靶向ATXN3的反义寡核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及与ATXN3前体mRNA序列互补的反义LNA寡核苷酸(寡聚物)，所述反义LNA寡核苷酸能够抑制ATXN3蛋白的表达。抑制ATXN3表达有利于脊髓小脑共济失调的治疗。于脊髓小脑共济失调的治疗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向ATXN3的反义寡核苷酸


[0001]本专利技术涉及与ATXN3前mRNA序列互补的反义LNA寡核苷酸(寡聚体)，其能够抑制ATXN3的表达。抑制ATXN3表达有利于治疗脊髓小脑共济失调，例如脊髓小脑共济失调3(马查多
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约瑟夫病(MJD))。

技术介绍

[0002]脊髓小脑共济失调3型(SCA3)，也称为马查多
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约瑟夫病(MJD)，是九种多聚谷氨酰胺扩张性疾病之一，也是世界上最常见的显性遗传性共济失调。虽然SCA3中的某些症状可能对对症治疗有反应，但对于这种无情的进行性和致命的神经退行性疾病，仍然没有有效的治疗方法。该疾病是由ATXN3基因中的CAG重复扩张引起的，该基因编码疾病蛋白ATXN3(Ataxin 3)中异常长的多聚谷氨酰胺束。毒性ataxin
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3蛋白与在SCA3患者脑组织中经常观察到的聚集体有关。
[0003]Moore等人报道，靶向ATXN3的反义寡核苷酸(ASO)能够降低人类疾病成纤维细胞中和表达全长人类突变ATXN3基因的小鼠模型中的致病性ATXN3蛋白的水平(Moore等人，Mol Ther Nucleic Acids.2017；7：200
‑
210)。因此，ASO介导的ATXN3靶向被建议作为SCA3的治疗方法。
[0004]Swayze等人(Nucleic Acids Res.2007；35(2)：687
‑
700.Epub 2006 Dec 19)报道，含有锁核酸的反义寡核苷酸具有提高效力的潜力，但会对动物产生显著的毒性(肝毒性)。
[0005]Toonen等人使用反义寡核苷酸来掩盖ATXN3的预测外显子剪接信号，导致外显子10从ATXN3前体mRNA中跳过。外显子10的跳过导致形成截短的ataxin
‑
3蛋白，该蛋白缺乏有毒的多聚谷氨酰胺扩张，但保留了其泛素结合和切割功能(Toonen等人，Molecular Therapy
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Nucleic Acids，2017，第8卷：232
‑
242)。
[0006]WO2013/138353、WO2015/017675、WO2018/089805和WO2019/217708公开了用于治疗SCA3的靶向人ATXN3 mRNA的反义寡核苷酸。
[0007]专利技术目的
[0008]本专利技术鉴定了用于体外或体内反义抑制的ATXN3转录物(ATXN3)的区域，并且提供了反义寡核苷酸，包括LNA缺口聚物寡核苷酸，其靶向ATXN3前体mRNA或成熟mRNA的这些区域。本专利技术鉴定了可用于治疗脊髓小脑共济失调的抑制人ATXN3的寡核苷酸。

技术实现思路

[0009]本专利技术提供了一种反义寡核苷酸，长度为10
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30个核苷酸，靶向哺乳动物ATXN3(Ataxin 3)靶核酸，其中在表达哺乳动物ATXN3的细胞中，该反义寡核苷酸能够抑制哺乳动物ATXN3的表达。
[0010]哺乳动物ATXN3靶核酸可以是例如人、猴或小鼠ATXN3靶核酸。
[0011]本专利技术提供了一种LNA缺口聚物反义寡核苷酸，长度为10
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30个核苷酸，其中所述
反义寡核苷酸包含长度为10
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30个核苷酸的连续核苷酸序列，其中该连续核苷酸序列与SEQ ID NO 1至少90％互补，例如完全互补，其中在表达人ATXN3的细胞中，该反义寡核苷酸能够抑制人ATXN3的表达。
[0012]本专利技术提供了一种反义寡核苷酸，其包含选自由表2、4、5和6中所示寡核苷酸碱基序列组成的组的连续核苷酸序列，其中在表达人ATXN3的细胞中，该反义寡核苷酸能够抑制人ATXN3的表达；或其药用盐。
[0013]本专利技术提供了一种LNA缺口聚物反义寡核苷酸，其包含选自由表2、4、5和6中所示寡核苷酸碱基序列组成的组的连续核苷酸序列，其中在表达人ATXN3的细胞中，该LNA缺口聚物反义寡核苷酸能够抑制人ATXN3的表达；或其药用盐。
[0014]本专利技术提供了一种反义寡核苷酸，其包含连续核苷酸序列SEQ ID NO：1122，其中在表达人ATXN3的细胞中，该反义寡核苷酸能够抑制人ATXN3的表达；或其药用盐。
[0015]本专利技术提供了一种反义寡核苷酸，其包含连续核苷酸序列SEQ ID NO：1813，其中在表达人ATXN3的细胞中，该反义寡核苷酸能够抑制人ATXN3的表达；或其药用盐。
[0016]本专利技术提供了一种反义寡核苷酸，其包含连续核苷酸序列SEQ ID NO：1812，其中在表达人ATXN3的细胞中，该反义寡核苷酸能够抑制人ATXN3的表达；或其药用盐。
[0017]本专利技术提供了一种反义寡核苷酸，其包含连续核苷酸序列SEQ ID NO：1809，其中在表达人ATXN3的细胞中，该反义寡核苷酸能够抑制人ATXN3的表达；或其药用盐。
[0018]本专利技术提供了一种反义寡核苷酸，其包含连续核苷酸序列SEQ ID NO：1807，其中在表达人ATXN3的细胞中，该反义寡核苷酸能够抑制人ATXN3的表达；或其药用盐。
[0019]在一些实施例中，本专利技术的反义寡核苷酸是LNA缺口聚物反义寡核苷酸。
[0020]本专利技术提供了根据本专利技术的反义寡核苷酸，例如长度为12
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24个、例如长度为12
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18个核苷的反义寡核苷酸，其中该反义寡核苷酸包含连续核苷酸序列，该连续核苷酸序列包含存在于选自以下项中的序列中的至少10个连续核苷酸：表2、4、5和6中所示寡核苷酸碱基序列。
[0021]本专利技术提供了根据本专利技术的反义寡核苷酸，例如长度为12
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24个、例如长度为12
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18个核苷的反义寡核苷酸，其中该反义寡核苷酸包含连续核苷酸序列，该连续核苷酸序列包含存在于选自以下项中的序列中的至少12个连续核苷酸：表2、4、5和6中所示寡核苷酸碱基序列。
[0022]本专利技术提供了根据本专利技术的反义寡核苷酸，例如长度为12
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24个、例如长度为12
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18个核苷的反义寡核苷酸，其中该反义寡核苷酸包含连续核苷酸序列，该连续核苷酸序列包含存在于选自以下项中的序列中的至少14个连续核苷酸：表2、4、5和6中所示寡核苷酸碱基序列。
[0023]本专利技术提供了根据本专利技术的反义寡核苷酸，例如长度为12
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24个、例如长度为12
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18个核苷的反义寡核苷酸，其中该反义寡核苷酸包含连续核苷酸序列，该连续核苷酸序列包含存在于选自以下项中的序列中的至少16个连续核苷酸：表2、4、5和6中所示寡核苷酸碱基序列。
[0024]本专利技术提供了根据本专利技术的反义寡核苷酸，例如长度为12
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24个、例如长度为12
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18个核苷的反义寡核苷酸，其中该反义寡核苷酸包含连续核苷酸序列本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种选自由编号1122_62、1122_67、1856_1、1813_1、1812_1、1809_2、1607_1和1122_33的化合物组成的组的反义寡核苷酸或其药用盐。2.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸为ACCcatattttactCTT(化合物编号1856_1)，其中大写字母代表β
‑
D
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氧基LNA核苷，小写字母代表DNA核苷，其中每个LNA胞嘧啶为5
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甲基胞嘧啶，并且其中所述核苷之间的核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；或其药用盐。3.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸为CTGtacacttttacaTT(化合物编号1813_1)，其中大写字母代表β
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D
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氧基LNA核苷，小写字母代表DNA核苷，其中每个LNA胞嘧啶为5
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甲基胞嘧啶，并且其中所述核苷之间的核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；或其药用盐。4.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸为TGtacacttttacatTCC(化合物编号1812_1)，其中大写字母代表β
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D
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氧基LNA核苷，小写字母代表DNA核苷，其中每个LNA胞嘧啶为5
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甲基胞嘧啶，并且其中所述核苷之间的核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；或其药用盐。5.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸为GtacacttttacattCCC(化合物编号1809_2)，其中大写字母代表β
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D
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氧基LNA核苷，小写字母代表DNA核苷，其中每个LNA胞嘧啶为5
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甲基胞嘧啶，并且其中所述核苷之间的核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；或其药用盐。6.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸为TTCttcattataccatCAA(化合物编号1607_1)，其中大写字母代表β
‑
D
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氧基LNA核苷，小写字母代表DNA核苷，其中每个LNA胞嘧啶为5
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甲基胞嘧啶，并且其中所述核苷之间的核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键；或其药用盐。7.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸为AatCtTatttacatcTtCC(化合物编号1122_62)，其中大写字母代表β
‑
D
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氧基LNA核苷，小写字母代表DNA核苷，其中每个LNA胞嘧啶为5

【专利技术属性】
技术研发人员：杰特，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：