重组胶原蛋白-脱钙骨基质微粒双相凝胶软组织填充剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种重组胶原蛋白

【技术实现步骤摘要】
重组胶原蛋白
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脱钙骨基质微粒双相凝胶软组织填充剂及其制备方法


[0001]本专利技术属于生物制品
，涉及医学整形、美容中使用的软组织填充剂，具体涉及一种重组胶原蛋白
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脱钙骨基质微粒双相凝胶及其制备方法。

技术介绍

[0002]软组织填充剂用于人工干预面部老化的问题。最早采用自体脂肪作为面部填充材料并通过注射实现微整形。随着可注射填充剂的发展，牛胶原蛋白成为注射微整形行业第一个由FDA批准的注射用填充剂，随后猪胶原蛋白、人胶原蛋白产品相继获得FDA批准，但因天然胶原类材料填充修复效果持续时间短和异种来源存在潜在免疫原性和病毒传染风险的问题，目前仅存在少量实际应用，并且主要用于修正透明质酸类填充剂取出后的问题和用于眼周浅表性皱纹等，例如双美生物科技股份有限公司的猪皮胶原类填充剂产品。
[0003]中国专利200810177082.7、201110227005.4中，利用动物胶原蛋白为原料，尽管通过交联可以提高抗降解性，但也存在免疫原性和病毒传染风险，并导致异物反应和钙化加剧(植入人体后钙化形成硬结)，钙化形成的硬结会导致皮肤组织活性降低及出现僵硬现象。
[0004]中国专利201310079688.2公开了一种异种脱细胞真皮基质微粒软组织填充剂，该填充剂由未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒、经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒和医用胶原蛋白粉按一定配比组成，虽然弱化了免疫原性，但是异种脱细胞真皮基质微粒进入人体后会仍会产生一定的排异反应，并导致人体免疫炎症反应；此外微粒颗粒粒径较大，容易堵塞注射针，难于注射使用。
[0005]中国专利201910866386.7公开了一种异种生物组织材料的多联抗钙化处理方法。其先使用交联剂戊二醛、黄酰单宁和新霉素，交联处理异种生物组织材料，再使用去细胞剂去除细胞成分，然后使用交联剂进行二次交联处理，最后使用甘氨酸中和残余醛基。所处理的产品(生物瓣)虽然防钙化性能较好，但进入人体后仍存在导致免疫炎症反应的问题，而且并不具备在植入部位与周围组织进行融合的能力。

技术实现思路

[0006]针对现有技术存在的不足，本专利技术提供一种重组胶原蛋白
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脱钙骨基质微粒双相凝胶软组织填充剂及其制备方法。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：
[0008]一种重组胶原蛋白
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脱钙骨基质微粒双相凝胶，该双相凝胶包括含有重组胶原蛋白的凝胶相以及分散在该凝胶相中的固相抗钙化交联脱钙骨基质微粒，所述双相凝胶中，固相抗钙化交联脱钙骨基质微粒与重组胶原蛋白的质量比为10:1～1:50。经过多次实验论证，该质量比下的双相凝胶作为软组织填充剂具有最佳的抗降解性以及抗钙化性，并且满足注射要求，便于临床植入操作，同时植入人体后能够与植入部位周围的组织融合，实现填
充部位的组织再生。
[0009]优选的，所述凝胶相是通过将重组胶原蛋白与生理缓冲溶液混合(使重组胶原蛋白溶解于生理缓冲溶液中)而得到的，或者通过将重组胶原蛋白、局部麻醉药与生理缓冲溶液混合而得到的，所述固相抗钙化交联脱钙骨基质微粒是通过将动物骨组织颗粒粉碎后依次进行脱钙、去抗原(指去除骨基质微粒中的蛋白、脂肪等可引起免疫反应的物质，其中的某些蛋白类物质，例如BMP
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2等成骨活性蛋白的去除，具有抗钙化作用)、交联改性及抗钙化处理(再次抗钙化)而得到的。
[0010]优选的，所述局部麻醉药选自盐酸利多卡因、苯佐卡因、丁卡因中的一种，局部麻醉药在所述凝胶相中的浓度为1～5mg/mL，按照此浓度范围可以调节凝胶相中局部麻醉药所需不同含量，从而满足临床使用过程中浅表至深层的填充需要，减少、缓解植入部位的疼痛感。
[0011]优选的，所述动物骨组织颗粒是通过将牛、猪、羊、牦牛、马、驴等哺乳动物的骨组织经粉粹后进行脱毒(杀灭病毒)、脱脂和脱细胞处理而得到的。
[0012]优选的，所述双相凝胶的总蛋白含量为20～600mg/mL。该总蛋白含量的双相凝胶可满足临床不同植入深度的填充需求，并且不会产生免疫反应。
[0013]优选的，所述重组胶原蛋白选自通过微生物基因重组或植物基因重组表达系统得到的I型胶原蛋白、III型胶原蛋白、Ⅳ型胶原蛋白、
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型胶原蛋白、弹性蛋白、粘连蛋白或者纤连蛋白中的一种或多种，或者重组胶原蛋白选自含有所述I型胶原蛋白、III型胶原蛋白、Ⅳ型胶原蛋白、
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型胶原蛋白、弹性蛋白、粘连蛋白或者纤连蛋白的融合蛋白，以上重组胶原蛋白可以基于天然人胶原蛋白的特征和主要功能序列重新优化设计基因序列，并通过表达系统获得，具有良好的生物学相容性、可加工性以及无病毒传染风险等优点；所述重组胶原蛋白的分子量为5～200万道尔顿，该分子量的胶原蛋白性能更为稳定，降解后更容易被人体吸收。
[0014]优选的，所述凝胶相的pH值为6.0～8.0，该凝胶相的渗透压与人体渗透压保持一致，为250mOsmol/L～350mOsmol/L，可减少植入过程中的疼痛感，并使植入的填充剂在植入部位保持稳定。
[0015]上述重组胶原蛋白
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脱钙骨基质微粒双相凝胶的制备方法，包括以下步骤：
[0016]将动物骨组织颗粒粉碎后依次进行脱钙、去抗原、交联改性及抗钙化处理，得到固相抗钙化交联脱钙骨基质微粒；将重组胶原蛋白与生理缓冲溶液混合，或者将重组胶原蛋白、局部麻醉药与生理缓冲溶液混合，得到含有重组胶原蛋白的凝胶相；将所述凝胶相与固相抗钙化交联脱钙骨基质微粒混合，得到重组胶原蛋白
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脱钙骨基质微粒双相凝胶。
[0017]优选的，所述去抗原处理具体包括以下步骤：采用尿素溶液(处理浓度以质量分数计为0.05％～5％)浸泡经过粉碎、脱钙处理(例如，采用盐酸溶液浸泡)所得的骨基质微粒；所述交联改性处理采用的化学交联剂选自戊二醛、甲醛、碳二亚胺、环氧化物、京尼平、单宁酸、原花青素中的一种或多种；所述抗钙化处理采用的钙化抑制剂选自硼氢化钠、甘氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、肝素、乙醇、丁二醇、单宁酸中的一种或多种。
[0018]优选的，所述动物骨组织颗粒经粉粹后所得骨组织微粒的粒径为10～200μm，利用该粒径范围的骨组织微粒制备的双相凝胶不易堵塞注射针，并且使得植入部位外观圆润、无明显颗粒感。
[0019]优选的，所述凝胶相与固相抗钙化交联脱钙骨基质微粒的混合比例按质量计为10:1～100:1，该凝胶相中重组胶原蛋白的浓度为50～300mg/mL。
[0020]优选的，所述双相凝胶的制备方法具体包括以下步骤：
[0021]1)动物骨组织颗粒的制备
[0022]将切割成块状的动物骨组织用水清洗后粉碎为颗粒，然后用所含SDS、NaOH和有机溶剂的质量分数分别为0.2％～2％、0.3％～4％和20％～80％的混合溶液，按照20～60分钟/次超声处理3～6次；然后用水清洗、干燥(低于60℃)，得到脱毒、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组胶原蛋白
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脱钙骨基质微粒双相凝胶，其特征在于：该双相凝胶包括含有重组胶原蛋白的凝胶相以及分散在该凝胶相中的固相抗钙化交联脱钙骨基质微粒，所述固相抗钙化交联脱钙骨基质微粒与重组胶原蛋白的质量比为10:1～1:50。2.如权利要求1所述的重组胶原蛋白
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脱钙骨基质微粒双相凝胶，其特征在于：所述凝胶相是通过将重组胶原蛋白与生理缓冲溶液混合而得到的，或者所述凝胶相是通过将重组胶原蛋白、局部麻醉药与生理缓冲溶液混合而得到的，所述固相抗钙化交联脱钙骨基质微粒是通过将动物骨组织颗粒粉碎后进行脱钙、去抗原、交联改性及抗钙化处理而得到的。3.如权利要求2所述的重组胶原蛋白
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脱钙骨基质微粒双相凝胶，其特征在于：所述局部麻醉药选自盐酸利多卡因、苯佐卡因、丁卡因中的一种。4.如权利要求2所述的重组胶原蛋白
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脱钙骨基质微粒双相凝胶，其特征在于：所述动物骨组织颗粒是通过将哺乳动物的骨组织经粉粹后进行脱毒、脱脂和脱细胞处理而得到的。5.如权利要求1所述的重组胶原蛋白
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脱钙骨基质微粒双相凝胶，其特征在于：所述双相凝胶的总蛋白含量为20～600mg/mL。6.如权利要求1所述的重组胶原蛋白
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脱钙骨基质微粒双相凝胶，其特征在于：所述重组胶原蛋白选自通过微生物基因重组表达系统或植物基因重组表达系统得到的I型胶原蛋白、III型胶原蛋白、Ⅳ型胶原蛋白、
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型胶原蛋白、弹性蛋白、粘连蛋白或者纤连蛋白中的一种或多种，或者重组胶原蛋白选自含有所述I型胶原蛋白、III型胶原蛋白、Ⅳ型胶原蛋白、
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型胶原蛋白、弹性蛋白、粘连蛋白或者纤连蛋白的...

【专利技术属性】
技术研发人员：田智泉，黄文涛，杨莎莎，宗奕珊，
申请(专利权)人：西安德诺海思医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：