猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段及其应用和试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段及其应用和试剂盒，所述猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段是对圆环病毒4型Cap蛋白氨基酸序列进行分析，进一步与猪圆环病毒1

【技术实现步骤摘要】
猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段及其应用和试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物检测
，尤其涉及一种猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段及其应用和试剂盒。

技术介绍

[0002]猪圆环病毒(PCV)包括PCV1、PCV2、PCV3和PCV4四种基因型，其基因组为环状的单链DNA。PCV1对猪没有致病性，但可以在猪群中检测发现；PCV2可引起断奶仔猪的衰竭综合征；PCV3感染可导致母猪的皮炎综合征和繁殖障碍；而PCV4是近年来最新发现的一种猪圆环病毒，可能会引起猪呼吸道、消化道等多种疾病，且可能与猪皮炎与肾病综合征密切相关。近年来，PCV4已在我国多省份的猪群中检测发现，但目前针对PCV4的临床检测主要以针对病原(PCV4)的普通PCR和实时荧光PCR等核酸检测方法为主。但是，由于PCV4的致病机制尚不明确，且针对主要以血液或血清为主的临床样品，核酸检测具有一定的局限性，而血清学检测方法更适用于于血液或血清样品的检测。
[0003]目前，PCV4病毒尚未成功分离，且无商品化疫苗进行免疫，因此，血清学检测为阳性即可判断PCV4感染。若仅考虑PCV4特异性检测，虽然也能对该病毒检测，但是其并未针对性的考虑到检测的反应灵敏度。而在病毒检测方法中，反应灵敏度也是一个重要的考察标准，所以，在临床检测中需要一种兼顾特异性及反应灵敏度的血清学检测手段，以对该病毒能够在现场更快速、更加精准的检测。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在解决现有技术中存在的技术问题。为此，本专利技术提供一种猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段及其应用和试剂盒，目的是兼顾PCV4流行病学检测的特异性及反应灵敏性，且检测快速，相对更加精准。
[0005]基于上述目的，本专利技术提供了一种猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段，所述猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段是通过对圆环病毒4型Cap蛋白氨基酸序列的分析，依次经同源性筛选及猪圆环病毒4型阳性血清反应筛选得到，所述猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0006]本专利技术还提供所述猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段在制备检测猪圆环病毒4型抗体检测试剂盒中的应用。
[0007]本专利技术还提供所述猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段在制备检测疫苗免疫后猪血清中猪圆环病毒4型抗体的试剂盒中的应用。
[0008]本专利技术还提供所述猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段在制备诊断猪圆环病毒4型疾病的试剂盒中的应用。
[0009]本专利技术还提供一种猪圆环病毒4型抗体检测试剂盒，所述检测试剂盒包括包被猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段的ELISA酶标板、阴性对照血清、阳性对照血清、样品稀释液、封闭液、洗涤液、酶标二抗液、显色液和反应终止液；所述猪圆环病毒4型Cap蛋白检测
优势肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0010]优选的，所述试剂盒还包括ELISA包被液，所述ELISA包被液能够有效活化抗原，充分暴露抗体识别的抗原决定簇，所述ELISA包被液的制备方法为：取NaCO
3 1.59g，NaHCO
3 2.93g溶于1L蒸馏水中，调节pH＝9.6。
[0011]优选的，所述洗涤液的制备方法为：取NaCl 8g，KH2PO4 0.25g，Na2HPO4 2.13g，KCl 0.2g和吐温
‑
20 0.5mL，用去离子水定容至1L，调节pH值为7.4。
[0012]优选的，所述封闭液的制备方法为：取BSA 0.5g，酪蛋白0.025g定溶于10mL洗涤液中。
[0013]优选的，所述显色液(底物显色液)包括A液：柠檬酸21g溶于1L去离子水中，B液：磷酸氢二钠71.6g溶于1L去离子水中；使用前取4.86mLA液、5.14mLB液，加入邻苯二胺10mg混匀后加入37.5μl 30％H2O2。
[0014]优选的，所述反应终止液的制备方法为：在177.8mL的蒸馏水中加入22.2mL浓硫酸混匀得到。
[0015]所述阴性对照血清包括猪圆环病毒4型抗体阴性的猪血清，所述阳性对照血清包括猪圆环病毒4型抗体阳性的猪血清。
[0016]优选的，所述试剂盒中，当猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段包被的质量浓度为10μg/mL时，若OD
450
>0.332，判定结果为阳性。此种试剂盒，相对于仅考虑PCV4型特异性抗原筛选得到的试剂盒，反应灵敏度更高，精准度相对更高。
[0017]本专利技术的有益效果：
[0018]1、本专利技术通过兼顾特异性及反应灵敏度的筛选手段，得到的猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段为PCV4 Cap蛋白的一部分具有良好反应原性的氨基酸序列，具有良好反应原性，与PCV1、PCV2和PCV3其它猪圆环病毒不存在血清学交叉反应，可用于临床血清样品中PCV4的抗体检测，能够快速、特异、高通量、高灵敏度地用于PCV4血清学检测，能够实现猪场中PCV4的流行病学监测，也可以用于PCV4相关疫苗(包括未来可能在临床中应用的PCV4全病毒灭活疫苗、PCV4弱毒疫苗、PCV4病毒样颗粒相关疫苗、PCV4 Cap蛋白亚单位疫苗等所有能够产生PCV4 Cap蛋白特异性抗体的相关疫苗)免疫后猪血清中PCV4抗体滴度的检测和免疫效果的评价。具有良好的临床应用价值。
[0019]2、本专利技术通过猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段制备的试剂盒可用于大规模临床血清样品中PCV4抗体的检测，具有特异性好、灵敏度高、检测时间短、通量高等技术优势，具有重要的临床实用价值和广阔的市场应用前景。
具体实施方式
[0020]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本专利技术进一步详细说明。
[0021]需要说明的是，除非另外定义，本专利技术实施例使用的技术术语或者科学术语应当为本公开所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。“包括”或者“包含”等类似的词语意指出现该词前面的元件或者物件涵盖出现在该词后面列举的元件或者物件及其等同，而不排除其他元件或者物件。
[0022]实施例
[0023]PCV4型Cap蛋白检测优势肽段的筛选和应用
[0024]1、PCV4型Cap蛋白检测优势肽段的筛选
[0025]通过对圆环病毒4型Cap蛋白氨基酸序列的分析，筛选到3段与PCV1、PCV2和PCV3同源性较低的肽段，将合成的3个肽段分别包被酶标板；为筛选到检测灵敏度更高的优势肽段，同时将之前实验中筛选合成的特异性肽段(GHYDFKLKDFIPKGPGTIVNLYSLPFA)包被酶标板，使用PCV4阳性血清进一步筛选得到其中反应性较好的优势肽段为肽段2(筛选结果见表1)，其氨基酸序列为：SEQ ID NO.1
‑
INSNRTYSSTAIQLDGDYVGEGKNQT。此PCV4 Cap蛋白检测优势肽段氨基酸序列用于包被抗原的制备，进而得到的试剂盒能本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段，其特征在于，所述猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段是通过对圆环病毒4型Cap蛋白氨基酸序列的分析，依次经同源性筛选及猪圆环病毒4型阳性血清反应筛选得到，所述猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.权利要求1所述猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段在制备检测猪圆环病毒4型抗体检测试剂盒中的应用。3.权利要求1所述猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段在制备检测疫苗免疫后猪血清中猪圆环病毒4型抗体的试剂盒中的应用。4.权利要求1所述猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段在制备诊断猪圆环病毒4型疾病的试剂盒中的应用。5.一种猪圆环病毒4型抗体检测试剂盒，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李向东，连拯民，姚晓慧，朱振邦，刘盼娆，胡丹鹤，袁丽莉，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：