一种用于选育羊多胎品系的试剂盒和方法技术

本发明专利技术涉及包含SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示引物对的用于选育羊多胎品系的试剂盒，还涉及选育羊多胎品系的方法。本发明专利技术试剂盒及方法大大提高了目的DNA的含量和相对特异性，而且方法简便，重复性好，分型时间短，大大降低了检测成本，有广泛的应用前景。有广泛的应用前景。有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种用于选育羊多胎品系的试剂盒和方法


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种用于选育羊多胎品系的试剂盒和方法

技术介绍

[0002]藏羊又称藏系羊，这种羊具有抗严寒、耐粗饲、适应高海拔、体质强壮、行动敏捷、善于爬高走远的特点，但发育成熟晚。藏羊是我国三大原始绵羊品种之一，主要分布在青藏高原，青海是主要产区。分布广，家畜中比重最大。依其生态环境，结合生产、经济特点，可分为高原型、山谷型和欧拉型3类。高原型占全省的90％，是藏羊的主体，主要分布在高寒牧区。
[0003]羊多胎研究的分子生物技术主要有RAPD、PCR
‑
RFLP、PCR
‑
SSCP、Taqman探针法和SNaPshot检测方法。RAPD重复性不好；PCR
‑
SSCP染色方法为EB染色、银染、放射性自显影，缺点在于，分析片段不能太长，片段太长检出效率降低；传统技术步骤繁琐，要进行转移、杂交等步骤，传统EB染料(溴化乙锭)、聚丙烯酰胺、DEPC等试剂具有一定毒性，污染环境和危害人体健康，大批量检测成本太高；TaqMan方法价格高，只适合特定目标。
[0004]通过分子生物技术研究发现，FecB基因是在绵羊中识别出的第一个高繁殖力主效基因。近年来研究发现湖羊存在FecB基因，即BM PR
‑
IB基因突变。但是还没有关于藏羊的FecB基因研究，更没有利用FecB基因选育藏羊多胎品系的研究。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种用于选育羊多胎品系的的引物对，它是SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的引物对。
[0006]本专利技术还提供了SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的引物对在制备选育羊多胎品系的试剂中的用途。
[0007]进一步地，所述试剂是检测FecB基因外显子8的试剂。
[0008]进一步地，所述羊包括黑山羊、小尾寒羊、岩羊、湖羊、藏羊、盘羊、绵羊、羚羊、山羊、青羊，优选藏羊。
[0009]本专利技术还提供了一种用于选育羊多胎品系的试剂盒，它是检测FecB基因外显子8第161位碱基序列的试剂。
[0010]更进一步地，它是检测FecB基因外显子8第161位碱基序列为GG纯合子、GA杂合子的试剂。
[0011]更进一步地，它是PCR检测试剂，优选地包括SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的引物对。
[0012]进一步地，它还包括Taq DNA聚合酶、Mg
2+
buffer和dNTP。
[0013]本专利技术还提供了一种前述的试剂盒在用于选育羊多胎品系中的用途。
[0014]本专利技术最后提供了一种选育羊多胎品系的方法，它包括如下步骤：
[0015](1)提取样本DNA：取待检组织，提取其中的DNA；
[0016](2)基因扩增：用前述的试剂盒对待检样本中的DNA进行扩增；
[0017](3)酶切反应：用特异性内切酶消化切割步骤2)所得扩增产物；所述特异性内切酶为Avall酶；
[0018](4)结果检测：用2％的琼脂糖凝胶检测步骤3)所得酶切产物的片段大小；
[0019]其中，所述待检组织为羊耳缘组织。
[0020]进一步地，所述片段大小含136bp为FecB基因外显子8的携带者，所述携带者为羊多胎品系。
[0021]本专利技术具有如下有益效果：
[0022]本专利技术以藏羊基因组DNA序列为模板，通过设计特异性强的引物序列，扩增FecB基因外显子8，大大提高了目的DNA的含量和相对特异性，而且方法简便，摒弃传统的EB染料，采用稳定性高、灵敏度高、绿色安全无毒的GelRed核酸染料，重复性好，分型时间短，大大降低了检测成本，有广泛的应用前景。
[0023]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0024]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0025]图1琼脂糖凝胶电泳图
具体实施方式
[0026]实施例1本专利技术用于选育羊多胎品系的试剂盒和检测方法
[0027]一、本专利技术试剂盒成分
[0028]包含SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的引物对和SEQ ID NO.3所示的探针；如表1所示：
[0029]表1本专利技术引物
[0030]编号引物SEQ ID NO.1F:5
’‑
TCAGATGGTGAAACAGATTGGAAAA
‑3’
SEQ ID NO.2R:5
’‑
GTTTTCATGCCTCATCAACACCGTC
‑3’
[0031]注：F为5
’
端引物，R为3
’
端引物。
[0032]经过筛选，只有采用本专利技术引物才能有效扩增，采用别的引物无法有效扩增。
[0033]二、采用本专利技术试剂盒检测羊多胎品系
[0034]1、DNA提取
[0035](1)取绿豆大小耳组织，滤纸吸干酒精，放入1.5mL的EP管充分剪碎，加入1mL无菌水，洗涤酒精，13000rpm，3min离心弃水，重复三次。
[0036](2)加入450μL的TE裂解液和50μL 10％SDS，15μL PK，56℃消化直至组织溶解(约6个小时或者过夜)。
[0037](3)吸取上清液约500μL后加入500μL 5M NaCl溶液和300μL氯仿，颠倒混用15min。
[0038](4)12000rpm离心10min，取上清700μL
[0039](5)加入氯仿700μL，混用15min，12000rpm离心10min，取上清500μL
[0040](6)加入1000μL的冰异丙醇，4μL 5M NaCl，混匀
‑
20℃静止1h，12000rpm离心10min弃异丙醇
[0041](7)加入100μL 70％冰乙醇洗涤，重复3次
[0042](8)自然干燥(或者超净工作台通风干燥)加入30μL ddH2O，获得藏羊基因组DNA。
[0043]也可用等效商品化试剂盒提取DNA。
[0044]2、DNA浓度和纯度的测定
[0045]使用核酸蛋白分析仪检测DNA浓度及纯度，DNA浓度在10ng/μL～100ng/μL之间，A260/A280值在1.8～2.0之间时，适宜于本方法。
[0046]3、扩增FecB基因外显子8
[0047]以藏羊基因组DNA为模板，在Taq DNA聚合酶、Mg
2+
buffer、dNTP存在的情本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于选育羊多胎品系的的引物对，其特征在于：它是SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的引物对。2.SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的引物对在制备选育羊多胎品系的试剂中的用途。3.根据权利要求2所示的用途，其特征在于：所述试剂是检测FecB基因外显子8的试剂。4.根据权利要求2所示的用途，其特征在于：所述羊包括黑山羊、小尾寒羊、岩羊、湖羊、藏羊、盘羊、绵羊、羚羊、山羊、青羊，优选藏羊。5.一种用于选育羊多胎品系的试剂盒，其特征在于：它是检测FecB基因外显子8第161位碱基序列的试剂。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：它是检测FecB基因外显子8第161位碱基序列为GG纯合子、GA杂合子的试剂。7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于：它是PCR检测试剂，优选地包括SEQ ID NO.1、SEQ ID N...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩步鹰，赵凯，田得红，刘思嘉，李雪，丁宁，刘德会，田菲，
申请(专利权)人：中国科学院西北高原生物研究所，
类型：发明
国别省市：