一种I群禽腺病毒A、B、C、D和E种的检测方法及检测试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种I群禽腺病毒A、B、C、D和E种的检测方法及检测试剂盒。其通过设计得到的特异性引物组和探针组，实现在一个反应中同时对I群禽腺病毒A、B、C、D和E种进行快速准确的检测和鉴定。基于此设计得到的检测试剂盒具有较强的特异性和较高的灵敏度，可以有效检测出浓度为2.1

【技术实现步骤摘要】
一种I群禽腺病毒A、B、C、D和E种的检测方法及检测试剂盒


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及了一种I群禽腺病毒A、B、C、D和E种的检测方法及检测试剂盒。

技术介绍

[0002]I群禽腺病毒共有A、B、C、D和E五个种，A种包括FADV
‑
1、B种包括FADV
‑
5、C种包括FADV
‑
4和FADV
‑
10、D种包括FADV
‑
2、FADV
‑
3、FADV
‑
9和FADV
‑
11，E种包括FADV
‑
6、FADV
‑
7、FADV
‑
8a和FADV
‑
8b。国内主要流行A、C、D和E种，其中FADV
‑
4的毒性比较大，其会造成“安卡拉病”或“鸡心包积液综合征”。此外，某些血清型的感染还可引发禽群轻度呼吸道症状、产蛋下降、包涵体肝炎、肌胃糜烂症和免疫抑制等，使得禽群生长受阻和死亡率增加。因此，I群禽腺病毒给养殖厂带来巨大损失。
[0003]当前，对于I群禽腺病毒的检测主要是通检或主要集中在FADV
‑
4、FADV
‑
8a以及FADV
‑
8b的检测，无法对I群禽腺病毒进行检测区分，且尚没有对I群禽腺病毒的A、B、C、D和E五个种同时进行多重荧光PCR检测和鉴定的方法公开。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种I群禽腺病毒A、B、C、D和E种的检测方法及检测试剂盒，能够通过一次PCR扩增检测和鉴别出I群禽腺病毒A、B、C、D和E种，且具有较强的特异性和灵敏度。
[0005]本专利技术的第一个方面，提供一种检测和鉴别I群禽腺病毒的多重荧光定量PCR引物组，所述I群禽腺病毒包括I群禽腺病毒A、B、C、D和E种。
[0006]根据本专利技术的第一个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述引物组的核苷酸序列为：
[0007]I群禽腺病毒A、B、C、D和E种的引物是相同的，序列如下：
[0008]FADV
‑
F：5
’‑
CGAGATGGCGTACATGATCG
‑3’
(SEQ ID NO.1)；
[0009]FADV
‑
R：5
’‑
CCTGGGTCAAACCGAACATG
‑3’
(SEQ ID NO.2)。
[0010]本专利技术的第二个方面，提供一种同时检测和鉴别I群禽腺病毒的多重荧光定量PCR探针组，所述I群禽腺病毒包括I群禽腺病毒A、B、C、D和E种。
[0011]根据本专利技术的第二个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述探针组的核苷酸序列为：
[0012]I群禽腺病毒A：
[0013]FADV
‑
A
‑
P：5
’‑
CAGCAGCTGTCGGCCATCTGCA
‑3’
(SEQ ID NO.3)；
[0014]I群禽腺病毒B：
[0015]FADV
‑
B
‑
P：5
’‑
CCTGCACGCCCAAATCCAGCA
‑3’
(SEQ ID NO.4)；
[0016]I群禽腺病毒C：
[0017]FADV
‑
C
‑
P：5
’‑
CTACCGGGTGATGCAGGCTGTGCT
‑3’
(SEQ ID NO.5)；
[0018]I群禽腺病毒D：
[0019]FADV
‑
D
‑
P：5
’‑
ACCGTCCGGTGCGGTTCCGT
‑3’
(SEQ ID NO.6)；
[0020]I群禽腺病毒E：
[0021]FADV
‑
E
‑
P：5
’‑
CACCTGCACGCCCAAGTCTAACACG
‑3’
(SEQ ID NO.7)；
[0022]或者为这些序列的核苷酸互补序列。
[0023]在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述探针组的序列两端分别标有荧光基团和淬灭基团。
[0024]在本专利技术的一些更优选的实施方式中，所述各探针序列标记的荧光基团和淬灭基团各不相同。
[0025]在本专利技术的一些更优选的实施方式中，FADV
‑
A和FADV
‑
B探针序列标记的荧光基团都为FAM，猝灭基团为BHQ1；FADV
‑
C探针序列标记的荧光基团为TXR，猝灭基团为BHQ2，FADV
‑
D探针序列记的荧光基团为CY5，猝灭基团为BHQ2，FADV
‑
E探针序列标记的荧光基团为VIC，猝灭基团为BHQ2。
[0026]本专利技术的第三个方面，提供一种I群禽腺病毒的多重荧光定量PCR试剂，所述I群禽腺病毒包括I群禽腺病毒A、B、C、D和E种。
[0027]根据本专利技术的第三个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述PCR试剂中含有本专利技术的第一个方面中的引物组和/或本专利技术第二个方面的探针组。
[0028]本专利技术的第四个方面，提供了一种本专利技术第三个方面中的PCR试剂在制备I群禽腺病毒检测和鉴定试剂盒中的应用，所述I群禽腺病毒包括I群禽腺病毒A、B、C、D和E种。
[0029]根据本专利技术的第四个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述I群禽腺病毒检测和鉴定试剂盒中还包括PCR反应液、酶、阴性质控品和阳性质控品中的至少一种。
[0030]在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述PCR反应液包括100～300mM Tris、100～300mM KCl、10～30mM MgCl2、0.03％～0.05％吐温
‑
80(Tween
‑
80)、4.5％～5.0％甘油、0.1～5mM dNTP、10～20mM(NH4)2SO4和0.1％～0.3％二甲基亚砜(DMSO)。
[0031]在本专利技术的一些更优选的实施方式中，PCR反应液含有150mM Tris、100mM KCl、15mM MgCl2、0.03％Tween
‑
80、4.5％甘油、2.5mM dNTP，10mM(NH4)2SO4和0.15％DMSO。
[0032]在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述酶液由2U/μL的热启动Taq酶、25mM Tris、15％甘油和10mM二硫苏糖醇(DTT)组成。
[0033]在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述阴性质控品为双蒸水。
[0034]在本专利技术的一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测和鉴别I群禽腺病毒的多重荧光定量PCR引物组，其特征在于，所述I群禽腺病毒包括I群禽腺病毒A、B、C、D和E种；所述引物组的核苷酸序列为：I群禽腺病毒A、B、C、D和E种的引物是相同的，序列如下：FADV
‑
F：5
’‑
CGAGATGGCGTACATGATCG
‑3’
；FADV
‑
R：5
’‑
CCTGGGTCAAACCGAACATG
‑3’
。2.一种检测和鉴别I群禽腺病毒的多重荧光定量PCR探针组，其特征在于，所述I群禽腺病毒包括I群禽腺病毒A、B、C、D和E种；所述探针组的核苷酸序列为：I群禽腺病毒A探针：FADV
‑
A
‑
P：5
’‑
CAGCAGCTGTCGGCCATCTGCA
‑3’
；I群禽腺病毒B探针：FADV
‑
B
‑
P：5
’‑
CCTGCACGCCCAAATCCAGCA
‑3’
；I群禽腺病毒C探针：FADV
‑
C
‑
P：5
’‑
CTACCGGGTGATGCAGGCTGTGCT
‑3’
；I群禽腺病毒D探针：FADV
‑
D
‑
P：5
’‑
ACCGTCCGGTGC...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈志乐，朱兴彪，徐德峰，马星星，赵京鹏，许然，张友兵，徐贵峰，
申请(专利权)人：广州蔚捷生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：