基于树突细胞的癌症疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种本发明专利技术涉及制备用于基于树突细胞的癌症疫苗的重组细胞和融合细胞的方法，其中重组细胞和融合细胞包含癌细胞的DNA。本发明专利技术还涉及包含肿瘤细胞基因组DNA的融合细胞、融合树突细胞和成纤维母细胞的方法、包含融合细胞的药物组合物和预防癌症的方法，包括向癌症患者施用融合细胞的有效量。包括向癌症患者施用融合细胞的有效量。包括向癌症患者施用融合细胞的有效量。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于树突细胞的癌症疫苗及其制备方法


[0001]本公开内容涉及本专利技术涉及通过向癌症施用包含由树突细胞和成纤维母细胞形成的融合细胞的疫苗来治疗和预防癌症的方法，所述融合细胞含有源自肿瘤细胞或癌前细胞的基因组DNA病人；以及树突细胞和成纤维母细胞的融合细胞。

技术介绍

[0002]免疫治疗组合物，包括疫苗，是医疗保健行业可用于预防和治疗疾病的最具成本效益的措施之一。然而，仍然迫切需要为各种疾病开发安全有效的免疫治疗策略和佐剂，包括由病原体、癌症、遗传缺陷和其他免疫系统疾病引起的疾病。为了治疗癌症和许多传染病，包括病毒性疾病和由细胞内病原体引起的疾病，需要提供引发细胞介导(细胞)免疫反应的免疫疗法，尽管许多疫苗主要或完全针对引发体液免疫。事实上，许多亚单位疫苗以及许多灭活或减毒病原体疫苗的缺点是，虽然它们似乎刺激了强烈的体液免疫反应，但它们不能引发保护性细胞介导的免疫。
[0003]癌症的主要特征是来自给定正常组织的异常细胞数量增加，这些异常细胞侵入邻近组织，以及恶性细胞通过淋巴或血液传播到区域淋巴结和远处部位(转移)。临床数据和分子生物学研究表明，癌症是一个多步骤过程，从微小的肿瘤前变化开始，在某些情况下可能会发展为肿瘤。因此，在这个多步骤过程的进展过程中，癌前细胞积累了至少一个遗传等位基因，可将癌前细胞与正常细胞区分开来。这种遗传差异可导致肿瘤特异性抗原的表达、正常细胞蛋白的过度表达和/或正常和/或肿瘤特异性抗原的细胞分布改变。在某些情况下，这些改变可能导致细胞表面表达改变的细胞表面蛋白或通常不会转运到细胞表面的正常蛋白。
[0004]已经报导了许多免疫疗法研究比较靶向相同抗原的疫苗平台，就其诱导免疫细胞活性和抗肿瘤作用的能力而言。
[0005]树突细胞是有效的抗原呈递细胞，最近已被用作癌症免疫治疗的佐剂。据Gong等人报导，接种与肿瘤细胞融合的树突状细胞在小鼠中诱导了抗肿瘤免疫(Gong等，1997，同上)。还报导了将树突细胞与肿瘤细胞融合的成功临床应用(Kugler等，2000，Nat Med 6,332
‑
336)先前已证明B细胞或树突细胞与肿瘤细胞的融合可在动物模型中引发抗肿瘤免疫反应。特别是，已证明用肿瘤细胞和抗原呈递细胞的杂交体进行免疫可在各种囓齿动物模型中产生保护性免疫。
[0006]然而，获得和培养活的肿瘤组织或细胞以提取癌细胞的基因组DNA是困难和昂贵的。截至目前，尚未满足开发癌症疫苗以对患有癌症的患者进行经济有效治疗的需求。

技术实现思路

[0007]本公开内容涉及一种预防癌症的方法，包括向需要所述有效量的融合细胞的哺乳动物施用，其中所述融合细胞是通过融合树突细胞和成纤维母细胞而形成的，并且其中所述成纤维母细胞细胞展示至少一种对癌症具有特异性的抗原。成纤维母细胞包含癌细胞的
基因组DNA。在一些实施方案中，基因组DNA分离自癌细胞或石蜡包埋的肿瘤组织。树突细胞和成纤维母细胞是哺乳动物自体的。
[0008]本专利技术的方法进一步包括向哺乳动物施用刺激体液免疫反应或细胞毒性T细胞免疫反应的分子。在一些实施方案中，分子是细胞因子或白介素。
[0009]哺乳动物患有癌症。所述癌症包括但不限于肾细胞癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤文氏瘤、结肠癌、胰腺癌、癌症,乳腺癌,卵巢癌,前列腺癌,鳞状细胞癌,基底细胞癌,腺癌,汗腺癌,皮脂腺癌,乳头状癌,乳头状腺癌,囊腺癌,髓样癌,支气管癌,肝癌,胆管癌,绒毛膜癌,精原细胞瘤,胚胎癌,肾母细胞瘤,宫颈癌,睾丸肿瘤,肺癌,小细胞肺癌,膀胱癌,上皮癌,神经胶质瘤,星形细胞瘤,髓母细胞瘤,颅咽管瘤,室管膜瘤,松果体瘤,血管母细胞瘤,听神经瘤,少突胶质细胞瘤,脑膜瘤,黑色素瘤,神经母细胞瘤,视网膜母细胞瘤、白血病、急性淋巴细胞白血病、急性粒细胞白血病；慢性白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症和重链病。
[0010]本公开内容还涉及融合人树突细胞和成纤维母细胞的方法，包括使树突细胞群和成纤维母细胞群经受促进细胞融合的条件，其中成纤维母细胞包含癌细胞，基因组DNA编码至少一种癌症特异性抗原(请补充相关数据)。成纤维母细胞是树突细胞的自体同源细胞。在一些实施例中，细胞融合是通过电融合完成的。
[0011]本公开内容还涉及一种包含树突细胞和成纤维母细胞的融合细胞，其中该融合细胞包含肿瘤细胞的基因组DNA，并且肿瘤细胞的基因组DNA编码至少一种对癌症具有特异性的抗原。
[0012]本公开还包括包含本专利技术的融合细胞和免疫有效量的佐剂或载体的药物组合物。在一些实施方案中，该方法进一步包括刺激选自体液免疫反应和/或细胞毒性T细胞反应的免疫反应的分子。在一些实施方案中，分子是细胞因子或白细胞介素。
附图说明
[0013]图1是制备含有从肿瘤样品中提取的基因组DNA的成纤维母细胞的过程示意图。
[0014]图2A是一系列图像，显示了肿瘤组织的载玻片和苏木精伊红(H&E)染色的结果。
[0015]图2B是一系列图像，显示了肿瘤组织的载玻片和苏木精伊红(H&E)染色的结果。
[0016]图3是显示原代培养中成纤维母细胞的细胞形态的图像。
[0017]图4是原代培养中成纤维母细胞在第0
‑
9天的细胞增殖示意图。
[0018]图5是显示原代培养中成纤维母细胞在第0
‑
13天的细胞形态的一系列图像。
[0019]图6是显示来自不同样品的mRNA表达的热图(heatmap)。
具体实施方式
[0020]本公开内容涉及一种预防癌症的方法，包括向哺乳动物施用有效量的融合细胞，其中所述融合细胞通过融合树突细胞和成纤维母细胞而形成，并且所述成纤维母细胞展示至少一种特定于癌症的抗原。成纤维母细胞包含癌细胞的基因组DNA。
[0021]树突细胞
[0022]树突细胞(DC)可以从受试者的血液或骨髓，或次级淋巴器官，例如但不限于脾、淋
巴结、扁桃体、肠的派尔氏斑或骨髓中分离或产生，通过本领域已知的任何方法。在一个优选的实施方案中，树突细胞是终末分化的树突细胞。在一个实施方案中，树突细胞从人血液单核细胞分化而来。在某些实施方案中，树突细胞对于要向其施用本专利技术的融合细胞的受试者是自体的。在替代的实施方案中，树突细胞对于要施用本专利技术的融合细胞的受试者是同种异体的。
[0023]从来源获得的免疫细胞通常主要包括处于分化和成熟的各个阶段的再循环淋巴细胞和巨噬细胞。树突细胞制剂可以通过标准技术进行富集(参见例如Current Protocols in Immunology,7.32.1
‑
7.32.16,John Wiley and Sons,Inc.,1997)。在一个实施方案中，例如，树突细胞可以通过去除T细胞和贴壁细胞，随后密度梯度离心来本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组细胞的制备方法，其包含下述步骤：(a)提供成纤维母细胞其为取自哺乳动物的结缔组织；(b)从所述哺乳动物的肿瘤组织中萃取癌细胞的基因体(genome)DNA，其中所述基因体DNA编码至少为一种对癌症具有特异性的抗原，其中取自所述哺乳动物的所述肿瘤组织不是新鲜分离的；以及(c)转化所述癌细胞基因体(genome)DNA到所述成纤维母细胞。2.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述哺乳动物是人。3.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述结缔组织为皮肤组织。4.如权利要求1所述的方法，其特征是，取自所述哺乳动物的所述肿瘤组织不是新鲜分离的。5.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述哺乳动物的所述肿瘤组织包埋在石蜡块中。6.如权利要求3所述的方法，其特征是，所述皮肤组织其保持和洗涤是通过皮肤活检运输和洗涤介质。7.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述成纤维母在皮肤活检培养基中维持和培养，所述皮肤活检培养基包含来自哺乳动物的血浆。8.一种融合树突细胞和重组细胞的方法，包括利用来自哺乳动物的树突细胞群和如权利要求1所述的重组细胞群通过促进细胞融合的条件。9.如权利要求8所述的方法，其特征是，所述树突细胞和所述重组细胞是来自哺乳动物的自体细胞。...

【专利技术属性】
技术研发人员：佐久间贞俊，大薗美千代，石川太，鱼住利树，冈恵理子，村田弘树，杨蕙瑜，
申请(专利权)人：锦高投资株式会社，
类型：发明
国别省市：