用于分选/清除工程化的免疫细胞的mAb驱动的嵌合抗原受体系统技术方案

本发明专利技术涉及用于分选/清除工程化的免疫细胞的mAb驱动的嵌合抗原受体系统。具体地，本发明专利技术涉及包含至少一个胞外结合结构域的编码嵌合抗原受体(CAR)的多肽，所述胞外结合结构域包含至少由抗原特异性的VH链和VL链形成的scFv，其中所述胞外结合结构域包含至少一个mAb特异性表位。mAb特异性表位。mAb特异性表位。

【技术实现步骤摘要】
al,2014)。最近，设计了抑制性嵌合抗原受体(iCARs)，旨在遇到离靶细胞以后对T细胞功能施加制动(Federov et al.2013)。在Budde et al.(2013)中描述了另一系统，其中CD20嵌合抗原受体与诱导型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)9(iC9)自杀开关结合。在申请US 2014/0286987中，在药物前体AP1903(他克莫司(tacrolimus))的存在下，通过结合于突变的FK506结合蛋白(FKBP1)，来使后者基因具有功能。由Bellicum公司赞助的临床试验正在进行中，其中将上述半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶技术(CaspaCIDe
TM
)设计成GD2靶向第三代CAR T细胞。在申请WO 2014/152177中描述了基于多聚化剂的类似的凋亡诱导系统。
[0007]Philip等(2014)描述了RQR8系统，其被用作紧凑标记/自杀基因，从而允许转导细胞的选择。RQR8源自来自CD34和CD20抗原的靶表位的组合。这种构建体允许借助于临床批准的CliniMACS CD34系统(Miltenyi)来进行选择。此外，这种RQR8构建体结合广泛应用的药物抗体利妥昔单抗，从而导致转基因表达细胞的选择性缺失。在此系统内，借助于在逆转录病毒载体中的CAR并利用口蹄疫2A肽，来共表达RQR8，从而导致在T细胞表面上两种独立的转基因(RQR8和CAR)的表达。从产业视角看，此系统存在一些局限性：首先，它需要克隆大型逆转录病毒插入片段，以及其次，需要确保转化细胞表达RQR8和CAR多肽两者，以消除可能的“假阳性”即不会表达两种多肽的T细胞，尤其是RQR8自杀基因，从而允许在不良影响的情况下清除工程化免疫细胞。
[0008]在诊所中，在自身免疫疾病和移植的情况下，已经成功实践清除T细胞的构想几十年。为了清除细胞介导免疫性，包括T细胞，广泛使用了免疫抑制药物如糖皮质激素或细胞抑制剂如烷基化剂(环磷酰胺、亚硝基脲、铂化合物
…
)或抗代谢物(甲氨蝶呤、硫唑嘌呤、氟尿嘧啶
…
)。然而，尽管它们具有免疫抑制功效，但这些药物并不具有辨别力，因为它们影响所有T和B细胞的增殖。抗体有时用作快速和有效的免疫抑制治疗以防止急性排斥反应以及淋巴增生性或自身免疫性疾病的靶向治疗，尤其是抗CD20单克隆抗体(monoclonal)。T细胞亚群的体内消除由Benjamin和Waldmann(1986)进行以确定CD4+T细胞在产生对可溶性蛋白的抗体反应中的作用，以及由Cobbold等(1986)进行以确定CD4+和CD8+T细胞在排斥骨髓和组织同种异体移植物中的作用。已经广泛地进行体内清除以研究不同话题，包括抗病毒细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应的控制(Buller et al.,1987)。然而，到目前为止对T细胞已经使用的抗体涉及抗原(CD3、CD4、CD52)，其都广泛存在于静止或激活T细胞上以及在其它细胞类型上。因此，上述抗体的使用不会允许具有CAR的工程化免疫细胞的选择性消除。
[0009]如在其后呈现的，本专利技术人已寻求“集成(all
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in
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one)”系统，通过减少“假阳性”，同时允许在不利的临床事件的情况下表达所述CAR的免疫细胞的体内清除，其允许CAR表达免疫细胞的优化体外分选。

技术实现思路

[0010]本专利技术涉及嵌合抗原受体(CAR)，以这样的方式修饰其胞外结合结构域(scFv)以允许细胞分选和细胞清除(关于说明性实施方式，见图2)。这种结构(称为mAb驱动分选/清除系统)，由在scFv内插入选择的表位构成；此表位具有由特异性抗体(优选mAb)识别的特异性。鉴于以下事实(主要地，修饰CAR的外部配体结合结构域以包括表位)，可以设想不同的CAR结构：单链或多链。本专利技术的嵌合scFv(其由VH和VL多肽以及特异性表位形成)，本身可能有不同的结构，其取决于表位的插入位置和接头的使用。本专利技术还涉及得到的方法，其
用于分选和/或清除具有修饰CAR的工程化免疫细胞。
[0011]多种表位
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mAb对可以用来生成这样的系统；尤其是已经批准用于医疗用途的那些系统，如CD20/利妥昔单抗(作为非限制性实例)。
[0012]为了进一步增强工程化免疫细胞的细胞毒性，表位
‑
特异性抗体可以与细胞毒性药物结合。还可以通过利用其上移植有补体系统的组件的工程抗体来促进CDC细胞毒性。
[0013]最后，本专利技术包括治疗方法，其中通过使用抗体(其针对所述CAR的外部配体结合结构域)，来清除细胞以调节具有CAR的工程化免疫细胞的激活。
[0014]可以通过以下项目来总结本专利技术。
[0015]1.一种编码包含至少一个胞外结合结构域的嵌合抗原受体(CAR)的多肽，所述胞外结合结构域包含通过对于抗原为特异性的至少VH链和VL链形成的scFv，其中所述胞外结合结构域包含至少一个mAb特异性表位。
[0016]2.根据项目1的多肽，其中所述mAb特异性表位位于VH和VL链之间。
[0017]3.根据项目1或2的多肽，其中由至少一个接头，将所述VH和VL链、以及mAb特异性表位结合在一起以及通过铰链结合于所述CAR的跨膜结构域。
[0018]4.根据项目3的多肽，其中，由两个接头，将mAb表位连接于VH和VL链。
[0019]5.根据项目1至3中任一项的多肽，其中mAb特异性表位是通过表位特异性mAb结合的表位，用于体外细胞分选和/或体内细胞清除表达包含这样的表位的CAR的T细胞。
[0020]6.根据项目1至5中任一项的多肽，其中多肽包含一个胞外结合结构域，其中所述胞外结合结构域进一步包含铰链，以及所述多肽进一步包含
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跨膜结构域，以及，
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胞内结构域。
[0023]7.根据项目1至6中任一项的多肽，其中胞外结合结构域包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个mAb特异性表位。
[0024]8.根据项目1至7中任一项的多肽，其中胞外结合结构域包含1、2、3、或4个mAb特异性表位。
[0025]9.根据项目1至8中任一项的多肽，其中胞外结合结构域包含2、3、或4个mAb特异性表位。
[0026]10.根据项目1至9中任一项的多肽，其中胞外结合结构域包含以下序列
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包含至少一个胞外结合结构域的编码嵌合抗原受体(CAR)的多肽，所述胞外结合结构域包含至少由抗原特异性的VH链和VL链形成的scFv，其中所述胞外结合结构域包含至少一个mAb特异性表位。2.根据权利要求1所述的多肽，其中，所述mAb特异性表位位于所述VH链和VL链之间。3.根据权利要求1或2所述的多肽，其中，所述VH链和VL链、以及mAb特异性表位通过至少一个接头结合在一起并通过铰链结合于所述CAR的跨膜结构域。4.根据权利要求3所述的多肽，其中，通过两个接头将所述mAb表位连接于所述VH链和VL链。5.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽，其中，所述mAb特异性表位是有待通过表位特异性mAb结合的表位，用于体外细胞分选和/或体内细胞清除表达包含这样的表位的CAR的T细胞。6.根据权利要求1至5中任一项所述的多肽，其中，所述多肽包含一个胞外结合结构域，其中所述胞外结合结构域进一步包含铰链，以及所述多肽进一步包含
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跨膜结构域，以及，
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胞内结构域。7.根据权利要求1至6中任一项所述的多肽，其中，所述胞外结合结构域包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个mAb特异性表位。8.根据权利要求1至7中任一项所述的多肽，其中，所述胞外结合结构域包含1、2、3、或4个mAb特异性表位。9.根据权利要求1至8中任一项所述的多肽，其中，所述胞外结合结构域包含2、3、或4个mAb特异性表位。10.根据权利要求1至9中任一项所述的多肽，其中，所述胞外结合结构域包含以下序列V1‑
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【专利技术属性】
技术研发人员：巴尔布拉，
申请(专利权)人：異基因治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：