一种提高荔枝组培苗展叶方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种提高荔枝组培苗展叶方法及其应用，属于荔枝种苗繁育技术领域，其技术方案要点是：其具体步骤如下：S1、抽茎组培苗的获得：以胚性愈伤组织为试材，通过花药诱导愈伤组织、胚性愈伤组织继代增殖、体胚分化、体胚成熟和体胚萌发获得荔枝组培苗；S2、展叶培养基的获得：展叶培养基包括基本培养基、生长调节剂、钙盐、蔗糖和结冷胶；钙盐为CaNO3·

【技术实现步骤摘要】
一种提高荔枝组培苗展叶方法及其应用


[0001]本专利技术涉及荔枝种苗繁育
，尤其涉及一种提高荔枝组培苗展叶方法及其应用。

技术介绍

[0002]荔枝(Litchi chinensis Sonn.)属无患子科荔枝属常绿乔木，是我国南方重要的经济果树，由于童期长、基因组高度杂合及部分品种的不育性等因素限制了传统育种在品种改良上的应用。通过转基因技术可实现荔枝性状定向改良、缩短育种年限、解析基因功能，也可实现基因在不同物种之间的转化，成为近年来荔枝相关性状基因功能研究与应用的重要方向，其中的关键在于建立高效的离体再生技术体系。经由胚性愈伤诱导获得的荔枝体胚具有遗传上稳定、单细胞来源、用于转基因所获植株嵌合体少等特点，可作为一个稳定高效的离体再生途径。
[0003]然而，荔枝离体再生途径存在体胚难以展叶的问题，严重影响了组培苗的移栽效率，仅有根茎而无叶片的组培苗移栽不能成活，即成活率为0。因此建立高效稳定的荔枝体胚发生技术组培苗展叶体系仍是荔枝离体再生技术研究的重点和难点之一。
[0004]为了解决上述问题，在现有技术的基础上提供了一种提高荔枝组培苗展叶方法及其应用。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种提高荔枝组培苗展叶方法及其应用，在依据荔枝组培苗难以展叶的特性基础上，采用不同基本培养基及不同浓度钙盐，促进了组培苗抽新茎，提高了荔枝组培苗展叶率，优化了高效的荔枝离体再生技术体系，为荔枝品种改良和转基因育种奠定了良好的基础。
[0006]本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
[0007]一种提高荔枝组培苗展叶方法，其具体步骤为：
[0008]S1、抽茎组培苗的获得：以胚性愈伤组织为试材，通过花药诱导愈伤组织、胚性愈伤组织继代增殖、体胚分化、体胚成熟和体胚萌发等过程，获得具根茎的荔枝组培苗；
[0009]S2、展叶培养基的获得：所述展叶培养基包括基本培养基、生长调节剂、钙盐、蔗糖和结冷胶，所述生长调节剂、钙盐、蔗糖和结冷胶添加于基本培养基中；所述钙盐为CaNO3·
4H2O(四水合硝酸钙)，且所述CaNO3·
4H2O的添加量为0～100ml/L；
[0010]S3、抽茎组培苗展叶：将荔枝组培苗植入步骤S2中的展叶培养基中进行培养，培养30天，获得展叶组培苗。
[0011]进一步地：所述基本培养基为MS培养基、WPM培养基和MB培养基中的一种。
[0012]进一步地：所述生长调节剂为KT(6
‑
糠氨基嘌呤)、GA3(赤霉素)、6
‑
BA(6
‑
苄氨基嘌呤)、NAA(α
‑
萘乙酸)中的一种或多种，所述KT的添加量为0～2mg/L；所述GA3的添加量为0～5mg/L；所述6
‑
BA的添加量为0～2mg/L；NAA的添加量为0～0.5mg/L。
[0013]进一步地：所述钙盐的添加量为30ml/L。
[0014]通过采用上述技术方案，在荔枝组培苗的培育过程中，钙盐能够有效促进组培苗抽新茎，提高荔枝组培苗展叶率，优化高效的荔枝离体再生技术体系，为荔枝品种改良和转基因育种奠定了良好的基础；仅有根茎而无叶片的组培苗移栽不能成活，即成活率为0；具有根茎叶的组培苗，即展叶后的组培苗，移栽成活率达75％。
[0015]本专利技术还提供了一种提高荔枝组培苗展叶方法的应用，将所述提高荔枝组培苗展叶方法应用于提高荔枝组培苗的展叶率。
[0016]本专利技术还提供了一种提高荔枝组培苗展叶方法的应用，将所述提高荔枝组培苗展叶方法应用于荔枝离体再生培养中。
[0017]本专利技术还提供了一种提高荔枝组培苗展叶方法的应用，将所述提高荔枝组培苗展叶方法培养的展叶组培苗应用于制备荔枝离体再生培养的产品中。
[0018]综上所述，本专利技术具有以下有益效果：在依据荔枝组培苗难以展叶的特性基础上，采用不同基本培养基及不同浓度钙盐，促进了组培苗抽新茎，提高了荔枝组培苗展叶率，优化了高效的荔枝离体再生技术体系，为荔枝品种改良和转基因育种奠定了良好的基础。
附图说明
[0019]图1是本专利技术实施例1
‑
实施例9的刚展新叶及展叶完整植株；
[0020]图2是本专利技术实施例10
‑
实施例15的具根茎叶的完整再生植株。
具体实施方式
[0021]下面结合附图和实施方式对本专利技术作进一步的详细说明：
[0022]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0023]采用DPS数据处理系统18.10高级版统计软件对数据进行处理，以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，实验结果以平均值表示，Duncan新复极差法检验。
[0024]Ⅰ.试剂及培养基的来源如下：
[0025]KT(6
‑
糠氨基嘌呤)是上海伯奥生物科技有限公司的产品，批号080623；GA3(赤霉素)是源叶生物的产品，货号为S27S10P98642；6
‑
BA(6
‑
苄氨基嘌呤)是上海伯奥生物科技有限公司的产品，货号为090601；NAA(α
‑
萘乙酸)是上海伯奥生物科技有限公司的产品，货号为090219；CaNO3·
4H2O(四水合硝酸钙)是西陇科学股份有限公司的产品，批号为2006282。
[0026]L
‑
Glutamine(L
‑
谷氨酰胺)是上海源叶生物科技有限公司的产品，货号为J25J10R93803；蔗糖是广州化学试剂厂的产品，批号为2021030110；G434(结冷胶)是北京西美杰科技有限公司的产品，货号为AMR0434047E；椰汁为将新鲜椰子倒出的椰子汁经双层纱布过滤后得到的椰子水；M404(MB培养基)是北京西美杰科技有限公司的产品，货号为ACK0404029F；M519(MS培养基)是北京西美杰科技有限公司的产品，货号为AAK0519209A；L449(WPM培养基)是北京西美杰科技有限公司的产品，货号为ATK0449110A。
[0027]其中，WPM培养基为常用培养基，可通过商业途径购买，也可按照以下成分及含量自己配制：WPM培养基的溶剂为水，溶质及其含量分别如下：
[0028]大量元素：990mg/L的硫酸钾(KNO3)；400mg/L的硝酸铵(NH4NO3)，170mg/L的磷酸二氢钾(KH2PO4)；370mg/L的七水硫酸镁(MgSO4·
7H2O)；钙盐。
[0029]微量元素：6.2mg/L的硼酸(H3BO3)；22.5mg/L四水硫酸锰(MnSO4·
4H2O)或17.05mg/L的一水合硫酸锰(MnSO4·
H2O)；8.6mg/L的七水硫酸锌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高荔枝组培苗展叶方法，其特征是，其具体步骤为：S1、抽茎组培苗的获得：以胚性愈伤组织为试材，通过花药诱导愈伤组织、胚性愈伤组织继代增殖、体胚分化、体胚成熟和体胚萌发等过程，获得具根茎的荔枝组培苗；S2、展叶培养基的获得：所述展叶培养基包括基本培养基、生长调节剂、钙盐、蔗糖和结冷胶，所述生长调节剂、钙盐、蔗糖和结冷胶添加于基本培养基中；所述钙盐为CaNO3·
4H2O(四水合硝酸钙)，且所述CaNO3·
4H2O的添加量为0～100ml/L；S3、抽茎组培苗展叶：将荔枝组培苗植入步骤S2中的展叶培养基中进行培养，培养30天，获得展叶组培苗。2.根据权利要求1所述的一种提高荔枝组培苗展叶方法，其特征是：所述基本培养基为MS培养基、WPM培养基和MB培养基中的一种。3.根据权利要求1所述的一种提高荔枝组培苗展叶方法，其特征是：所述生长调节剂为KT(6
‑
糠氨基嘌呤)、GA...

【专利技术属性】
技术研发人员：王树军，王果，王家保，刘耀婷，李焕苓，李芳，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：