靶向CD276的嵌合抗原受体、嵌合抗原受体T细胞及制备方法和制药应用技术

本发明专利技术公开了一种靶向CD276的嵌合抗原受体、嵌合抗原受体T细胞及制备方法和制药应用，属于生物医药技术领域。本发明专利技术公开的靶向CD276的嵌合抗原受体T细胞可以靶向表达CD276的肿瘤细胞，激活T细胞发挥细胞免疫作用，高效且特异性地杀伤CD276阳性肿瘤细胞，更好地维持嵌合抗原受体T细胞的活力和杀伤力，是有潜力的根治肝细胞癌的免疫细胞疗法。本发明专利技术经过体外功能测试，靶向CD276的嵌合抗原受体T细胞对CD276阳性肝癌细胞系有杀伤活性。对CD276阳性肝癌细胞系有杀伤活性。对CD276阳性肝癌细胞系有杀伤活性。

【技术实现步骤摘要】
靶向CD276的嵌合抗原受体、嵌合抗原受体T细胞及制备方法和制药应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及一种靶向CD276的嵌合抗原受体、嵌合抗原受体T细胞及制备方法和制药应用。

技术介绍

[0002]肝细胞癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤，占所有原发性肝癌的90％，是全球第二大致死性癌症。目前针对肝细胞癌的治疗方法比如化疗、放疗、肝切除术、消融疗法、靶向疗法如索拉菲尼、抗体疗法如免疫检查点抑制剂、血管内皮生长因子受体抑制剂，然而这些疗法的疗效都是不够的(Lee,Y.H.,et al.,Combinational Immunotherapy for Hepatocellular Carcinoma:Radiotherapy,Immune Checkpoint Blockade and Beyond.Frontiers in Immunology,2020.11.)，对病人和病人的家庭造成了难以挽回的伤害。因此迫切需要的新的治疗肝细胞癌的药物。
[0003]嵌合抗原受体T细胞(CAR
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T)疗法是新型的免疫细胞治疗方法，具有特异性且高效的杀伤表达相应抗原的肿瘤细胞的功能，它通过基因工程手段使嵌合抗原受体表达在T细胞表面，通过在体外制备和扩增嵌合抗原受体T细胞，然后回输至人体，激活自身免疫系统，发挥对肿瘤细胞的高效杀伤(1.Rafiq,S.,C.S.Hackett,and R.J.Brentjens,Engineering strategies to overcome the current roadblocks in CAR T cell therapy.Nature Reviews Clinical Oncology,2020.17(3):p.147
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167.；2.Benmebarek,M.R.,et al.,Killing Mechanisms of Chimeric Antigen Receptor(CAR)T Cells.International Journal of Molecular Sciences,2019.20(6).)嵌合抗原受体T细胞技术被认为是最有可能攻克癌症的疗法，并且靶向CD19的CAR
‑
T细胞在血液肿瘤中产生了良好的效果。目前全球已有6款CAR
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T药物获批上市，展现了CAR
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T细胞治疗在治疗癌症中的巨大应用前景。
[0004]CD276又称为B7
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H3，是属于B7家族的一类跨膜蛋白。CD276在多种癌症中高表达，包括肺腺癌、脑胶质瘤、神经母细胞瘤、胰腺癌和卵巢癌等，在正常组织中几乎不表达。靶向CD276的单克隆抗体在多种肿瘤模型中介导肿瘤的有效清除。CD276在肝细胞癌高表达并且与肝癌的进展和肿瘤病人的不良预后相关。这提示，CD276可以作为一个治疗肝细胞癌的有潜力靶点。
[0005]目前，靶向CD276的CAR
‑
T细胞对肝细胞癌和其它高表达CD276的恶性肿瘤的杀伤活性研究有限。

技术实现思路

[0006]为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种靶向CD276的嵌合抗原受体、嵌合抗原受体T细胞及制备方法和制药应用。
[0007]为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
[0008]本专利技术的内容之一在于，提供一种靶向CD276的嵌合抗原受体，所述靶向CD276的
嵌合抗原受体包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
[0009]优选地，所述靶向CD276的嵌合抗原受体的编码基因包括如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。
[0010]优选地，所述靶向CD276的嵌合抗原受体包括从氨基端到羧基端依次为靶向CD276的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内结构区的氨基酸序列。
[0011]进一步优选地，所述靶向CD276的单链抗体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。
[0012]更进一步优选地，所述靶向CD276的单链抗体的编码基因包括如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。
[0013]进一步优选地，所述胞外铰链区为CD8α铰链区。
[0014]更进一步优选地，所述CD8α铰链区的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。
[0015]更进一步优选地，所述CD8α铰链区的编码基因包括如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列。
[0016]当然，胞外铰链区还可以使用CD28铰链区、IgG1铰链区或IgG4铰链区。
[0017]进一步优选地，所述跨膜区为CD8α跨膜区。
[0018]更进一步优选地，所述CD8α跨膜区的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。
[0019]更进一步优选地，所述CD8α跨膜区的编码基因包括如SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列。
[0020]当然，跨膜区还可以使用CD4跨膜区、CD28跨膜区、CD3ζ跨膜区或ICOS的跨膜区。
[0021]进一步优选地，所述胞内结构区由4
‑
1BB共刺激结构区和CD3ζ信号结构区依次串联构成。
[0022]更进一步优选地，所述4
‑
1BB共刺激结构区的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。
[0023]更进一步优选地，所述4
‑
1BB共刺激结构区的编码基因包括如SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列。
[0024]进一步优选地，所述CD3ζ信号结构区的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。
[0025]更进一步优选地，CD3ζ信号结构区的编码基因包括如SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列。
[0026]当然，共刺激结构区还可以使用CD28、OX40、ICOS或CD27的胞内区。
[0027]本专利技术的内容之二在于提供一种靶向CD276的嵌合抗原受体T细胞，包括上述的靶向CD276的嵌合抗原受体；该靶向CD276的嵌合抗原受体的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
[0028]进一步地，所述靶向CD276的嵌合抗原受体CAR
‑
CD276的编码基因包括如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。
[0029]本专利技术的内容之三在于提供一种靶向CD276的嵌合抗原受体T细胞的制备方法，包括以下步骤：
[0030]1)提供靶向CD276的嵌合抗原受体CAR
‑
CD276的编码基因，所述的靶向CD276的嵌合抗原体CAR
‑
CD276的编码基因如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。
[0031]2)将所述CAR
‑
CD276的编码基因插入到pWPXLd载体中，得到pWPXLd
‑
CAR
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向CD276的嵌合抗原受体，其特征在于，该靶向CD276的嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.根据权利要求1所述的靶向CD276的嵌合抗原受体，其特征在于，编码靶向CD276的嵌合抗原受体的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。3.根据权利要求1所述的靶向CD276的嵌合抗原受体，其特征在于，该靶向CD276的嵌合抗原受体包括从氨基端到羧基端依次连接的靶向CD276的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内结构区的氨基酸序列。4.根据权利要求3所述的靶向CD276的嵌合抗原受体，其特征在于，所述靶向CD276的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，编码该靶向CD276的单链抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。5.根据权利要求3所述的靶向CD276的嵌合抗原受体，其特征在于，所述胞外铰链区为CD8α铰链区，其氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，编码该CD8α铰链区的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。6.根据权利要求3所述的靶向CD276的嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜区为CD8α跨膜区，其氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，编码该CD8α跨膜区的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示。7.根据权利要求3所述的靶向CD276的嵌合抗原受体，其特征在于，所述胞内结构区由4
‑
1BB共刺激结构区和CD3ζ信号结构区依次串联构成；其中：所述4
‑
1BB共刺激结构区的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，编码该4
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1BB共刺激结构区的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；所述CD3ζ信号结构区的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示，编码该CD3ζ信号结构区的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示。8.一种靶向CD276的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，包括权利要求1～7中任意一项所述的靶向CD276的嵌合抗原受体。9.一种靶向CD276的嵌合抗原受体T细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将靶向CD276的嵌合抗原受体CAR
‑
CD276的编码基因插入到pWPXLd载体中，得到pWPXLd
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CAR
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CD2...

【专利技术属性】
技术研发人员：万晓春，曹国政，
申请(专利权)人：中国科学院深圳理工大学筹，
类型：发明
国别省市：