一种可分解海带的菌株制造技术

本发明专利技术公开了一种可分解海带的菌株，该菌株来自山东省荣成爱连湾海带养殖区，分离自海带表面，分类名为食鹿角菜假交替单胞菌A1，其具有分解海带，破坏海带细胞壁，释放其中糖类化合物的功能。该菌株于2021年3月30日保藏于中国微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCC 22090。本发明专利技术提供的菌株在室温条件下培养可破坏海带的细胞壁，分解海带使残渣率<40％，释放细胞壁中的糖类化合物，从而为海带的综合利用提供帮助。用提供帮助。用提供帮助。

【技术实现步骤摘要】
一种可分解海带的菌株


[0001]本专利技术涉及一种菌株，具体涉及一种可分解海带的菌株，属于海洋生物


技术介绍

[0002]海带属褐藻门，其细胞壁富含多糖成分。海带细胞壁主要由海带淀粉、褐藻多糖硫酸酯和褐藻酸交联形成，蛋白质、糖蛋白、酚类化合物及碘、钙等其他卤化物和离子分布于细胞壁中。
[0003]海带是我国的主要经济褐藻之一，不仅食用价值高，海带细胞壁成分具有重要的商业价值。
[0004]海带中的海藻多糖，包括海带淀粉、褐藻多糖硫酸酯和褐藻酸，及其中含有大量的有机化合物、钙、镁、碘等多种矿物质元素，是其特有的植物生长调节剂，这些物质能够有效调节植物抗病抗逆并改善土壤。
[0005]海带是海藻肥生产使用的主要原料之一，在海藻肥生产和应用中具有重要开发价值。
[0006]利用微生物发酵过程中产生的多种酶类将海带大分子物质降解为植物容易吸收利用的小分子物质，是海藻肥的一种生产工艺——生物提取工艺，该方法反应温和、产物安全环保无污染，最大限度保留了海藻中的生物活性成分和营养物质，是理想的海藻肥生产方法。
[0007]目前海藻肥的生物提取工艺，需结合多种酶和微生物发酵进行，才能破坏海藻的细胞壁，成本投入大。
[0008]寻找安全高效、反应温和的微生物用于海带的发酵，有效破坏细胞壁，释放其中的有效物质，对开发优质海藻肥产品具有积极的意义。

技术实现思路

[0009]为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种可分解海带的菌株，其具有分解海带，破坏海带细胞壁，促进释放其中糖类化合物的功能。
[0010]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：
[0011]一种可分解海带的菌株，其特征在于，该菌株分离自山东省荣成爱连 湾海带养殖区，分类名为食鹿角菜假交替单胞菌A1，其具有分解海带，破 坏海带细胞壁，释放其中糖类化合物的功能，该菌种于2021年3月30日 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号： CGMCC NO.22090，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0012]本专利技术所具有的优点:
[0013]本专利技术提供的菌株在室温条件下培养可破坏海带的细胞壁，分解海带使残渣率<40％，释放细胞壁中的糖类化合物，从而为海带的综合利用提供帮助。
附图说明
[0014]图1正常的海带表面(A)及食鹿角菜假交替单胞菌A1发酵处理后的海带表面(B)电镜照片。
[0015]图2本专利技术提供菌株对海带分解情况，随时间增加海带残渣率下降。图3为以邻接法(neighbour
‑
joining)构建系统发育树图。
具体实施方式
[0016]以下结合附图和实施例对本专利技术进行详细描述。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本专利技术所限定的范围。
[0017]实施例1
[0018]食鹿角菜假交替单胞菌A1(Pseudoalteromonas carrageenovora)的采集：
[0019]将新鲜海带样品20克，用无菌的剪刀，剪成小块，加入到装有30mL 灭菌的生理盐水(0.9％，NaCl)的三角瓶中，在25℃、150r/min条件下振荡3个小时。从三角瓶中吸取1毫升的溶液，加入到9毫升的无菌的生理盐水试管中，依次进行10倍系列稀释，涂布在2216E固体培养基(蛋白胨5g/L，酵母粉1g/L，琼脂粉20g/L，过滤海水配制，pH 7.6
‑
7.8。)， 25℃培养7天，根据菌落形态、颜色等特征挑取不同单菌落到2216E固体培养基，划线纯化培养，直至得到单一的纯菌落。将所有分离的菌株再点接种到褐藻胶裂解酶筛选培养基(褐藻酸钠20g/L，蛋白胨5g/L，酵母粉 1g/L，琼脂粉20g/L过滤海水配制，pH 7.0。)平板上培养3天。加入10％氯化钙溶液，静置20
‑
30分钟后，观察是否有透明圈出现。如果出现透明圈，表示该菌株能产生褐藻酸钠裂解酶，透明圈越大，表示酶活越高。共筛选到6株具有褐藻酸钠裂解酶的菌株，其中菌A1的酶活最高。
[0020]实施例2
[0021]食鹿角菜假交替单胞菌A1(Pseudoalteromonas carrageenovora)的鉴定：
[0022]采用细菌基因组DNA提取试剂盒(Takara)提取A1菌株的 DNA，以27F(5
’‑
AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
‑3’
)和1541R(5
’‑ꢀ
AAGGAGGTGATCCAGCCGCA
‑3’
)为引物，PCR扩增得到16S rRNA基因。PCR反应体系为40μL，其中含1μL 27F，1μL 1541R，2
×
Mix 20μL， ddH2O 16μL。反应条件为94℃预变性5min之后，94℃1min，55℃1min， 72℃1.5min，30次循环，72℃延伸1.5min，冷却至8℃。PCR产物送至北京擎科生物有限公司，进行16S rRNA基因测序，经过与NCBI数据库序列比对，该菌株A1为Pseudoalteromonas属，同该属已发表种 Pseudoalteromonas carrageenovora相似性最高(99.9％)，因此该菌株为 Pseudoalteromonas carrageenovora，命名为食鹿角菜假交替单胞菌A1。
[0023]利用MEGA 7.0软件，以邻接法(neighbour
‑
joining)构建系统发育树，发现菌株A1 与Pseudoalteromonas carrageenovora聚类在一个分支上，表明菌株A1与 Pseudoalteromonas carrageenovora系统发育关系最近。
[0024]实施例3
[0025][0026]菌株分解海带的应用，具体步骤如下：
[0027]培养基配制：
[0028]2216E液体培养基(蛋白胨5g/L，酵母粉1g/L，过滤海水配制，pH 7.6
‑
7.8。)
[0029]制备种子液：从斜面接种A1菌株，到20毫升装有2216E液体培养基的三角瓶(100 毫升)中，25℃、150r/min条件下培养2天。
[0030]发酵培养：
[0031]干海带剪成2～3厘米直径的小块，加入到2216E液体培养基中，灭菌。接入种子液，发酵培养7
‑
10天。
[0032]实施例4
[0033]菌株发酵对海带细胞壁的破坏情况观察
[0034]经菌株发酵后的海带块呈糊状，取糊状残渣，用生理盐水清洗表面，经4％戊二醛溶液4℃固定2h后，用逐级浓度的乙醇脱水，每次10min，最后于100％乙醇中取出脱水的样品，纯本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分解海带的菌株，其特征在于，该菌株为食鹿角菜假交替单胞菌A1(Pseudoalteromonas carrageenovora)，该菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2021年3月30日...

【专利技术属性】
技术研发人员：张德超，耿丽华，张全斌，孙忠民，王晶，岳洋，吴宁，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：