子宫内膜癌检测的试剂及试剂盒制造技术

本申请提供一种子宫内膜癌检测的试剂及试剂盒，通过特异性检测DNA样本中CADPS基因CpG岛中CpG二核苷酸位点的甲基化水平，来进行子宫内膜癌或癌前的诊断，对于I型或II型子宫内膜癌均具有较高的灵敏性和特异性；此外该试剂在组织样本、宫颈脱落细胞样本和血浆样本中均具有较好的检测效果，可用于子宫内膜癌的无创或微创检测。创或微创检测。

【技术实现步骤摘要】
子宫内膜癌检测的试剂及试剂盒


[0001]本申请涉及生物医药
，具体涉及一种子宫内膜癌的诊断的试剂及试剂盒。

技术介绍

[0002]子宫内膜癌(endometrial cancer)是由子宫内膜细胞异常增殖而来的一种子宫内膜上的上皮性肿瘤，也是发病率较高的女性生殖系统恶性肿瘤，对全世界女性的健康造成了严重威胁。
[0003]子宫内膜癌多发生在绝经后的女性中，其可能的原因是绝经后雌激素的分泌水平不稳定，此外，吸烟、高血压、超重和遗传性疾病等都可能导致癌症的发生。子宫内膜癌主要由两种类型组成，I型：多发生于处于绝经期或绝经前期的女性，并多有暴露于无拮抗的内源性或外源性雌激素的病史，与女性雌激素过多症有明显的相关性，如肥胖、无卵性的子宫出血、不孕症、多囊卵巢综合征、绝经后期和子宫内膜增生，是最常见的类型的子宫内膜癌，可达80％
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85％，多为子宫内膜样癌，肿瘤分化程度较好，恶性程度一般较低，对孕激素类药物敏感，预后较好，5年生存率约为74％。II型：非雌激素依赖型，多发生于萎缩的子宫内膜中，形态学表现为低分化癌，多为浆液性乳头状廇、透明细胞癌等少见肿瘤，该类型肿瘤属高度恶性肿瘤，已发生深肌层浸润，预后比较差，5年的生存率在27％
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42％。子宫内膜癌从癌前病变到癌症有时会经历长达5
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8年的潜伏期，若不经过治疗，近50％的癌前病变最终会发展成子宫内膜癌。在中国，子宫内膜癌患者的五年相对生存率总体上在55％左右。生存率大小与癌症分期有关，FIGO分期I/>‑
II期的患者五年生存率在74％
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91％之间，III期在57％
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66％之间，IV期在20％
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26％之间，因此，早诊早治是提高生存率的关键。
[0004]当前的子宫内膜癌的诊断主要是根据受试者的病史、临床检查、病理检查及各种辅助检查结果确定诊断及临床分期，主要检测方法包括：B超检查、诊断性刮宫、宫腔镜检查和淋巴造影，这些方法存在检出率不高、容易给病人造成严重的生理上的痛苦等缺点，因此开发灵敏性和特异性均较高且取材微创/无创的子宫内膜癌检测方法意义重大。

技术实现思路

[0005]本申请提供一种子宫内膜癌的检测试剂及试剂盒，可以用于子宫内膜癌检测或辅助诊断，具有良好的灵敏性和特异性。
[0006]第一方面，本申请提供一种子宫内膜癌检测的试剂，所述试剂包括：能够特异性检测DNA样本中靶核苷酸序列中的至少一个CpG二核苷酸位点甲基化水平的检测试剂，所述靶核苷酸序列源自CADPS基因CpG岛的全长或部分区域，其中所述部分区域至少包括一个CpG二核苷酸位点。
[0007]在一些实施例中，所述CADPS基因CpG岛的核苷酸序列包括SEQ ID NO.22及SEQ ID NO.23所示核苷酸序列中的一种或两种。
[0008]在一些实施例中，所述部分区域的核苷酸序列包括SEQ ID NO.24至SEQ ID NO.29
所示核苷酸序列中的至少一种。
[0009]在一些实施例中，所述试剂包括：PCR试剂，所述PCR试剂包括能检测所述靶核苷酸的甲基化水平的特异性引物对和/或特异性探针。
[0010]在一些实施例中，所述引物对包括如下引物对中的任一组：
[0011]SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的组合；
[0012]SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5的组合；
[0013]SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8的组合；
[0014]SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11的组合；
[0015]SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14的组合；和/或
[0016]SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.17的组合。
[0017]在一些实施例中，所述特异性探针选自：SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.15和/或SEQ ID NO.18中的至少一种。
[0018]在一些实施例中，所述试剂包括：
[0019](c)反应试剂，能差异修饰所述DNA样本中的甲基化位点和非甲基化位点；以及
[0020](d)检测试剂，在用所述反应试剂处理DNA样本之后，所述检测试剂能通过甲基化检测方法确定所述靶核苷酸中的特定CpG二核苷酸位点中的胞嘧啶的甲基化水平。
[0021]在一些实施例中，所述反应试剂包括重亚硫酸盐或其衍生物；和/或，
[0022]所述甲基化检测方法包括：甲基化特异性PCR方法、亚硫酸氢盐测序法、全基因组甲基化测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字PCR法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法和甲基化敏感性限制性内切酶法。
[0023]在一些实施例中，所述DNA样本来自哺乳动物的离体生物学样本，所述哺乳动物的离体生物学样本来自血液、子宫内膜组织及子宫内膜的细胞样本中的至少一种。
[0024]第二方面，本申请还提供一种用于子宫内膜癌检测的试剂盒，包括第一方面所述的试剂。
[0025]有益效果：
[0026]本申请提供一种子宫内膜癌的检测和诊断的试剂及试剂盒，通过特异性检测DNA样本中CADPS基因CpG岛中CpG二核苷酸位点的甲基化水平，来进行子宫内膜癌或癌前病变的诊断，对于I型或II型子宫内膜癌均具有较高的灵敏性和特异性；此外在组织样本、宫颈脱落细胞样本和血浆样本中具有较好的检测效果，可用于子宫内膜癌的无创或微创检测。
具体实施方式
[0027]下面将结合本申请实施例，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。需说明的是，以下实施例的描述顺序不作为对实施例优选顺序的限定。另外，在本申请的描述中，术语“包括”是指“包括但不限于”。
[0028]专利技术人在研究过程中发现，CADPS基因CpG岛的甲基化水平与子宫内膜癌相关，并且经大量及长期的实验证明：检测CADPS基因CpG岛区域甲基化的增加可以对子宫内膜癌进行诊断或辅助诊断，具有较高的灵敏性和特异性。
[0029]鉴于此，本申请提供了一种用于子宫内膜癌检测的试剂。所述试剂包括：能够特异性检测DNA样本中靶核苷酸序列中的至少一个CpG(胞嘧啶
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磷酸
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鸟嘌呤)二核苷酸位点甲基化水平的检测试剂，所述靶核苷酸序列源自CADPS基因CpG岛的全长或部分区域，其中所述部分区域至少包括一个CpG二核苷酸位点。
[0030]术语“DNA甲基化水平”与一般理解相同，指的是一段DNA序列中一个或多个CpG二核苷酸中的胞嘧啶是否发生甲基化、或发生甲基化的频率/比例/百分数，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种子宫内膜癌检测的试剂，其特征在于，所述试剂包括：能够特异性检测DNA样本中靶核苷酸序列中的至少一个CpG二核苷酸位点甲基化水平的检测试剂，所述靶核苷酸序列源自CADPS基因CpG岛的全长或部分区域，其中所述部分区域至少包括一个CpG二核苷酸位点。2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述CADPS基因CpG岛的核苷酸序列包括SEQ ID NO.22及SEQ ID NO.23所示核苷酸序列中的一种或两种。3.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述部分区域的核苷酸序列包括SEQ ID NO.24至SEQ ID NO.29所示核苷酸序列中的至少一种。4.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述试剂包括：PCR试剂，所述PCR试剂包括能检测所述靶核苷酸的甲基化水平的特异性引物对和/或特异性探针。5.根据权利要求4所述的试剂，其特征在于，所述引物对包括如下引物对中的任一组：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的组合；SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5的组合；SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8的组合；SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11的组合；SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14的组合；和/或SEQ ID NO.16和S...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏雅婷，郭洪，王方媛，郑义慧，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：