抗耐甲氧西林葡萄球菌的纳米抗体及其制备方法和用途技术

本发明专利技术提供了一种靶向耐甲氧西林葡萄球菌LspA蛋白的纳米抗体及其制备方法和应用。所提供的纳米抗体主要识别结合耐甲氧西林葡萄球菌LspA的结合基序区域，包括框架区FR和互补决定区CDR1、CDR2、CDR3。其一种具体的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明专利技术所述纳米抗体能够高效、特异地与耐甲氧西林葡萄球菌LspA蛋白相结合，亲和力可达到纳摩尔级别；同时本发明专利技术提供的纳米抗体能够在耐甲氧西林葡萄球菌检测或由耐甲氧西林葡萄球菌引发的疾病中获得优异的效果，本发明专利技术可应用于生物、医学领域。医学领域。医学领域。

【技术实现步骤摘要】
抗耐甲氧西林葡萄球菌的纳米抗体及其制备方法和用途


[0001]本专利技术属于纳米抗体筛选制备
，特别是涉及一种抗耐甲氧西林葡萄球菌的纳米抗体及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是临床上常见的毒性较强的细菌，自从上世纪40年代青霉素问世后，金黄色葡萄球菌引起的感染性疾病受到较大的控制。但随着青霉素的广泛使用，有些金黄色葡萄球菌产生青霉素酶，能水解β
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内酰胺环，表现为对青霉素具有耐药性。而在解决这一问题的过程中，科学家研究出了一种新的能耐青霉素酶的半合成青霉素，即甲氧西林(methicillin)。
[0003]甲氧西林应用于临床后曾有效地控制了金黄色葡萄球菌产酶株，但英国的 Jevons筛选发现了耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(Methicillin
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resistantStaphylococcus aureus，MRSA)。MRSA从发现至2021年感染几乎遍及全球，已成为院内和社区感染的重要病原菌之一。MRSA除对甲氧西林具有耐药性外，对其它所有与甲氧西林相同结构的β
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内酰胺类和头孢类抗生素均具有耐药性，MRSA还可通过改变抗生素作用靶位，产生修饰酶，降低膜通透性产生大量PABA等不同机制对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、氟喹喏酮类、磺胺类、利福平均产生不同程度的耐药性。
[0004]在耐甲氧西林葡萄球菌的生命周期中，脂蛋白的翻译后修饰成熟是至关重要的一个环节。这个过程依赖于脂蛋白信号肽酶(LspA)，它是负责脂蛋白信号肽切除的关键酶。因此，经由抑制LspA功能来阻断脂蛋白合成不仅消耗了必需脂蛋白以及毒性相关脂蛋白，而且还可以导致错误定位的未加工脂蛋白的聚集，它们均导致细菌细胞死亡。因此，LspA抑制剂提供了对抗革兰氏阴性细菌感染的新途径。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供种抗耐甲氧西林葡萄球菌的纳米抗体及其制备方法和用途，从而弥补现有技术中对于抗耐甲氧西林葡萄球菌没有有效的抗菌制品的缺陷。
[0006]本专利技术首先提供一种抗LspA
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MRSA蛋白的纳米抗体，所述纳米抗体中包含有互补决定区和框架区；其中互补决定区包含有CDR1、CDR2和CDR3中的任一个或几个；
[0007]所述的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列信息如下：
[0008]CDR1序列：GSFFEFGT(SEQ ID NO:3)、
[0009]CDR2序列：ITGNDHR(SEQ ID NO:4)、
[0010]CDR3序列：NILEGQRWSNY(SEQ ID NO:5)；
[0011]所述的互补决定区，包含有CDR1和CDR2，或CDR1和CDR3，或CDR2和 CDR3，或包含CDR1、CDR2和CDR3。
[0012]所述的框架区，包含有FR1、FR2、FR3、FR4中的至少一个或几个；
[0013]其中FR1、FR2、FR3、FR4的序列信息如下：
[0014]FR1：QVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO:6)
[0015]FR2：VGWFRQAPGKQRELVSR(SEQ ID NO:7)
[0016]FR3：YYADSVKGRFTISRDNDETTVYLQMDSLKPEDTAIYHC(SEQ ID NO:8)
[0017]FR4：WGQGTQVTVS(SEQ ID NO:9)。
[0018]作为实施例的一种具体记载，所述的纳米抗体SA4的氨基酸序列如下：
[0019]QVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSFFEFGTVGWFRQAPGKQRELVSRITGND HRYYADSVKGRFTISRDNDETTVYLQMDSLKPEDTAIYHCNILEGQRWSNYWGQ GTQVTVS(SEQ ID NO:1)；
[0020]本专利技术中，与所述纳米抗体的氨基酸序列具有一定同一性的多肽也在本专利技术的保护范围内。如与所述纳米抗体具有70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％以上序列同一性且具有所述纳米抗体功能的抗体或抗体片段(具有90％、91％、 92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％以上的序列同一性)。具体地，对所述纳米抗体经过取代、缺失或者添加一个或多个(具体可以是1
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50、1
‑
30个、1
‑ꢀ
20个、1
‑
10个、1
‑
5个、1
‑
3个、1个、2个、或3个)氨基酸得到的，或者在N
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末端和/或C
‑
末端添加一个或多个(具体可以是1
‑
50个、1
‑
30个、1
‑
20个、1
‑
10个、 1
‑
5个、1
‑
3个、1个、2个、或3个)氨基酸得到的，且具有所述纳米抗体功能的多肽片段。
[0021]本专利技术另一方面还提供一种分离的核苷酸片段，所述的核苷酸片段编码上述的纳米抗体。
[0022]其中用于编码上述纳米抗体SA4的核苷酸片段，其序列如下：
[0023]CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCCGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGAGGAAGCC TGAGACTGTCCTGCGCCGCCAGCGGCTCCTTCTTCGAGTTCGGCACAGTGGGCT GGTTCAGGCAGGCCCCCGGCAAGCAGAGGGAGCTGGTGTCCAGGATCACCGG CAACGATCACAGATACTACGCCGATAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCTCCA GGGACAACGACGAGACCACCGTGTACCTGCAGATGGACAGCCTGAAGCCTGA GGACACAGCCATCTACCACTGCAATATCCTGGAGGGCCAGAGGTGGTCCAATT ACTGGGGCCAGGGCACCCAGGTGACAGTGTCC(SEQ ID NO:2)
[0024]本专利技术另一方面提供一种构建体，为插入有上述分离的核苷酸片段的表达载体。
[0025]在本专利技术某些实施方式中，所述构建体由所述分离的多核苷酸插入到表达载体的多克隆位点构建而成。本专利技术中的表达载体通常指本领域熟知的各种市售表达载体，例如可以是细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。
[0026]本专利技术另一方面提供一种纳米抗体的表达系统，所述表达系统含有构建体。任何适用于表达载体进行表达的细胞都可以作为宿主细胞，例如，所述宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。
[0027]在本专利技术某些实施方式中，宿主细胞选自E.coli MC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纳米抗体，其特征在于，所述的纳米抗体中包含有互补决定区和框架区；其中互补决定区包含有CDR1、CDR2和CDR3中的任一个或几个；所述的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:3
‑
5。2.如权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述的互补决定区包含有CDR1和CDR2，或CDR1和CDR3，或CDR2和CDR3，或包含CDR1、CDR2和CDR3。3.如权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述的框架区包含有FR1、FR2、FR3、FR4中的至少一个或几个；其中FR1、FR2、FR3、FR4的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:6
‑
9。4.如权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述的纳米抗体包含有：1)氨基酸序列为SEQ ID NO:1的抗体；2)在1)的氨基酸序列上经过取代、缺失或者添加一个或多个氨基酸，由1)衍生的，具有1)所述纳米抗体功能的纳米抗体。5.一种核苷酸片段，其特征在于，所述的核...

【专利技术属性】
技术研发人员：马丁卡弗瑞，谈静泉，
申请(专利权)人：南京中爱人工智能与生命科学研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：