降低自身免疫抗体检测中磁珠非特异性吸附的处理方法技术

本发明专利技术提供一种降低自身免疫抗体检测中磁珠非特异性吸附的处理方法，包括步骤：一，配制磁珠工作液；二，在配制好的磁珠工作液中加入新生牛血清；三，将加入新生牛血清的磁珠工作液在室温下混合均匀，进行反应；四，将完成与新生牛血清反应后的磁珠工作液进行清洗、静置分离，并按照浓度0.3mg/ml重新配制；五，采用上述步骤加入新生牛血清处理后配制的磁珠工作液进行抗髓过氧化物酶免疫球蛋白G抗体检测；该处理方法为通过向磁珠工作液中加入动物血清结合非特异性物质，以减少磁微粒的非特异吸附能力，显著降低检测过程中由于非特异性吸附而造成的假阳性结果，有效提高检测的灵敏度及特异性。特异性。

【技术实现步骤摘要】
降低自身免疫抗体检测中磁珠非特异性吸附的处理方法


[0001]本专利技术涉及免疫检测
，尤其涉及一种降低自身免疫抗体检测中磁珠非特异性吸附的处理方法。

技术介绍

[0002]化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)兴起于上世纪70年代中期，发展至今已经成为一种成熟先进的超微量活性物质检测技术，应用范围十分广泛。该技术近10年发展迅猛，是目前推广应用最快的免疫分析方法，也是目前最先进的标记免疫测定技术，灵敏度和精确度比酶免法、荧光法高几个数量级。
[0003]磁微粒是指磁性纳米粒子与无机或有机分子结合形成的可均匀分散于一定基液中具有高度稳定性的胶态复合材料。由于磁微粒具有磁响应性，成本低、能耗少和无污染等特点，人们在磁微粒表面或通过磁微粒表面的功能基团(如氨基、羧基、巯基及环氧乙烷等)将酶、抗体、寡核苷酸等生物活性物质进行固定，可进一步用于酶的固定化、靶向药物载体、细胞分选、免疫检测、蛋白与核酸的分离纯化及杂交检测等领域。传统的免疫学检测多以酶标板为固相载体，悬浮性磁微粒作为载体具有较高的比表面积，能够更为充分地与样品反应，加之外加磁场的灵活应用，较之酶标板载体具有更高的灵敏度、更快的检测速度和更好的重复性等优点，目前已被广泛应用于生物及医学检测等领域。
[0004]自身免疫性疾病是指机体对自身的抗原产生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。常见有类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、干燥综合征、硬皮病、混合性结缔组织病、血管炎等疾病。
[0005]磁微粒与血清样本中非目的蛋白的非特异性吸附会造成假阳性结果，导致整体检测灵敏度降低。现有技术中常用的磁珠封闭剂有BSA、血清、酪蛋白等，但是这些常规的磁珠封闭剂不能满足产品的要求，因此有待改进。

技术实现思路

[0006]本专利技术的主要目的在于克服现有技术产品存在的部分非特异性吸附问题，而提供一种降低自身免疫抗体检测中磁珠非特异性吸附的处理方法，实现减少磁珠表面非特异性吸附以降低本底的技术效果。
[0007]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了如下的技术方案：
[0008]本专利技术降低自身免疫抗体检测中磁珠非特异性吸附的处理方法，包括以下步骤：
[0009]第一步：配制磁珠工作液；
[0010]第二步：在配制好的磁珠工作液中加入新生牛血清；
[0011]第三步：将加入新生牛血清的磁珠工作液在室温下混合均匀，进行反应；
[0012]第四步：将完成与新生牛血清反应后的磁珠工作液进行清洗、静置分离，并按照浓度0.3mg/ml重新配制；
[0013]第五步：采用上述步骤加入新生牛血清处理后配制的磁珠工作液进行抗髓过氧化
物酶(MPO)IgG抗体检测。
[0014]前述的降低自身免疫抗体检测中磁珠非特异性吸附的处理方法，其中，
[0015]所述磁珠工作液为磷酸盐缓冲液配制的浓度0.3mg/ml的链霉亲和素磁珠工作液；
[0016]所述新生牛血清为特级新生牛血清；该新生牛血清在磁珠工作液中加入的体积浓度为10
±
5％；
[0017]所述加入新生牛血清的磁珠工作液在室温下混合均匀，进行反应14～18小时；
[0018]所述完成与新生牛血清反应后的磁珠工作液采用磷酸盐缓冲液清洗2次，清洗时保持磁珠工作液的浓度为0.3mg/ml，每次清洗时间为5
‑
10min；清洗后静置分离至少2min，然后去除分离出的清洗液；
[0019]所述抗髓过氧化物酶(MPO)免疫球蛋白G(IgG)抗体检测为自身免疫抗体检测，是采用磁微粒化学发光免疫分析法检测试验。
[0020]前述的降低自身免疫抗体检测中非特异性吸附的处理方法，其中，所述磷酸盐缓冲液为常用磷酸盐缓冲液0.02M的PBS缓冲液。
[0021]本专利技术的降低自身免疫抗体检测中磁珠非特异性吸附的处理方法的有益效果，通过向磁珠工作液中加入新生牛血清结合血清样本中非特异性物质，以减少磁微粒的非特异吸附，显著降低检测过程中由于非特异吸附性而造成的假阳性结果，有效提高检测的灵敏度及特异性。
具体实施方式
[0022]下面结合具体实施例对本专利技术进一步阐述。所描述的具体实施例仅用于和解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0023]本专利技术降低自身免疫抗体检测中磁珠非特异性吸附的处理方法，其包括以下步骤：
[0024]第一步：配制磁珠工作液；
[0025]第二步：在配制好的磁珠工作液中加入新生牛血清；
[0026]第三步：将加入新生牛血清的磁珠工作液在室温下混合均匀，进行反应；
[0027]第四步：将完成与新生牛血清反应后的磁珠工作液进行清洗、静置分离，并按照浓度0.3mg/ml重新配制；
[0028]第五步：采用上述步骤加入新生牛血清处理后配制的磁珠工作液进行抗髓过氧化物酶(MPO)免疫球蛋白G(IgG)抗体检测。
[0029]本专利技术降低自身免疫抗体检测中磁珠非特异性吸附的处理方法，其中，
[0030]所述磁珠工作液为磷酸盐缓冲液配制的浓度0.3mg/ml的链霉亲和素磁珠工作液；所述新生牛血清为特级新生牛血清；该新生牛血清在磁珠工作液中加入的体积浓度为10
±
5％；所述加入新生牛血清的磁珠工作液在室温下混合均匀，进行反应14～18小时；所述完成与新生牛血清反应后的磁珠工作液采用磷酸盐缓冲液清洗2次，清洗时保持磁珠工作液的浓度为0.3mg/ml，每次清洗时间为5
‑
10min；清洗后静置分离至少2min，然后去除分离出的清洗液；所述抗髓过氧化物酶(MPO)免疫球蛋白G(IgG)抗体检测为自身免疫抗体检测，是采用磁微粒化学发光免疫分析法检测试验。所述磷酸盐缓冲液为常用磷酸盐缓冲液0.02M的PBS缓冲液。
[0031]实施例1：
[0032]第一步，采用常规方法配制磷酸盐缓冲液备用。
[0033]第二步，用磷酸盐缓冲液配制浓度为0.3mg/ml的链霉亲和素磁珠工作液10ml，在配制好的磁珠工作液中加入体积浓度为5％即0.5ml的新生牛血清。
[0034]将加入新生牛血清的链霉亲和素磁珠工作液在室温下混合均匀，反应14至18小时。反应后的含有新生牛血清的链霉亲和素磁珠工作液用磷酸盐缓冲液清洗2次，每次清洗时磷酸盐缓冲液用量为10ml，每次清洗混匀5至10min；清洗后静置分离至少2min，清洗完成后重新配制成0.3mg/ml的磁珠工作液。
[0035]实施例2：
[0036]第一步，采用常规方法配制磷酸盐缓冲液备用。
[0037]第二步，用磷酸盐缓冲液配制浓度为0.3mg/ml的磁珠工作液10ml，在配制好的磁珠工作液中加入体积浓度为10％即1ml的新生牛血清。
[0038]将加入新生牛血清的链霉亲和素磁珠工作液在室温下混合均匀，反应14至18小时。反应后的含有新生牛血清的链霉亲和素磁珠工作液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种降低自身免疫抗体检测中磁珠非特异性吸附的处理方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步：配制磁珠工作液；第二步：在配制好的磁珠工作液中加入新生牛血清；第三步：将加入新生牛血清的磁珠工作液在室温下混合均匀，进行反应；第四步：将完成与新生牛血清反应后的磁珠工作液进行清洗、静置分离，并按照浓度0.3mg/ml重新配制；第五步：采用上述步骤加入新生牛血清处理后配制的磁珠工作液进行抗髓过氧化物酶免疫球蛋白G抗体检测。2.根据权利要求1所述的降低自身免疫抗体检测中磁珠非特异性吸附的处理方法，其特征在于，所述磁珠工作液为磷酸盐缓冲液配制的浓度0.3mg/ml的链霉亲和素磁珠工作液；所述新生牛血清为特级新生牛血清；该新生牛血...

【专利技术属性】
技术研发人员：李孟楠，
申请(专利权)人：北京和杰创新生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：