一株具有缓解细胞氧化损伤作用的干酪乳杆菌制造技术

本发明专利技术公开了一株具有缓解细胞氧化损伤作用的干酪乳杆菌，属于微生物技术领域以及医药技术领域。本发明专利技术提供了一株干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)CCFM1157，其能够缓解人细胞氧化损伤，显著提高H2O2诱导的HaCaT细胞的存活率及HaCaT细胞的抗氧化能力；显著改善H2O2诱导的HaCaT细胞氧化损伤程度，能够激活Nrf2抗氧化信号通路，提高分泌Nrf2能力，从而明显缓解和修复H2O2诱导的HaCaT细胞氧化造成的伤害,因此，干酪乳杆菌CCFM1157在制备预防或治疗皮肤氧化损伤的产品中，具有巨大的应用前景。大的应用前景。大的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一株具有缓解细胞氧化损伤作用的干酪乳杆菌


[0001]本专利技术涉及一株具有缓解细胞氧化损伤作用的干酪乳杆菌，属于微生物
以及医药


技术介绍

[0002]干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)属于乳杆菌属(Lactobacillus)，是革兰氏阳性菌，不产芽孢，无鞭毛，不运动，兼性异型发酵乳糖，不液化明胶；最适生长温度为37℃，G+C含量为45.6％～47.2％；菌体长短不一，两端呈方形，常成链；菌落粗糙，灰白色，有时呈微黄色，能发酵多种糖。干酪乳杆菌存在于人的口腔、肠道内含物和大便及阴道中，也常常出现在牛奶和干酪、乳制品、饲料、面团和垃圾中。
[0003]干酪乳杆菌作为益生菌的一种，能够耐受有机体的防御机制，例如口腔中的酶、胃液中的低PH值和小肠的胆汁酸等，因此，干酪乳杆菌进入人体后可以在肠道内大量存活，起到调节肠内菌群平衡、促进人体消化吸收等作用。除此以外，干酪乳杆菌还具有降血压、降胆固醇、促进细胞分裂、增强人体免疫、缓解乳糖不耐症、缓解过敏以及预防癌症等功能。由于具有显著的益生功效，干酪乳杆菌越来越成为人们研究、开发、生产的重点。
[0004]皮肤作为人体最大的器官，是抵御外界机械、化学、物理及生物等各种刺激的第一道防线。而UV照射或臭氧、苯并芘等污染物诱导细胞产生大量的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)，生成脂质过氧化物，诱发氧化应激损伤及炎症反应，打破体内氧化/抗氧化系统平衡，使机体组织衰退、生理功能低下，损伤皮肤屏障，导致皮肤老化。
[0005]人体内活性氧生成过多，会打破活性氧生成与清除的动态平衡，体内抗氧化系统不能及时清除，导致细胞处于氧化应激状态，过多的自由基损伤细胞内DNA，破坏蛋白质和脂质结构，细胞活力降低甚至死亡。皮肤如果长期暴露在此状态下，会出现肤色加深、晒伤、皮肤炎症性疾病甚至是皮肤癌。
[0006]随着皮肤疾病发生的增加，人们对护肤产品的需求及更深入的研究也随之增加。传统防晒剂含有无机化合物，如二氧化钛(TiO2)和氧化锌(ZnO)，这些矿物质能够反射UVA和UVB的照射。但是，这些金属基颗粒的安全问题也引起人类的担忧。
[0007]因此，仍然需要开发一种的天然产品，既不会给患者带来副作用，同时，也能增强皮肤的内源性抗氧化的能力，来中和ROS对皮肤造成的氧化损伤，缓解皮肤氧化损伤带来的各种皮肤疾病，并且，还能够应用于各类别的患者。

技术实现思路

[0008]本专利技术的技术方案如下：
[0009]为解决上述问题，本专利技术提供了一株干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)CCFM1157，所述干酪乳杆菌CCFM1157保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其保藏编号为GDMCC No：61497，于2021年2月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
[0010]所述干酪乳杆菌来源于四川仁寿地区的泡菜水样本，该菌株经测序分析，其16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示，将测序得到的序列在GeneBank中进行核酸序列比对，结果显示菌株为干酪乳杆菌，命名为干酪乳杆菌CCFM1157。
[0011]所述干酪乳杆菌CCFM1157的微生物形态学特征为：菌体长短不一，两端呈方形，常成链；菌落粗糙，灰白色，有时呈微黄色，能发酵多种糖。
[0012]本专利技术还提供了一种组合物，其特征在于，所述组合物含有上述干酪乳杆菌的细胞、发酵上清液或胞内物中的一种或多种。
[0013]在一种实施方式中，所述胞内物为上述干酪乳杆菌破碎后的上清液。
[0014]在本专利技术的一种实施方式中，所述干酪乳杆菌的细胞的制备方法为：将上述干酪乳杆菌CCFM1157接种于增殖培养基中发酵，将得到的干酪乳杆菌发酵液，以8000
‑
10000g，15～20min条件离心，收集干酪乳杆菌的细胞。
[0015]在本专利技术的一种实施方式中，所述干酪乳杆菌的发酵上清液的制备方法为：将上述干酪乳杆菌CCFM1157接种于增殖培养基中发酵，将得到的干酪乳杆菌发酵液，以8 000
‑
10000g，15～20min条件离心，通过0.22
‑
0.45μm滤膜过滤除菌后，收集发酵上清液。
[0016]在本专利技术的一种实施方式中，所述干酪乳杆菌的胞内物的制备方法为：将上述干酪乳杆菌CCFM1157接种于增殖培养基中发酵，将得到的干酪乳杆菌发酵液，以8000
‑
10000g，15～20min条件离心，添加适量PBS后，利用液氮反复研磨直至形成粉末状，添加适量PBS后，以100～500W，5～15min超声，再以8000
‑
10000g，15～20min条件离心，通过0.22
‑
0.45μm滤膜过滤除菌后，收集上清液得到干酪乳杆菌的胞内物。
[0017]在一种实施方式中，所述发酵液的的活菌数达到4～6
×
109cfu/mL。
[0018]在本专利技术的一种实施方式中，所述增殖培养基中碳源为10～40g/L葡萄糖，氮源为5～25g/L酵母浸粉、胰蛋白胨或大豆蛋白胨，无机盐为0.1～0.5g/L硫酸镁，0.1～0.5g/L硫酸锰，微量元素为1～5g/L无水乙酸钠，1～5g/L柠檬酸氢二铵，1～5g/L磷酸二氢钾和吐温80 0.5～1.5mL/L。
[0019]本专利技术还提供所述干酪乳杆菌CCFM1157在预防或治疗皮肤屏障损伤方面的应用。
[0020]本专利技术还提供所述组合物在在预防或治疗皮肤屏障损伤方方面的应用。
[0021]有益效果：
[0022]本专利技术提供了一株干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)CCFM1157，此干酪乳杆菌CCFM1157能够缓解缓解皮肤细胞氧化损伤，具体体现在：
[0023](1)提高H2O2诱导的HaCaT细胞的存活率；
[0024](2)显著改善H2O2诱导的HaCaT细胞氧化损伤程度；
[0025](3)能够提高H2O2诱导的HaCaT细胞的抗氧化能力；
[0026](4)能够激活激活Nrf2抗氧化信号通路，提高分泌Nrf2能力，从而明显缓解和修复H2O2诱导的HaCaT细胞氧化造成的伤害，
[0027]可见，干酪乳杆菌CCFM1157在制备预防或治疗皮肤氧化损伤的产品中，具有巨大的应用前景。
[0028]生物材料保藏
[0029]一株干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)CCFM1157，分类学命名为Lactobacillus paracasei，已于2021年2月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编
号为GDMCC No：61497，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
附图说明
[0030]图1：不同组别促进H2O本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)CCFM1157，已于2021年2月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.61497。2.一种组合物，其特征在于，含有权利要求1所述干酪乳杆菌CCFM1157的细胞、发酵上清液或胞内物中的一种或多种。3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述胞内物为权利要求1所述干酪乳杆菌破碎后的上清液。4.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述细胞的制备方法为：将权利要求1所述干酪乳杆菌接种于培养基中发酵，将得到的发酵液离心，收集干酪乳杆菌细胞。5.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述发酵上清液的制备方法为：将权利要求1所述干酪乳杆菌接种于培养基中发酵，将得到的发酵液离心并除去固形物，收集干酪乳杆菌的发酵上清液。6.如权利要求2所述的组合物，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔树茂，毛丙永，孙媭，唐鑫，陆文伟，杨波，赵建新，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：