一种2-苯甲酰基吡咯有关物质的高效液相色谱分析方法技术

本发明专利技术提供一种2

【技术实现步骤摘要】
一种2
‑
苯甲酰基吡咯有关物质的高效液相色谱分析方法


[0001]本专利技术涉及药物分析
，具体涉及一种2
‑
苯甲酰基吡咯有关物质的高效液相色谱分析方法。

技术介绍

[0002]酮咯酸氨丁三醇为吡咯烷羧酸衍生物，早在1990年国外就批准酮咯酸氨丁三醇作为一种非甾体抗炎药用于围手术期镇痛，是治疗儿科患者术后镇痛唯一经PDA(注射用药协会)批准的NSAIDs药物。
[0003]2‑
苯甲酰基吡咯(2
‑
Benzoylpyrrole)是合成酮咯酸氨丁三醇最基本的原料，其结构式如下：
[0004][0005]在制备2
‑
苯甲酰基吡咯时，会伴随杂质A、杂质B、杂质C和杂质D生成，若对制备的产品不加以纯化，2
‑
苯甲酰基吡咯产品的杂质会引入到终产品中，导致终产品精制困难，难以达到质控标准，生产成本增加。故开发出能有效检出各潜在杂质的分析方法，对2
‑
苯甲酰基吡咯的生产和提纯具有重要的指导意义，在此基础上建立严格的质控标准，对降低终产品提纯难度、提高产品质量具有积极意义。杂质A、B、C、D的结构如下：
[0006][0007]目前关于2
‑
苯甲酰基吡咯质量研究或有关物质分析方法的文献较少，厂家提供的检验方法中以四氢呋喃和磷酸水溶液为流动相，色谱柱选用C18色谱柱进行梯度洗脱。通过重复试验条件发现，该液相条件和分析方法基线噪音大，灵敏度差。也即本专利技术所述杂质在上述条件下无法有效的检测到，更无法准确定量测定，对生产、研发和提纯没有实质性的指导作用。
[0008]因此，针对上述问题，有必要进行深入研究。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的在于提供一种2
‑
苯甲酰基吡咯有关物质的高效液相色谱分析方法。
[0010]本专利技术分析方法在控制杂质浓度的同时，避免因为流动相中四氢呋喃的比例较大造成仪器管路被腐蚀的问题出现，基线平稳，杂质分离效果突出，专属性良好，灵敏度高，克服了现有技术的不足。
[0011]本专利技术主要是通过如下技术方案实现的：
[0012]本专利技术提供一种2
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苯甲酰基吡咯有关物质的高效液相色谱分析方法，采用反相C8色谱柱，柱温设置在25～45℃；以磷酸二氢铵的磷酸盐缓冲体系为流动相A，以乙腈为流动相B，其中流动相A为0.01～0.05mol/L的磷酸二氢铵溶液，并用磷酸调pH至2.5～3.5。
[0013]根据本专利技术实施方案，所述色谱柱为Waters Spherisorb C8色谱柱，规格为250mm
×
4.6mm，5μm。
[0014]根据本专利技术实施方案，所述柱温设置为40℃。
[0015]根据本专利技术实施方案，流动相A与流动相B的体积比为50:50～80:20，优选70:30；更优选为按照下表梯度洗脱：
[0016]时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)0703025505035208045208045.17030507030
[0017]根据本专利技术实施方案，所述流动相A为0.02mol/L的磷酸二氢铵溶液，并用磷酸调pH至3.0。
[0018]根据本专利技术实施方案，流速为0.5～1.5ml/min；优选，流速为1.0ml/min。
[0019]根据本专利技术实施方案，检测波长为210～230nm；优选，检测波长为215nm。
[0020]根据本专利技术实施方案，进样量为10～100μl，优选，进样量为10μl。
[0021]根据本专利技术实施方案，本专利技术所述2
‑
苯甲酰基吡咯有关物质的高效液相色谱分析方法，具体包括以下步骤：
[0022](1)样品配制：
[0023]供试品溶液制备：用稀释剂溶解2
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苯甲酰基吡咯原料，配制成浓度为0.5～2.0mg/ml的溶液；
[0024]对照溶液制备：用稀释剂将供试品溶液稀释100倍，即得；
[0025]系统适应性溶液制备：用稀释剂分别溶解2
‑
苯甲酰基吡咯对照品、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D，配制成每1ml中含有2
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苯甲酰基吡咯1mg、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D各5μg的溶液；
[0026](2)色谱条件设置：
[0027]采用反相C8色谱柱，柱温设置在25～45℃；以磷酸二氢铵的磷酸盐缓冲体系为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；流速为0.5～1.5ml/min；检测波长为215nm；
[0028](3)检测：
[0029]取配制的系统适应性溶液注入高效液相色谱仪，杂质A、B、C、D和2
‑
苯甲酰基吡咯峰之间的分离度应符合要求；再取对照溶液和供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱
图并进行分析
[0030]其中，杂质A、B、C、D的结构如下：
[0031][0032]其中，所述稀释剂为乙腈和纯水的混合溶液；乙腈和水的体积比为40～70:60～30；优选，乙腈和水的体积比为50:50。
[0033]本专利技术有益效果：
[0034](1)本专利技术首次对2
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苯甲酰基吡咯杂质进行溯源归属，鉴定了4个有关物质，为2
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苯甲酰基吡咯研究提供了可靠的杂质谱参考，可对2
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苯甲酰基吡咯和酮咯酸氨丁三醇及其制剂进行有效的质量控制，具有较大的积极进步效果和实际应用价值；
[0035](2)本专利技术通过大量实验后优选出最佳的分析条件和供试品溶液制备方法，采用了C8色谱柱、磷酸盐缓冲液流动相，通过严格控制流动相组分比例，设置合理的梯度洗脱条件，提高了主峰与相关杂质的分离度，分离度均大于1.5，分离效果突出；
[0036](3)本专利技术分析方法基线平稳，稳定性良好，专属性良好，检出限可达到0.008％，灵敏度高，可以准确检测2
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苯甲酰基吡咯的主要有关物质，从而全面、准确、客观的评价产品质量；
[0037](4)本专利技术分析方法在控制杂质浓度的同时，能避免因为流动相中四氢呋喃的比例较大造成仪器管路被腐蚀，具有简便、实用的特点。
附图说明
[0038]图1为本专利技术有关物质系统适用性色谱图。
[0039]图2为本专利技术对比例1色谱条件下系统适用性溶液进样色谱图。
[0040]图3为本专利技术试验例1未破坏样品色谱图。
[0041]图4为本专利技术试验例1光破坏样品色谱图。
[0042]图5为本专利技术试验例1高温破坏样品色谱图。
[0043]图6为本专利技术试验例1酸破坏样品色谱图。
[0044]图7为本专利技术试验例1碱破坏样品色谱图。
[0045]图8为本专利技术试验例1氧化破坏样品色谱图。
具体实施方式
[0046]下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本专利技术。应理解这些本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种2
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苯甲酰基吡咯有关物质的高效液相色谱分析方法，其特征在于，采用反相C8色谱柱，柱温设置在25~45℃；以磷酸二氢铵的磷酸盐缓冲体系为流动相A，以乙腈为流动相B，其中流动相A为0.01~0.05mol/L的磷酸二氢铵溶液，并用磷酸调pH至2.5~3.5。2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述色谱柱为Waters Spherisorb C8色谱柱，规格为250mm
×
4.6mm，5
µ
m。3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述柱温设置为40℃。4.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，流动相A与流动相B的体积比为50:50~80:20，优选70:30；更优选为按照下表梯度洗脱：时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0703025505035208045208045.17030507030。5.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述流动相A为0.02mol/L的磷酸二氢铵溶液，并用磷酸调pH至3.0。6.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，流速为0.5~1.5ml/min；优选，流速为1.0ml/min。7.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，检测波长为210~230nm；优选，检测波长为215nm。8.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，进样量为10~100
µ
l，...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐丽，张倩颖，汤婷婷，姬莉芳，沙向阳，
申请(专利权)人：南京锐志生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：