一的治疗选择，有随机临床试验的证据支持，以改善患者的后果。因此，对于治疗和/或防止出血性中风后患者出现不良继发性神经学后果的特殊疗法的需求是迫切的和尚未得到满足的。

技术实现思路

[0009]在本专利技术的一个方面，提供了治疗或预防出血性中风伴随血管外红细胞溶解和无细胞(cell
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free)血红蛋白(Hb)释放进入脑脊液(CSF)后的受试者中的不良继发性神经学后果的方法，所述方法包括使由此需要的受试者的CSF暴露于治疗有效量的触珠蛋白(Hp)并持续使Hp与无细胞Hb形成复合物的足够时间段，且由此中和无细胞Hb。
[0010]在本专利技术的另一个方面，提供了药物组合物，其用于按照本文所述的方法治疗或预防受试者脑室内出血后的不良继发性神经学后果，所述组合物包含治疗有效量的触珠蛋白(Hp)和药学上可接受的载体。
[0011]在本专利技术的另一个方面，提供了药物组合物，其用于按照本文所述的方法治疗或预防受试者脑室内出血后的不良继发性神经学后果，所述组合物包含治疗有效量的触珠蛋白(Hp)和药学上可接受的载体。
[0012]在本专利技术的另一个方面，提供了治疗有效量的触珠蛋白(Hp)在制备用于按照本文所述的方法治疗或预防受试者脑室内出血后的不良继发性神经学后果的药物中的用途。
[0013]在本专利技术的另一个方面，提供了包含如本文所述的人工CSF或如本文所述的组合物的试剂盒。
附图说明
[0014]图1为通过斜坡方法(transclival approach)从新鲜屠宰的猪中分离猪基底动脉的示例性的实例。在解剖显微镜下制备每只动物5
‑
6个血管环(长度为2mm)，同时避免大量机械血管操作。
[0015]图2显示实验装置的方案和术中摄影，其中脑室外引流(external ventricular drain)(EVD)进入左侧侧脑室的额角，在右侧额叶(right frontal)白质中植入神经监测探头和枕下脊髓针。
[0016]图3显示来自数字减影血管造影(DSA)的血管直径的半自动量化。左图和右上方的嵌体显示了大脑前动脉(ACA)、大脑中动脉(MCA)、颈内动脉(ICA)的池部(cisternal part)和基底动脉中感兴趣的线性区域(ROI)的示例性选择(BA)。这些是在ACA、cICA和BA的直线段中自动设置的，间隔为0.5mm(5个)，并在MCA的曲线段(3个)中手动设置。对于所有的ROI，
血管直径根据Fischer等人2010(右下)先前描述的横截面(右中)的强度分布计算，并对相应血管的所有ROI取平均值。
[0017]图4显示无细胞Hb在使用分离的猪基底动脉的血管功能实验中的作用。A，在向缓冲液中加入MAHMA NONOate(60nM本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.治疗或预防出血性中风伴随血管外红细胞溶解和释放无细胞血红蛋白(Hb)进入脑脊液(CSF)后的受试者中的不良继发性神经学后果的方法，所述方法包括使此有需要的受试者的脑脊液暴露于治疗有效量的触珠蛋白(Hp)并持续足以使Hp与无细胞Hb形成复合物的时间段，且由此中和无细胞Hb。2.权利要求1的方法，其中所述出血性中风为自发性出血或创伤性出血。3.权利要求1或权利要求2的方法，其中所述出血性中风为脑室内出血或蛛网膜下腔出血。4.权利要求3的方法，其中所述蛛网膜下腔出血为动脉瘤性蛛网膜下腔出血。5.权利要求1
‑
4中任一项的方法，其中所述不良继发性神经学后果选自迟发性缺血性神经功能缺损(DIND)、迟发性脑缺血(DCI)、神经毒性、炎症、一氧化氮耗尽、氧化性组织损伤、脑血管痉挛、脑血管反应性和水肿。6.权利要求5的方法，其中所述不良继发性神经学后果为脑血管痉挛。7.权利要求5的方法，其中所述不良继发性神经学后果为迟发性缺血性神经功能缺损。8.权利要求5的方法，其中所述不良继发性神经学后果为迟发性脑缺血。9.权利要求1
‑
8中任一项的方法，其中所述不良继发性神经学后果为脑实质内不良继发性神经学后果。10.权利要求1
‑
9中任一项的方法，包括在出血发作后约21天内使CSF暴露于Hp或其功能类似物。11.权利要求10的方法，包括在出血发作后约2天
‑
约4天使CSF暴露于Hp。12.权利要求10的方法，包括在出血发作后约5天
‑
约14天使CSF暴露于Hp。13.权利要求1
‑
12中任一项的方法，包括向受试者颅内施用Hp。14.权利要求1
‑
12中任一项的方法，包括向受试者鞘内施用Hp。15.权利要求14的方法，其中将Hp鞘内施用进入椎管。16.权利要求14的方法，其中将Hp鞘内施用进入蛛网膜下腔。17.权利要求1
‑
12中任一项的方法，包括向受试者脑室内施用治疗有效量的Hp。18.权利要求13
‑
17中任一项的方法，其中CSF暴露于治疗有效量的Hp的时间段至少为约2分钟。19.权利要求18的方法，其中CSF暴露于治疗有效量的Hp的时间段至少为约2分钟
‑
约45分钟。20.权利要求18的方法，其中CSF暴露于治疗有效量的Hp的时间段至少为约2分钟
‑
约20分钟。21.权利要求18的方法，其中CSF暴露于治疗有效量的Hp的时间段至少为约4分钟
‑
约10分钟。22.权利要求1
‑
21中任一项的方法，其中Hp的治疗有效量至少与出血后受试者CSF中无细胞Hb的浓度等摩尔量。23.权利要求22的方法，还包括：(i)在出血后和使CSF暴露于Hp之前从受试者获得CSF样品；(ii)测量步骤(i)中获得的CSF样品中无细胞Hb的量；和(iii)基于来自步骤(ii)的无细胞Hb的浓度确定至少等摩尔量的Hp。24.权利要求1
‑
23中任一项的方法，其中治疗有效量的Hp为约2μM
‑
约20mM。
25.权利要求24的方法，其中治疗有效量的Hp为约2μM
‑
约300μM。26.权利要求24的方法，其中治疗有效量的Hp为约5μM
‑
约50μM。27.权利要求24的方法，其中治疗有效量的Hp为约10μM
‑
约30μM。28.权利要求1
‑
27中任一项的方法，还包括取出在CSF中形成的Hp:无细胞HB复合物。29.权利要求1
‑
28中任一项的方法，包括使CSF暴露于体外治疗有效量的Hp。30.权利要求29的方法，包括：(i)在出血后从受试者的CSF隔室获得CSF样品；(ii)向步骤(i)的CSF样品中加入Hp以获得富含Hp的CSF样品；(iii)向受试者施用富含Hp的CSF样品，由此受试者的CSF隔室暴露于治疗有效量的Hp一定时间段，足以使Hp与受试者的CSF隔室中的无细胞Hb形成复合物；和(iv)任选地重复步骤(i)
‑
(iii)。31.权利要求29的方法，包括：(i)在出血后从受试者的CSF隔室中取出一定体积的CSF；(ii)提供包含Hp的人工CSF；(iii)向受试者施用(ii)的人工CSF，由此使受试者的CSF隔室暴露于治疗有效量的Hp一定时间段，足以使Hp与受试者的CSF隔室中的无细胞Hb形成复合物；和(iv)任选地重复步骤(i)
‑
(iii)。32.权利要求29的方法，包括：(i)在出血后从受试者获得CSF；(ii)在允许Hp或其功能类似物与CSF中的无细胞Hb形成复合物的条件下使来自步骤(i)中的CSF暴露于Hp；(iii)在步骤(ii)之后从CSF中提取Hp:无细胞Hb复合物以获得与来自步骤(i)的CSF相比时具有较低量的无细胞Hb的Hb减少的CSF；(iv)任选地重复步骤(ii)
‑
(iii)，获得基本上不含无细胞Hb的Hb
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减少的CSF；和(v)将得自步骤(iii)或步骤(iv)的Hb减少的CSF施用于受试者的CSF隔室。33.权利要求32的方法，还包括在步骤(vi)之前向Hb
‑
减少的CSF中加入治疗有效量的Hp。34.权利要求32或权利要求33的方法，其中将Hp固定在底物上。35.权利要求34的方法，其中所述底物为亲和色谱树脂...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：瑞士杰特贝林生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：