人肿瘤相关成纤维细胞系及其用途制造技术

本发明专利技术属于肿瘤生物学领域，涉及人肿瘤相关成纤维细胞及其用途。本发明专利技术的人肿瘤相关成纤维细胞具有以下生物学特性：细胞呈长梭形或星芒型，胞质丰富，嗜酸性，细胞核位于胞体中央，圆形或长椭圆形，细胞呈放射状或束状排列，部分细胞排列紊乱，极性消失，有明显交叉重叠现象；稳定传代十代以内；该细胞表达蛋白α

【技术实现步骤摘要】
人肿瘤相关成纤维细胞系及其用途


[0001]本专利技术属于肿瘤生物学领域，涉及一株人肿瘤相关成纤维细胞及其用途。

技术介绍

[0002]肿瘤微环境在肿瘤的发生发展的过程中，为肿瘤提供了强有力的支持，而肿瘤相关成纤维细胞是肿瘤微环境中最重要的成分之一，它是一种梭形细胞，在外界因素和细胞内部作用下可由多种类型的细胞分化而来，如正常成纤维细胞、脂肪细胞、周皮细胞等，都可以作为人肿瘤相关成纤维细胞的来源。人肿瘤相关成纤维细胞可以构建和重塑细胞外基质的结构，也具有一定的分泌功能，可以分泌白介素6(IL-6)、趋化因子(CXCL12)等细胞因子和炎性因子，从而在维持肿瘤组织形态的同时，可以介导肿瘤细胞的多药耐药、侵袭和增值。正因为其介导肿瘤的重要作用，现在人们开始逐渐重视肿瘤相关成纤维细胞的治疗。
[0003]人肿瘤相关成纤维细胞系的建立，为了解肿瘤相关成纤维细胞生物学特征、研究其介导癌症细胞耐药、侵袭以及进展的基质等提供了丰富的实验材料，从而为建立标准治疗模式提供了帮助。而且现有研究表明，肿瘤相关成纤维细胞的出现可能先于肿瘤的发生。由于肿瘤相关成纤维细胞存在一定的异质性，细胞形态相同的情况下，也存在不同的功能，所以进行组织层面上的直接研究较为困难。因此丰富人肿瘤相关成纤维细胞细胞库具有重要作用，以便从细胞层面上进行细致的研究。了解肿瘤相关成纤维细胞如何介导肿瘤的侵袭和进展，从而可以靶向抑制该过程。
[0004]有鉴于此，本申请的专利技术人拟提供一种人肿瘤相关成纤维细胞系及其应用，该人肿瘤相关成纤维细胞系能大量扩增，且可长期在体外传代培养。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于，基于现有技术的现状，提供一种人肿瘤相关成纤维细胞系及其应用，该人肿瘤相关成纤维细胞系能够大量扩增，且可长期在体外传代培养。可用于制备人肿瘤相关成纤维细胞模型以及生物治疗药物和诊断试剂。
[0006]本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案是：
[0007]本专利技术从住院的结肠癌患者的肿瘤组织中分离培养获得人肿瘤相关成纤维细胞，按常规方法，通过胶原酶消化肿瘤组织，得到贴壁的肿瘤单细胞，在肿瘤单细胞中加入DMEM完全培养基进行传代培养，获得所述的人肿瘤相关成纤维细胞；在光学显微镜下，该肿瘤相关成纤维细胞呈长梭形或星芒型，胞质丰富，嗜酸性，细胞核位于胞体中央，圆形或长椭圆形，细胞呈放射状或束状排列，部分细胞排列紊乱，极性消失，有明显交叉重叠现象。
[0008]更具体的，本专利技术提供了一种人肿瘤相关成纤维细胞，本专利技术所述的人肿瘤相关成纤维细胞至少具有以下生物学特性中的一种：
[0009]细胞呈长梭形或星芒型，胞质丰富，嗜酸性，细胞核位于胞体中央，圆形或长椭圆形，细胞呈放射状或束状排列，部分细胞排列紊乱，极性消失，有明显交叉重叠现象；
[0010]稳定传代十代以内；
[0011]该细胞表达蛋白α-SMA、FAP、E-cadherin、Vimentin呈阳性。
[0012]本专利技术的人肿瘤相关成纤维细胞系，命名为人肿瘤相关成纤维细胞CAF95，于2020年7月14日保藏于武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C2020130。
[0013]在本专利技术的实施例中，如上所述人肿瘤相关成纤维细胞系中，表面蛋白α-SMA、FAP、E-cadherin、Vimentin表达阳性。
[0014]本专利技术还提供了所述的人肿瘤相关成纤维细胞的用途，其包括但不限于以下用途：
[0015]所述的人肿瘤相关成纤维细胞株用于制备人肿瘤相关成纤维细胞模型的用途。
[0016]所述的人肿瘤相关成纤维细胞株，取肿瘤相关成纤维细胞条件培养基与肿瘤细胞共培养用于制备肿瘤动物模型的用途。
[0017]所述的人肿瘤相关成纤维细胞株，取肿瘤相关成纤维细胞条件培养基与肿瘤细胞共培养用于筛选和/或评价/制备肿瘤治疗药物的用途。
[0018]所述的人肿瘤相关成纤维细胞株用于开发肿瘤相关成纤维细胞药物靶点的用途。
[0019]所述的人肿瘤相关成纤维细胞株用于制备肿瘤诊断试剂的用途。
[0020]所述的人肿瘤相关成纤维细胞株与肿瘤细胞共培养在筛选肿瘤生物治疗药物/试剂中的用途。
[0021]所述的人肿瘤相关成纤维细胞株在开发肿瘤治疗新技术中的用途。
[0022]所述的人肿瘤相关成纤维细胞株在开发检测肿瘤相关成纤维细胞生物工程产品中的用途。
[0023]本专利技术细胞株具备多种用途：可用于研究肿瘤相关成纤维细胞介导肿瘤发生发展的相关分子作用机制、研究筛选和评价肿瘤相关成纤维细胞靶向治疗的药物、与肿瘤细胞构建3D培养模型更加贴近肿瘤组织本身的生长环境、生物治疗新技术及检测相关生物工程产品等提供必要细胞实验工具。
[0024]下面结合附图和具体实施方式对本专利技术做进一步说明，并非对本专利技术的限制，凡依照本专利技术公开内容所进行的本领域等同替换，均属于本专利技术的保护范围。
附图说明
[0025]图1为培养的原代细胞和传代细胞形态，细胞呈长梭形或星芒型，胞质丰富，嗜酸性，细胞核位于胞体中央，圆形或长椭圆形，细胞呈放射状或束状排列。
[0026]图2为蛋白印迹检测成纤维细胞相关蛋白表达情况，α-SMA、FAP、Vimentin表达均为阳性。
[0027]图3为划痕实验证明肿瘤相关成纤维细胞促进肿瘤细胞的侵袭功能。
[0028]图4为transwell实验证明肿瘤相关成纤维细胞促进肿瘤细胞侵袭功能。
[0029]图5为成管实验证明，肿瘤相关成纤维细胞促进HUVEC细胞的成管功能。
[0030]图6位CCK实验证明，肿瘤相关成纤维细胞促进肿瘤细胞的多药耐药。
具体实施方案
[0031]实施例1：蛋白印迹法检测人肿瘤相关成纤维细胞的蛋白表达情况
[0032]1)取对数生长期的细胞，吸去培养基用PBS清洗三次，加入适量蛋白裂解液，冰上
裂解15分钟；
[0033]2)用擦拭干净的细胞刮将细胞刮下，然后将其转移到1.5mlEP管中；
[0034]3)将EP管置于4度离心机中，12000rpm，离心10分钟，取上清置于1.5mlEP管中；
[0035]4)BCA法进行蛋白定量，根据样品的体积将5
×
SDS-PAGE蛋白上样缓冲液加入，将其充分混匀，煮10-15min于95℃金属浴锅中。1000rpm离心5min，等到样品冷却，之后可选择上样品或者-保存于保存-20℃冰箱；
[0036]5)配胶：把玻璃板垂直放置并使其对齐，放入架子海绵垫上进行夹紧，切记防止漏液，用吸管将分离胶慢慢加入内侧，待液面到达一定位置，通过使用异丙醇或者双蒸水对其进行液封处理。静置一段时间后，当异丙醇或者水和胶之间看到分离线的出现后，即可将水或者异丙醇倒去，倒掉异丙醇后，利用双蒸水进行2-3次倒掉清洗，用纸将水渍吸干净。接着加入浓缩胶，约20分钟左右后浓缩胶会出现凝固，此时将玻璃板周围擦本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人肿瘤相关成纤维细胞，其特征在于，所述的细胞株名称为95-CAF，已在武汉大学的中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO:C2020130；所述的人肿瘤相关成纤维细胞至少具有以下生物学特性中的一种：(1)细胞呈长梭形或星芒型，胞质丰富，嗜酸性，细胞核位于胞体中央，圆形或长椭圆形，细胞呈放射状或束状排列，部分细胞排列紊乱，极性消失，有明显交叉重叠现象；(2)稳定传代十代以内；(3)该细胞表达蛋白α-SMA、FAP、E-cadherin、Vimentin呈阳性。2.权利要求1所述的人肿瘤相关成纤维细胞株在用于制备人肿瘤相关成纤维细胞模型中的用途。3.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐可，殷佩浩，朱锐秋，张祎稀，王海静，詹月萍，袁泽婷，李炜，王杰，方凯，汪玉倩，许健，
申请(专利权)人：上海市普陀区中心医院，
类型：发明
国别省市：