更昔洛韦中杂质K的检测方法、及杂质的分离方法技术

本发明专利技术公开了一种更昔洛韦中杂质K的检测方法、及杂质的分离方法，其包括如下步骤：采用高效液相色谱检测含更昔洛韦的供试品溶液；所述高效液相色谱采用的色谱柱为阳离子交换色谱柱，流动相包括流动相A和流动相B，流动相A为含0.012M磷酸二氢铵的磷酸水溶液；所述磷酸水溶液中，所述磷酸的体积百分比为0.12％；流动相B为乙腈，结合特定洗脱方式下，该方法不仅能实现杂质K的有效分离和检测，且其他已知杂质洗脱完全，有助于色谱柱寿命。有助于色谱柱寿命。有助于色谱柱寿命。

【技术实现步骤摘要】
更昔洛韦中杂质K的检测方法、及杂质的分离方法


[0001]本专利技术涉及一种更昔洛韦中杂质K的检测方法、及杂质的分离方法。

技术介绍

[0002]更昔洛韦是一种核苷类抗病毒药，其已知含有杂质A、B、C、D、E、F、H、I、J、L、M、N、R，这些杂质的具体结构如下：
[0003][0004][0005][0006]其中，杂质K为可能的降解杂质，在有关物质条件下与更昔洛韦峰难以实现分离。因此有必要单独建立方法对杂质K控制，并同时将其它已知杂质洗脱下来，以免造成色谱柱中其它杂质残留，影响后续操作和色谱柱寿命。但目前对于更昔洛韦的有关物质检测方法中，可以同时实现杂质K的分离检测并将所有已知杂质洗脱完全的方法，尚未见报道。

技术实现思路

[0007]本专利技术要解决的技术问题是为了克服现有技术中对更昔洛韦的有关物质检测中尚无同时实现杂质K分离且其他已知杂质洗脱完全的方法的缺陷，而提供了一种更昔洛韦中杂质K的检测方法、及杂质的分离方法。
[0008]本专利技术在研究过程中，专利技术人根据更昔洛韦的合成工艺路线，结合更昔洛韦原料药国内外药典有关物质的控制情况，对更昔洛韦原料的杂质进行全面分析，按照杂质分析结果，对已知杂质A、B、C、D、E、F、H、I、J、L、M、N、R进行研究，通过重现更昔洛韦国内外主要药典及注射用更昔洛韦进口注册标准的有关物质方法，结果发现，重现欧洲药典第9.6版(EP9.6)中更昔洛韦质量标准，杂质K与主峰未分开，影响样品检测；重现中国药典2015年版(ChP2015)中更昔洛韦质量标准，并未能洗脱所有杂质，容易造成色谱柱中杂质残留，影响色谱柱寿命；重现注射用更昔洛韦进口质量标准(标准号：JX20110078)，未能洗脱所有杂质，这样容易造成色谱柱中杂质残留，影响色谱柱寿命。
[0009]本专利技术是通过下述技术方案来解决上述技术问题：
[0010]一种更昔洛韦中杂质K的检测方法，其包括如下步骤：采用高效液相色谱检测含更昔洛韦的供试品溶液；
[0011]所述高效液相色谱采用的色谱柱为阳离子交换色谱柱；
[0012]所述高效液相色谱的洗脱方式如下：
[0013][0014]其中，
[0015]上述％是指体积百分比；
[0016]流动相A为含0.012M磷酸二氢铵的磷酸水溶液；所述磷酸水溶液中，所述磷酸的体积百分比为0.12％，％是指磷酸的体积占所述磷酸水溶液的体积的百分比；
[0017]流动相B为乙腈。
[0018]本专利技术中，所述更昔洛韦按照本领域常规理解可包括更昔洛韦原料药和/或注射用更昔洛韦。
[0019]本专利技术中，所述杂质K的化学名称为：1,9
‑
二氢
‑2‑
氨基
‑9–
[(2
‑
羟基乙氧基)甲基]‑
6H
‑
嘌呤
‑6‑
酮，结构式如下：
[0020][0021]本专利技术中，所述高效液相色谱中，采用的色谱柱为阳离子交换色谱柱，较佳地为SCX强阳离子交换柱，更佳地为C18色谱柱。
[0022]其中，所述C18色谱柱的规格较佳地为柱长250mm
×
内径4.6mm；所述C18色谱柱的填料粒径较佳地为5μm。
[0023]例如：所述C18色谱柱的型号为月旭AQ
‑
C18，规格为250
×
4.6mm,5μm。
[0024]本专利技术中，所述高效液相色谱中，检测波长可为本领域常规，例如254
±
2nm。
[0025]本专利技术中，所述高效液相色谱中，流动相的流速可为本领域常规，例如1.0
±
0.05ml/min。
[0026]本专利技术中，所述高效液相色谱中，色谱柱的柱温可为本领域常规，例如25
±
10℃。
[0027]本专利技术中，所述高效液相色谱中，所述供试品溶液中更昔洛韦的质量浓度可为本领域常规，例如0.3
±
0.02mg/ml，其中，mg/ml是指更昔洛韦的质量占供试品溶液的体积的比。
[0028]本专利技术中，所述高效液相色谱中，所述供试品溶液中用于溶解更昔洛韦的溶剂可为本领域常规，较佳地，所述溶剂为所述流动相A；
[0029]所述供试品溶液可按照本领域常规的配置方法进行配置，例如，配置方法如下：将约15mg更昔洛韦置于50ml量瓶中，加所述流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0030]所述流动相A由以下方法制备得到：取磷酸二氢铵约1.38g，加水500ml，然后加磷酸1.2ml溶解，用水稀释至1000ml。
[0031]本专利技术还提供一种更昔洛韦中杂质的分离方法，其包括如下步骤：采用高效液相色谱检测含更昔洛韦的供试品溶液；
[0032]所述高效液相色谱采用的色谱柱为阳离子交换色谱柱；
[0033]所述高效液相色谱的洗脱方式如下：
[0034][0035][0036]其中，
[0037]上述％是指体积百分比；
[0038]流动相A为含0.012M磷酸二氢铵的磷酸水溶液；所述磷酸水溶液中，所述磷酸的体积百分比为0.12％，％是指磷酸的体积占所述磷酸水溶液的体积的百分比；
[0039]流动相B为乙腈。
[0040]本专利技术中，所述色谱柱、检测波长、流动相的流速、色谱柱的柱温、供试品的质量浓度、供试品的溶剂均如前所述。
[0041]在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本专利技术各较佳实例。
[0042]本专利技术所用试剂和原料均市售可得。
[0043]本专利技术的积极进步效果在于：
[0044]1)本专利技术提供的更昔洛韦中杂质K的检测方法、及杂质的分离方法，优势在于，可实现单独检测杂质K(线性范围可达0.02μg/ml～0.30μg/ml，检测限可达0.006μg/ml)，保证杂质K与相邻峰分离度，且能满足所有杂质在梯度条件下洗脱完全，不至于污染色谱柱。
[0045]2)本专利技术的方法，在给定的条件下，空白不干扰杂质K检测，系统适用性溶液中杂质K与其前相邻杂质峰间的分离度符合要求，所有待测物质均在本专利技术的方法中洗脱出来，该方法可行。且经试验验证，该方法回收率高(103.99％～107.66％)、各降解条件下不干扰、方法耐用、稳定、重复性良好、精密度良好。
附图说明
[0046]图1为效果实施例中专属性试验中将实施例1的方法对混合对照品溶液进行检测的高效液相色谱图。
[0047]图2为对比例1的检测方法获得的高效液相色谱图。
[0048]图3为对比例2的检测方法获得的高效液相色谱图。
[0049]图4为对比例3的检测方法获得的高效液相色谱图。
具体实施方式
[0050]下面通过实施例的方式进一步说明本专利技术，但并不因此将本专利技术限制在所述的实
施例范围之中。
[0051]以下实施例和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种更昔洛韦中杂质K的检测方法，其特征在于，其包括如下步骤：采用高效液相色谱检测含更昔洛韦的供试品溶液；所述高效液相色谱采用的色谱柱为阳离子交换色谱柱；所述高效液相色谱的洗脱方式如下：其中，上述％是指体积百分比；流动相A为含0.012M磷酸二氢铵的磷酸水溶液；所述磷酸水溶液中，所述磷酸的体积百分比为0.12％，％是指磷酸的体积占所述磷酸水溶液的体积的百分比；流动相B为乙腈。2.如权利要求1所述的更昔洛韦中杂质K的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为SCX强阳离子交换柱，较佳地为C18色谱柱；其中，所述C18色谱柱的规格较佳地为柱长250mm
×
内径4.6mm；所述C18色谱柱的填料粒径较佳地为5μm。3.如权利要求2所述的更昔洛韦中杂质K的检测方法，其特征在于，所述C18色谱柱的型号为月旭AQ
‑
C18，规格为250
×
4.6mm,5μm。4.如权利要求1所述的更昔洛韦中杂质K的检测方法，其特征在于，所述流动相A由以下方法制备得到：取磷酸二氢铵约1.38g，加水500ml，然后加磷酸1.2ml溶解，用水稀释至1000ml。5.如权利要求1所述的更昔洛韦中杂质K的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱中，检测波长为254
±
2nm。6.如权利要求1所述的更昔洛韦中杂质K的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱中，流动相的流速为1.0
±
0.05ml/min。7.如权利要求1所述的更昔洛韦中杂质K的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱中，色谱柱的柱温为25
±
10℃。8.如权利要求1所述的更昔洛韦中杂质K的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液中更昔洛韦的质量浓度为0.3
±
0.02mg/ml，其中，mg/ml是指更昔洛韦的质量占供试品溶液的体积的比。9.如权利要求1所述的更昔洛韦中杂质K...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏立林，姚萍，余艳平，刘均均，柳少群，陈龙，龚丹凤，范昭泽，胡仁军，
申请(专利权)人：武汉九州钰民医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：