一种细胞外囊泡在治疗神经损伤性勃起功能障碍中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种细胞外囊泡在治疗神经损伤性勃起功能障碍中的应用。本发明专利技术首次提供了从褪黑素预处理离体的人间充质干细胞中提取得到的细胞外囊泡在治疗神经损伤性勃起功能障碍中的应用，本发明专利技术将所述的细胞外囊泡溶于磷酸盐缓冲液中得到浓度为5

【技术实现步骤摘要】
一种细胞外囊泡在治疗神经损伤性勃起功能障碍中的应用


[0001]本专利技术涉及一种细胞外囊泡在治疗神经损伤性勃起功能障碍中的应用，属于生物医药


技术介绍

[0002]目前勃起功能障碍的一线治疗手段是口服磷酸二酯酶
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5抑制剂，例如他达拉非、西地那非等。该类型药物主要结构为非选择性或者选择性磷酸二酯酶
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5抑制剂，治疗勃起功能障碍的原理为通过抑制阴茎磷酸二酯酶
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5活性，通过减少降解来增加环磷酸鸟苷浓度。目前勃起功能障碍的临床一线治疗药物磷酸二酯酶
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5抑制剂发挥作用依赖于完整的血管内皮，不能逆转血管内皮和神经损伤，伤，对于糖尿病导致的勃起功能障碍、前列腺癌术后勃起功能障碍等临床治疗效果不确切。作为勃起功能障碍临床二线治疗手段，阴茎海绵体注射血管活性药物、真空负压吸引或低能量冲击波治疗依旧无法彻底修复阴茎血管内皮和神经损伤。利用人间充质干细胞阴茎海绵体注射的方式可以促进阴茎血管内皮和神经损伤修复，然而，不仅面临着免疫排斥、成瘤风险和伦理限制，而且操作繁琐，需要细胞储存复苏设备。
[0003]细胞外囊泡(extracellular vesicles)是细胞在增殖过程中释放入细胞外空间的囊状结构。根据直径大小，可以分为：外泌体(exosome，直径：50
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100nm)及微颗粒(microparticle，直径：100
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1000nm)。细胞外囊泡作为载体，运载着包括信号蛋白、脂质、核酸等成分，能够被远处的目标细胞所摄取内吞，从而能改变靶细胞的生物学行为。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是：现有技术中用于治疗勃起功能障碍的药物存在副作用大，效果不佳等问题。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种细胞外囊泡在制备治疗神经损伤性勃起功能障碍的药物中的应用，所述的细胞外囊泡来源于褪黑素预处理离体的人间充质干细胞后提取得到的细胞外囊泡。
[0006]优选地，所述褪黑素的浓度为1μM。
[0007]优选地，所述的人间充质干细胞包括脂肪来源间充质干细胞、骨髓来源间充质干细胞、脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和尿源性间充质干细胞中的至少一种。
[0008]优选地，所述的药物包括注射剂。
[0009]优选地，所述注射剂为细胞外囊泡溶于溶剂后制得，所述溶剂包括磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.2～7.4。
[0010]优选地，所述的注射剂中细胞外囊泡的浓度为5
×
10
10
个颗粒/毫升。
[0011]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0012]1.本专利技术通过阴茎海绵体注射褪黑素预处理人间充质干细胞后的细胞外囊泡解决难治性勃起功能障碍患者阴茎血管内皮和神经损伤的技术问题，为治疗勃起功能障碍提
供安全、有效、使用方便的治疗药物制剂；且与单纯人间充质干细胞的细胞外囊泡相比，褪黑素预处理人间充质干细胞后提取的细胞外囊泡促进血管内皮修复和神经再生的功效更强，更好的改善勃起功能；
[0013]2.本专利技术中褪黑素预处理人间充质干细胞后提取的细胞外囊泡保留了促进血管内皮和神经修复的有效成分，制备成制剂后，只需冷藏保存，且阴茎海绵体注射操作简便，克服了利用间充质干细胞阴茎海绵体注射的方式存在的免疫排斥、成瘤风险、操作繁琐等缺陷。
附图说明
[0014]图1为褪黑素预处理人脂肪间充质干细胞后的细胞外囊泡电镜图，标尺为100nm；
[0015]图2为褪黑素预处理人脂肪间充质干细胞后提取的细胞外囊泡的粒径分布图；
[0016]图3为褪黑素预处理人脂肪间充质干细胞后提取的细胞外囊泡治疗神经损伤性勃起功能障碍大鼠4周后勃起功能恢复情况，其中，A为正常大鼠(Sham)的海绵体内压和动脉压记录曲线，B为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组的海绵体内压和动脉压记录曲线，C为注射未经褪黑素预处理的人脂肪间充质干细胞的细胞外囊泡组(EVs)的海绵体内压和动脉压记录曲线，D为注射褪黑素预处理人脂肪间充质干细胞后的细胞外囊泡组(MT
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EVs)的海绵体内压和动脉压记录曲线，E为四组海绵体内压比平均动脉压比值对比，***表示经过统计学分析，两组间(注射PBS组与注射未经褪黑素预处理人脂肪间充质干细胞后的细胞外囊泡组)具有显著性差异，P值小于0.001，**表示经过统计学分析，两组间(注射未经褪黑素预处理的人脂肪间充质干细胞的细胞外囊泡组与注射褪黑素预处理人脂肪间充质干细胞后的细胞外囊泡组)具有显著性差异，P值小于0.01；
[0017]图4为褪黑素预处理人脂肪间充质干细胞后提取的细胞外囊泡治疗神经损伤性勃起功能障碍大鼠4周后海绵体内皮细胞eNOS的免疫荧光染色，其中，A为正常大鼠(Sham)对照组，B为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组，C为注射未经褪黑素预处理的人脂肪间充质干细胞的细胞外囊泡组(EVs)，D为注射褪黑素预处理人脂肪间充质干细胞后的细胞外囊泡组(MT
‑
EVs)，E为四组海绵体内皮细胞eNOS表达水平的统计学分析，**表示两组间具有显著性差异，P值小于0.01，*表示两组间具有显著性差异，P值小于0.05；
[0018]图5为褪黑素预处理人脂肪间充质干细胞后提取的细胞外囊泡治疗神经损伤性勃起功能障碍大鼠4周后阴茎背神经nNOS的免疫荧光染色，其中，A为正常大鼠(Sham)对照组，B为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组，C为注射未经褪黑素预处理的人脂肪间充质干细胞的细胞外囊泡组(EVs)，D为注射褪黑素预处理人脂肪间充质干细胞后的细胞外囊泡组(MT
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EVs)，E为四组阴茎背神经nNOS表达水平的统计学分析，***表示两组间具有显著性差异，P值小于0.001，**表示两组间具有显著性差异，P值小于0.01。
具体实施方式
[0019]为使本专利技术更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下。
[0020]实施例1
[0021]一种用于治疗勃起功能障碍的细胞外囊泡：
[0022]1、褪黑素预处理人间充质干细胞后的细胞外囊泡的提取：
[0023]从人自体组织或者细胞库获得P4代脂肪来源间充质干细胞在临床级无血清培养基中培养，当细胞融合达到80
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90％时，加入含1μM褪黑素的无血清DMEM培养基，24h后收集细胞上清液。细胞上清液经过300g在4℃环境下离心10min，16500g在4℃环境下离心10min去除细胞和细胞碎片，120000g在4℃环境下离心70min收集细胞外囊泡。
[0024]其中，上述采用的人间充质干细胞不局限于脂肪来源间充质干细胞，可以采用骨髓来源间充质干细胞、脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、尿源性间充质干细胞等；上述获得的细胞外囊泡包括微颗粒和外泌体。
[0025]2、制备注射用褪黑素预处理人间充质干细胞后的细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞外囊泡在制备治疗神经损伤性勃起功能障碍的药物中的应用，其特征在于，所述的细胞外囊泡来源于褪黑素预处理离体的人间充质干细胞后提取得到的细胞外囊泡。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述褪黑素的浓度为1μM。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的人间充质干细胞包括脂肪来源间充质干细胞、骨髓来源间充质干细胞、脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和尿源性间充质干细胞中...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢慕峻，杨孟波，肖冬冬，陈信达，张明，燕浩，吕向国，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属仁济医院，
类型：发明
国别省市：