一种以干扰素-α为活性成分的双功能药物前体制造技术

本发明专利技术提供了一种以干扰素

【技术实现步骤摘要】
一种以干扰素-α
为活性成分的双功能药物前体


[0001]本专利技术属于是生物医药领域，具体地本专利技术涉及一种以干扰素-α为活性成分的双功能药物前体。

技术介绍

[0002]IFNs是一类重要的细胞因子，具有高活性、广谱的抗细胞增殖、抗病毒、提高免疫调节和高效的抗肿瘤等作用。经10多年的临床应用研究结果表明，干扰素是一种重要的抗病毒和抗肿瘤的治疗药物。迄今所知，包括人源在内的多种哺乳动物干扰素，根据其基因序列、染色体定位和受体特异性等特点可分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型IFNs。
[0003]国内已上市的IFN-α产品分为两大类：普通干扰素，包括：rhIFN-α(1b，2a，2b)；长效干扰素，主要由外资把控，包括：罗氏的PEG-IFN-α-2a和默沙东的PEG-IFN-α2b。普通干扰素在体内半衰期短，仅4个小时，为了保证能维持一定的治疗浓度需要每周注射3次。PEG长效干扰素将干扰素的半衰期提升至40小时，用药频率从每周三次提升至每周一次。另外，除了PEG化，还可以将IFN与Fc融合，在FcRn的保护下，半衰期可以长达14天以上。但是，由于IFN-R的广谱性表达，单纯地延长IFN的半衰期，会增加IFN对机体的毒副作用，造成安全隐患。
[0004]然而单独抑制PD-1/PD-L1信号通路往往导致耐药性增加。
[0005]增加IFN的靶向性可以通过双功能抗体的技术来实现。双功能抗体是一个新兴的抗体药物研发领域，被视为肿瘤治疗的新策略，极具广阔的应用前景。其核心意义在于，含有两种结合位点，能在靶细胞和功能分子之间架起桥梁，产生靶向性的效应功能。在肿瘤治疗领域，由于IFN受体(IFNR)广谱表达于正常组织，中/高剂量的IFN会诱发严重的副反应，如：流感样症状、抑郁症、贫血、白细胞减少等症状，使IFN在肿瘤治疗领域的使用受限。
[0006]然而与单克隆抗体相比，双功能抗体在其技术和产业化上仍存在一定的技术难点。需要在产量、纯化难度、半衰期、稳定性、与抗原结合等核心性质进行突破。
[0007]还有，双功能抗体因其结构相比普通抗体做了较大的改构，如：分子量增大、不对称结构等，对下游表达与纯化工艺带来的极大的困难。另外，早期双功能抗体的结合活性评估尤为重要，与靶向位点结合过强，会影响双抗药物分布，如过强的CD3结合能力会导致T细胞参与的双抗(T cell-engaging bsAb,bsTCE)富集在脾脏、淋巴结而到不了靶点组织。并且双功能抗体，因其分子量增大，对表达系统也有一定的挑战。
[0008]因此，本领域迫切需要开发一种具有活性一致、特异性强或副反应小的优点的新型多靶点、高效的抗肿瘤和免疫调节药物。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的在于提供一种具有活性一致、特异性强或副反应小的优点的新型多靶点、高效的抗肿瘤和免疫调节药物。
[0010]本专利技术的第一方面，提供了一种重组双功能融合蛋白，所述重组双功能融合蛋白
包含：
[0011]第一结构单元(D1)；和
[0012]第二结构单元(D2)；
[0013]其中，所述第一结构单元特异性结合靶分子肿瘤细胞标志物蛋白；
[0014]所述第二结构单元包括干扰素，
[0015]并且，所述D2从N-C端具有式I或式I
’
所示的结构：
[0016]Z1-L-Z2(式I)或
[0017]Z2-L-Z1(式I
’
)
[0018]其中，Z1为干扰素或其活性片段；
[0019]L为第一连接元件；
[0020]Z2为干扰素受体或其活性片段；
[0021]“-”
表示连接上述元件的肽键或肽接头。
[0022]在另一优选例中，所述肿瘤细胞标志物选自下组：PD-L1、EGFR、PSMA、GPC3、GD2、HER2、Mesothelin(MSLN)、CEA、、Claudin18.2、Mucin 1(MUC1)、NKG2D配体、CD19、CD20、BCMA、CD22、CD30、IL3RA、CD38、CD138、或其组合。
[0023]在另一优选例中，所述干扰素包括干扰素α。
[0024]在另一优选例中，所述干扰素选自下组：IFNα1，IFNα2(包括IFNα2a，IFNα2b，IFNα2c)、IFNα4、IFNα5、IFNα6、IFNα7、IFNα8，IFNα10，IFNα13、IFNα14、IFNα17、IFNα21、IFNβ、IFNε、IFNκ、IFNω、IFNδ、IFNτ、或其组合，优选IFNα2b。
[0025]在另一优选例中，所述D1和D2之间通过第二连接元件相连。
[0026]在另一优选例中，所述第二连接元件具有如下结构：-(Gly-Gly-Gly-Ser)n-，其中，n为1-5，较佳地，1-3。
[0027]在另一优选例中，所述D1为特异性结合肿瘤细胞标志物蛋白的抗体或抗体片段。
[0028]在另一优选例中，所述D1为特异性结合PD-L1蛋白的抗体或抗体片段。
[0029]在另一优选例中，所述抗体片段包括Fd片段。
[0030]在另一优选例中，所述融合蛋白还包括额外的Fc片段。
[0031]在另一优选例中，所述D2与D1的重链恒定区的末端或所述融合蛋白的Fc片段的末端相连。
[0032]在另一优选例中，所述Fc片段来源于人或非人哺乳动物，更佳地来源于啮齿动物(如小鼠、大鼠)、灵长动物和人。
[0033]在另一优选例中，所述Fc片段为免疫球蛋白IgG的Fc片段，较佳地为IgG1的Fc部分。
[0034]在另一优选例中，所述Fc片段包括天然的Fc片段及Fc突变体。
[0035]在另一优选例中，所述的Fc片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.:1所示。
[0036]在另一优选例中，所述的Z1、L、Z2中的任何两者以头-头、头-尾、尾-头或尾-尾方式相连。
[0037]在另一优选例中，所述的“头部”指多肽或其片段的N端，尤其是野生型多肽的或其片段的N端。
[0038]在另一优选例中，所述的“尾部”指多肽或其片段的C端，尤其是野生型多肽的或其
片段的C端。
[0039]在另一优选例中，所述干扰素来源于人或非人哺乳动物。
[0040]在另一优选例中，所述的干扰素包括野生型和突变型。
[0041]在另一优选例中，所述的干扰素包括全长的、成熟形式的干扰素，或其活性片段。
[0042]在另一优选例中，所述干扰素的序列如SEQ ID NO.:2所示。
[0043]在另一优选例中，所述干扰素受体包括IFNαRA2、IFNαRA1。
[0044]在另一优选例中，所述干扰素受体来源于人或非人哺乳动物，更佳地来源于啮齿动物(如小鼠、大鼠)、灵长动物和人。
[0045]在另一优选例中，所述干扰素受体包括野生型和突变型。
[0046]在另一优选例中，干本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组双功能融合蛋白，其特征在于，所述重组双功能融合蛋白包含：第一结构单元(D1)；和第二结构单元(D2)；其中，所述第一结构单元特异性结合靶分子肿瘤细胞标志物蛋白；所述第二结构单元包括干扰素，并且，所述D2从N-C端具有式I或式I
’
所示的结构：Z1-L-Z2
ꢀꢀ
(式I)或Z2-L-Z1
ꢀꢀ
(式I
’
)其中，Z1为干扰素或其活性片段；L为第一连接元件；Z2为干扰素受体或其活性片段；
“-”
表示连接上述元件的肽键或肽接头。2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述第一连接元件包括酶切位点。3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，它编码如权利要求1所述的重组双功能融合蛋白。4.一种载体，其特征在于，它含有权利要求3所述的多核苷酸。5.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求4所述的载体，或其基因组中整合有权利要求3所述的多核苷酸。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：吴其威，
申请(专利权)人：苏州泽璟生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：