中药黄酮类抗甲型流感病毒KA系列药物及应用制造技术

中药黄酮类抗甲型流感病毒KA系列药物及应用，涉及中药材生物活性检测技术领域。应用分子对接技术发现KA系列药物与H1N1病毒的HA、NP、NA均有一定程度的结合，再从细胞水平研究药物的体外药效，发现KA

【技术实现步骤摘要】
中药黄酮类抗甲型流感病毒KA系列药物及应用


[0001]本专利技术涉及中药材生物活性检测
，具体为中药黄酮类抗甲型流感病毒KA系列药物的筛选及应用。

技术介绍

[0002]上世纪暴发了4次世界大流感，其中有2次是由H1N1病毒引起的。H1N1属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，甲型流感病毒属(InfluenzaAvirus)的一个亚型，该病毒极易发生抗原变异，而其他的流感病毒变异性较弱，因此甲型流感病毒最常见且毒力大，人类通常也无法获得持久的免疫力，病毒抗原转变后易导致世界性的流感大暴发，每年全球因感染流感而死亡的人数高达25
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50万。因此，研究开发有效的抗甲型流感病毒药物已是国内外迫在眉睫的重大课题。
[0003]H1N1病毒的囊膜上有2种纤突糖蛋白：棒状的血凝素蛋白(hemagglutinin，HA)，由同源三聚体组成；蘑菇状的神经氨酸酶蛋白(neurominidase，NA)，由同源四聚体组成。血凝素(HA)与神经氨酸酶(NA)是甲型流感病毒最重要的2种抗原，在流感病毒的生活周期中，HA与宿主细胞表面的唾液酸受体结合，介导病毒通过内吞进入宿主细胞及随后的低pH诱导的内质体膜融合。NA则负责在病毒感染末期移去细胞受体末端与HA结合的唾液酸，帮助新生病毒粒子释放和迁移，防止病毒聚集。
[0004]目前上市药物主要为病毒的离子通道阻断剂(金刚烷胺和金刚乙胺)和神经氨酸酶抑制剂(达菲)，这些药物容易使流感病毒变异产生耐药毒株，临床应用中也报告出现多例不良反应症状。我国医药学治疗感冒积累了丰富的经验，并拥有丰富的中草药资源，中药具有作用靶点多以及不容易产生耐药性、毒副作用小、可以长期使用等特点和优势，在新型抗甲型流感病毒药物研发中具有广阔的发展前景。
[0005]黄酮类化合物(flavonoid)是一类生物活性很强的化合物，并且广泛存在于自然界中，其数量列为天然酚类化合物之首，主要分为黄酮类、黄酮醇类、异黄酮类、黄烷酮类等，广义的范围还包括查耳酮、嗅酮、异黄烷酮及茶多酚。黄酮类化合物具有许多重要的生理活性，如抗氧化、抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒、抗过敏、抗糖尿病并发症等。
[0006]本专利从中药中筛选抗甲型H1N1病毒的药物，增加医生和病患对抗流感病毒中药的选择使用。

技术实现思路

[0007]本专利技术所要解决的技术问题是，究查阅总结多篇文献，确定需要进行实验筛选的药物，再通过分离提纯获得药物，然后从计算机水平、细胞水平、分子水平和生化水平研究药物的作用机理并进一步验证药效，最后筛选出效果良好的抗甲型H1N1流感中药。
[0008]8种天然黄酮类药物代号与来源
[0009][0010]通过分子水平的BIAcoreSPR分析技术和生化水平的神经氨酸酶抑制剂筛选实验结果发现，KA
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108能够与病毒的HA产生相互作用；KA
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110的作用靶点是HA和NP，但是和NP的相互作用明显强于HA；KA
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20对病毒的NA有一定的抑制作用。并且，分子对接的结果与细胞实验及分子、生化水平的实验结果有一致性：细胞实验证实有抗病毒作用的三种药物中，分子对接结果显示KA
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108与HA结合程度最高，与BIAcore结果一致；而在与NA结合中，KA
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20与NA结合程度最高，与神经氨酸酶抑制剂筛选实验结果一致。
[0011]KA
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108、KA
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110、KA
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20三种天然黄酮类药物在细胞水平上有较好的抗甲型H1N1流感病毒的作用。
附图说明
[0012]图1甲型H1N1流感病毒结构
[0013]图2 H1N1流感病毒HA结构及其活性位点
[0014]图3 H1N1流感病毒NP结构及其活性位点
[0015]图4 KA
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108、KA
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110、阳性对照药物与甲型流感病毒靶蛋白结合的Biacore分析图谱
具体实施方式
[0016]为了更好地理解本专利技术的内容，下面结合实验和结果对筛选出的药物在抗甲型H1N1流感中的应用进一步说明。
[0017]一、本专利技术所用的材料、细胞与病毒
[0018]1、实验组天然黄酮类药物KA
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105、KA
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106、KA
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107、KA
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108、KA
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109、KA
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110、KA
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111、KA
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20为本科室分离提纯，共8种，均不水溶，实验中首先将药物粉末溶于DMSO中配制成高浓度药物母液，再用无血清DMEM稀释至所需浓度。对照组药物莲花清瘟胶囊为石家庄以岭药业股份有限公司生产，水溶。
[0019]2、MDCK细胞系(MDCKCellLines)：狗肾传代细胞，为贴壁细胞。由中国疾病预防控制中心病毒病所流感中心提供，本科室传代保存。本实验使用低代数的MDCK细胞(小于25
代)用含90％无血清DMEM、10％胎牛血清(FBS)、1％青链霉素溶液(SP)、1％谷氨酰胺(Glu)的DMEM培养基培养。
[0020]3、甲型H1N1流感病毒：江西章贡感染者H1分离毒株，由中国疾病预防控制中心病毒病所流感中心提供，本科室保存。
[0021]二、分子对接技术虚拟筛选抗甲型H1N1流感病毒的天然黄酮类药物
[0022]靶点蛋白HA、NA、NP在甲型H1N1流感病毒感染生活周期中具有重要功能，使用DiscoveryStudio2.5软件中的半柔性对接LibDock模块分别针对这三个蛋白的活性位点将药物小分子与之进行对接。前期总结文献，选出的实验药物KA
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105、KA
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106、KA
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107、KA
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108、KA
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109、KA
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110、KA
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111、KA
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20均属黄酮类化合物，它们具有相同的母核结构，本实验将它们分别与H1N1病毒靶蛋白HA、NA、NP的活性位点进行分子对接，并对这八种药物的对接结果进行分析比较。
[0023]表1天然黄酮类药物与HA的对接结果
[0024][0025]*表格中下划线强调的是针对每种药物在所有结合位点中LibdockScore最高分的和分子对接得到的方式数量最多的数据。
[0026]在药物与HA的分子对接中，KA
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107在所有位点和结合方式中与HA结合的最好，但是site3与8种药物的结合方式最多，除KA
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20以外，其他7种药物结合程度最高的位点是site2。
[0027]表2天然黄酮类药物与NP的对接结果
[0028][0029][0030]*表格中下划线强调的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.中药黄酮类抗甲型流感病毒KA系列药物，其特征在于：是KA系列药物。2.根据权利要求1所述的药物，其特征在于：KA系列药物为KA
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108、KA
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110、KA
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20。3.根据权利要求2所述的药物，其特征在于：KA

【专利技术属性】
技术研发人员：李劲涛，袁闻浚，王小利，贾润清，王丽，王明连，杨怡姝，李长硕，
申请(专利权)人：北京工业大学，
类型：发明
国别省市：