一种巴氏染色试剂盒及其制备方法和染色方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及一种巴氏染色试剂盒及其制备方法和染色方法。该试剂盒包括苏木素染色液、EA/OG染色液、缓冲液、清洗液；苏木精染色液包括苏木精、碘酸钠、硫酸铝、亚硫酸钠、乙醇、乙二醇、丙三醇、乙酸、水；苏木素染色液pH值为2.0～3.0；EA/OG染色液包括橘黄G、磷钨酸、亮绿SF淡黄、水溶伊红、亚硫酸钠、乙醇、乙二醇、甲醇、异丙醇、乙酸、水；EA/OG染色液pH值为5.0～6.0；缓冲液pH值为6.8～7.2。本发明专利技术巴氏染色液染色效果均匀、细胞结构清晰、细胞着色鲜艳，易于临床上观察诊断，其配制方便，染色步骤简洁，效果稳定，细胞对比度清晰，使用寿命长。使用寿命长。

【技术实现步骤摘要】
一种巴氏染色试剂盒及其制备方法和染色方法


[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及一种巴氏染色试剂盒及其制备方法和染色方法。

技术介绍

[0002]巴氏染色是细胞学临床检验最基本的染色方法之一，不仅适用于妇科细胞学涂片染色如筛查宫颈癌和癌前病变，也适用于胸水、腹水、痰液、细针穿刺等非妇科细胞样本的染色，其染色效果鲜艳、透明性好以及核膜、核仁、染色质结构清晰。细胞中含有多种氨基酸，具有酸碱化学物质，且带有不同电荷，与巴氏染色液中的酸碱化学物质起化学反应，与巴氏染色液中不同电荷的染料结合，从而使分泌物中的脱落细胞染成不同的颜色为原理，用于脱落细胞涂片染色，方便观察诊断。
[0003]细胞核染色液主要为苏木素染液，细胞质染色液主要为橘黄G6染液、EA50染液或EA36染液。巴氏染色法将胞核染为深蓝色鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质染绿色，表层不全角化细胞胞质染粉红色，完全角化细胞胞质呈桔黄色细菌灰色；滴虫：淡蓝灰色；黏液：淡蓝色或粉红色；中性粒细胞和淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色；红细胞染粉红色；高分化鳞癌细胞可染成粉红色或桔黄色；腺癌胞质呈灰蓝色。
[0004]但传统的巴氏染色方法具有如下缺陷：
[0005]1)传统的巴氏染色时，染色细胞核的苏木素染色液中含有剧毒物质氧化汞，本专利技术采用环保无毒试剂配制。
[0006]2)传统的巴氏染色时，染色细胞质的染色液通常采用橘黄G6和EA50或EA36，染色时间长，染色程序繁琐。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术提供了一种环保无毒快速的高清巴氏染色试剂盒及其制备方法和染色方法。本专利技术采用EA/OG组合型染色液为细胞质染色，染色液成分环保无毒，染色时间快速，制备成本低廉，染色程序简单，染色效果鲜亮，对比度清晰，适合自动化设备应用。
[0008]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0009]本专利技术提供了一种巴氏染色液试剂盒，包括苏木素染色液、EA/OG染色液、缓冲液、清洗液；
[0010]苏木精染色液包括苏木精、碘酸钠、硫酸铝、亚硫酸钠、乙醇、乙二醇、丙三醇、乙酸、水；苏木素染色液的pH值为2.0～3.0；
[0011]EA/OG染色液包括橘黄G、磷钨酸、亮绿SF淡黄、水溶伊红、亚硫酸钠、乙醇、乙二醇、甲醇、异丙醇、乙酸、水；EA/OG染色液的pH值为5.0～6.0；
[0012]缓冲液包括磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾、吐温20、苯氧乙醇、氢氧化钠、水；缓冲液的pH值为6.8～7.2。
[0013]本专利技术巴氏染色试剂盒中，苏木精染色液用于细胞核的染色，EA/OG染色液用于细
胞质的染色，所述染色液对细胞核、细胞质的结构染色清晰、对比度明显，颜色鲜亮，便于临床检验医师做出诊断，清洗液、缓冲液作为染色过程必不可少的辅助试剂配合使用，能起到利于着色、缩短染色时间、使染色效果更佳清晰等重要作用。
[0014]进一步的，染色液经过严格过滤和保护剂亚硫酸钠的抗氧化作用，使设备在染色过程中不容易形成结晶性物质。
[0015]进一步的，乙酸和氢氧化钠调节pH，使苏木素染色液pH值在2.0～3.0之间，使EA/OG染色液pH值在5.0～6.0之间，使缓冲液pH值在6.8～7.2之间。
[0016]作为优选，苏木精染色液中各组分浓度为：苏木精2～3g/L，碘酸钠0.2～0.3g/L，硫酸铝15～20g/L，亚硫酸钠0.05～0.1g/L，乙醇100～200mL/L，乙二醇50～150mL/L，丙三醇50～100mL、乙酸10～20mL/L，余量为水。
[0017]作为优选，EA/OG染色液中各组分浓度为：橘黄G 0.5～2g/L，磷钨酸1～2g/L，亮绿SF淡黄0.2～0.5g/L，水溶伊红3～5g/L，亚硫酸钠0.05～0.1g/L，乙醇200～300mL/L，乙二醇100～200mL/L，甲醇200～300mL/L，异丙醇0～100mL，乙酸10～20mL/L，余量为水。
[0018]作为优选，缓冲液中各组分浓度为：磷酸二氢钾1～2g/L、磷酸氢二钠0.5～1.5g/L、氯化钠6～10g/L、氯化钾0.1～0.5g/L、吐温201～5mL/L，苯氧乙醇0.5～5mL/L，氢氧化钠2～6mM，余量为水。
[0019]作为优选，清洗液为甲醇、乙醇、异丙醇、丙三醇中的一种或几种。
[0020]在本专利技术具体实施例中，清洗液为甲醇0～200mL/L、乙醇500～950mL/L、异丙醇0～500mL/L、丙三醇0～50mL/L配制而成。
[0021]本专利技术还提供了该巴氏染色液试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
[0022]1)苏木精染色液的配制：
[0023]①
将硫酸铝加入水中，在35～45℃下搅拌溶解，再加入苏木精，搅拌溶解，得到溶液A1；
[0024]②
将乙醇、乙二醇、丙三醇混合，得到溶液B1；
[0025]③
将溶液A1与溶液B1混合，将碘酸钠、亚硫酸钠加入所得混合液中，得到溶液C1；
[0026]④
向溶液C1中加乙酸调节pH；用水定容，过滤；
[0027]2)EA/OG染色液的配制：
[0028]①
将亮绿SF淡黄、水溶伊红、橘黄G、亚硫酸钠加入水中，在35～45℃下搅拌溶解，得到溶液A2；
[0029]②
将乙醇、乙二醇、甲醇、异丙醇混合，得到溶液B2；
[0030]③
将溶液A2与溶液B2混合，得到溶液C2；
[0031]④
向溶液C2中加入乙酸调节pH；用乙醇定容，过滤；
[0032]3)缓冲液的配制：
[0033]①
将磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾加入水中，搅拌溶解，得到溶液A3；
[0034]②
将苯氧乙醇加入到溶液A3中，然后加入吐温20搅拌溶解，得到溶液B3；
[0035]③
向溶液B3中加入氢氧化钠调节pH；用水定容。
[0036]本专利技术还提供了一种巴氏染色方法，采用上述巴氏染色液试剂盒对细胞进行染色，具体包括如下步骤：
[0037]依次采用清洗液、缓冲液清洗细胞；
[0038]采用苏木素染色液对细胞核进行染色；
[0039]依次采用缓冲液、清洗液对细胞进行清洗；
[0040]采用EA/OG染色液对细胞质进行染色；
[0041]采用清洗液对细胞进行清洗；
[0042]依次采用无水乙醇、二甲苯对细胞进行冲洗，封片。
[0043]作为优选，细胞核染色的时间为2～4分钟。
[0044]作为优选，细胞质染色的时间为1～3分钟。
[0045]本专利技术提供了一种环保无毒快速的高清巴氏染色试剂盒及其制备方法和染色方法。该试剂盒包括苏木素染色液、EA/OG染色液、缓冲液、清洗液；苏木精染色液包括苏木精、碘酸钠、硫酸铝、亚硫酸钠、乙醇、乙二醇、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种巴氏染色液试剂盒，其特征在于，包括苏木素染色液、EA/OG染色液、缓冲液、清洗液；苏木精染色液包括苏木精、碘酸钠、硫酸铝、亚硫酸钠、乙醇、乙二醇、丙三醇、乙酸、水；苏木素染色液的pH值为2.0～3.0；EA/OG染色液包括橘黄G、磷钨酸、亮绿SF淡黄、水溶伊红、亚硫酸钠、乙醇、乙二醇、甲醇、异丙醇、乙酸、水；EA/OG染色液的pH值为5.0～6.0；缓冲液包括磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾、吐温20、苯氧乙醇、氢氧化钠、水；缓冲液的pH值为6.8～7.2。2.根据权利要求1所述的巴氏染色液试剂盒，其特征在于，所述苏木精染色液中各组分浓度为：苏木精2～3g/L，碘酸钠0.2～0.3g/L，硫酸铝15～20g/L，亚硫酸钠0.05～0.1g/L，乙醇100～200mL/L，乙二醇50～150mL/L，丙三醇50～100mL、乙酸10～20mL/L，余量为水。3.根据权利要求1所述的巴氏染色液试剂盒，其特征在于，所述EA/OG染色液中各组分浓度为：橘黄G 0.5～2g/L，磷钨酸1～2g/L，亮绿SF淡黄0.2～0.5g/L，水溶伊红3～5g/L，亚硫酸钠0.05～0.1g/L，乙醇200～300mL/L，乙二醇100～200mL/L，甲醇200～300mL/L，异丙醇0～100mL，乙酸10～20mL/L，余量为水。4.根据权利要求1所述的巴氏染色液试剂盒，其特征在于，所述缓冲液中各组分浓度为：磷酸二氢钾1～2g/L、磷酸氢二钠0.5～1.5g/L、氯化钠6～10g/L、氯化钾0.1～0.5g/L、吐温201～5mL/L，苯氧乙醇0.5～5mL/L，氢氧化钠2～6mM，余量为水。5.根据权利要求1所述的巴氏染色液试剂盒，其特征在于，所述清洗液为甲醇、乙醇、异丙醇、丙三醇中的一种或几种。6.权利要求1至5中任一项所述巴氏染色液试剂盒的制备方法，其特征在于，包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：张明伟，刘美静，孙欣欣，李婧，盛春海，蓝皓慧，
申请(专利权)人：山东高创医疗器械国家研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：