磷酸化蛋白质在膜性肾病中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种定量检测蛋白质EZR的T567位点的磷酸化水平的试剂在制备膜性肾病诊断试剂中的应用。申请人在研究过程中发现，EZR磷酸化位点T567的磷酸化水平在IMN组中相比于对照组都存在显著的下调，可能是随着疾病进展而逐渐下降的。T567的磷酸化水平下调可能参与了IMN疾病进展过程中足细胞的损伤。而切片的免疫组织化学染色强度及细胞阳性率统计结果进一步证明，EZRT567位点的磷酸化水平在IMN患者的肾活检组织中确实是下降的，因此，可以通过能够定量检测蛋白质EZR的T567位点的磷酸化水平的试剂来诊断膜性肾病。酸化水平的试剂来诊断膜性肾病。酸化水平的试剂来诊断膜性肾病。

【技术实现步骤摘要】
磷酸化蛋白质在膜性肾病中的应用


[0001]本申请涉及肾病
，尤其是涉及磷酸化蛋白质在膜性肾病中的应用。

技术介绍

[0002]膜性肾病(membranous nephropathy，MN)是成人肾病综合征最常见的原因。根据病因不同，MN可以分为特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy，IMN)和继发性膜性肾病(secondary membranous nephropathy，SMN)，其中IMN约占75％，病因不明；SMN病因比较明确，肿瘤、感染、药物、自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮等可导致SMN。MN患者通常表现为严重蛋白尿、水肿、低蛋白血症、高脂血症，诊断依赖肾脏活检病理，其病理诊断特征包括有：肾小球毛细血管壁增厚，免疫荧光可见IgG、C3沿着毛细血管壁沉积，电镜显示肾小球脏层上皮细胞下电子致密物形成；但是IMN需排除继发性因素后才能诊断。
[0003]目前IMN的病因及发病机制并不十分明确，可能和遗传基因、免疫、环境因素有关。虽然在IMN疾病标志物及发病机制方面有了一定的研究成果，但是对该疾病关键的触发源头、补体激活机制及导致足细胞损伤的具体分子机制尚未完全明确，这也给IMN的诊断和临床治疗带来一定的困难，患者一旦进入ESRD阶段将会面临更为严重的生理心理以及社会负担。因此寻找新的视角来进一步研究膜性肾病的诊断标志物或者潜在的治疗干预靶点。

技术实现思路

[0004]本申请旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本申请提出一种磷酸化蛋白质作为膜性肾病的诊断标志物，利用能够定量检测该蛋白的特定位点的磷酸化水平的试剂可以有效地诊断膜性肾病或作为潜在的治疗干预靶点。
[0005]本申请的第一方面，提供定量检测蛋白质EZR的T567位点的磷酸化水平的试剂在制备膜性肾病诊断试剂中的应用。
[0006]根据本申请实施例的应用，至少具有如下有益效果：
[0007]肾小球足细胞是高度分化的细胞，胞体具有许多突起，称为足突。足细胞对肾小球滤过屏障的选择通透性十分重要并且足细胞发挥功能主要基于细胞结构的动态调节，特别是足突结构的调节。EZR(ezrin，Gene ID：7430)是肌动蛋白
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质膜连接蛋白，主要存在于足细胞足突，EZR的磷酸化位点T567的磷酸化在维持细胞形态结构，动态调节B细胞受体迁移，8
‑
细胞胚胎紧密化，凋亡信号转导等方面发挥重要作用。而申请人在研究过程中发现，EZR磷酸化位点T567的磷酸化水平在IMN组中相比于对照组存在显著的下调，可能是随着疾病进展而逐渐下降的。T567的磷酸化水平下调可能参与了IMN疾病进展过程中足细胞的损伤。而切片的免疫组织化学染色强度及细胞阳性率统计结果进一步证明，EZR的T567位点的磷酸化水平在IMN患者的肾活检组织中确实是下降的，因此，可以通过能够定量检测蛋白质EZR的T567位点的磷酸化水平的试剂来诊断膜性肾病。
[0008]其中，EZR的氨基酸序列如下所示：
[0009]MPKPINVRVTTMDAELEFAIQPNTTGKQLFDQVVKTIGLREVWYFGLHYVDNKGFPTWLKLDKKVSAQ
EVRKENPLQFKFRAKFYPEDVAEELIQDITQKLFFLQVKEGILSDEIYCPPETAVLLGSYAVQAKFGDYNKEVHKSGYLSSERLIPQRVMDQHKLTRDQWEDRIQVWHAEHRGMLKDNAMLEYLKIAQDLEMYGINYFEIKNKKGTDLWLGVDALGLNIYEKDDKLTPKIGFPWSEIRNISFNDKKFVIKPIDKKAPDFVFYAPRLRINKRILQLCMGNHELYMRRRKPDTIEVQQMKAQAREEKHQKQLERQQLETEKKRRETVEREKEQMMREKEELMLRLQDYEEKTKKAERELSEQIQRALQLEEERKRAQEEAERLEADRMAALRAKEELERQAVDQIKSQEQLAAELAEYTAKIALLEEARRRKEDEVEEWQHRAKEAQDDLVKTKEELHLVMTAPPPPPPPVYEPVSYHVQESLQDEGAEPTGYSAELSSEGIRDDRNEEKRITEAEKNERVQRQLLTLSSELSQARDENKRTHNDIIHNENMRQGRDKYKTLRQIRQGNTKQRIDEFEAL(SEQ ID No.1)。
[0010]在本申请的一些实施方式中，膜性肾病为特发性膜性肾病。
[0011]在本申请的一些实施方式中，试剂包括蛋白质EZR的T567位点的磷酸化抗体。其中，磷酸化抗体可以是单克隆抗体也可以是多克隆抗体。可以理解的是，试剂也可以是本领域所知的其它可以定量检测蛋白质特定位点磷酸化水平的试剂。
[0012]在本申请的一些实施方式中，蛋白质EZR来源于活体肾组织。利用穿刺或外科手术的方法从患者的肾脏中获得少许的肾脏活体组织进行蛋白质EZR的T567的磷酸化水平的定量检测。
[0013]本申请的第二方面，提供蛋白质EZR的T567位点作为靶点在筛选或制备用于治疗膜性肾病的药物中的应用。通过备选药物是否能够对EZR的T567位点的磷酸化水平进行改变，具体而言是是否能够上调EZR的T567位点的磷酸化水平，判断其是否参与足细胞的损伤修复，从而确定能否用作治疗膜性肾病的药物。如果可以上调EZR的T567位点的磷酸化水平，则有可能参与足细胞的损伤修复，可能能够用于治疗膜性肾病，特别是特发性膜性肾病。
[0014]本申请的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本申请的实践了解到。
附图说明
[0015]图1是KEGG通路注释及富集分析结果，其中，a、b、c分别是Ⅱ期IMN组/对照组、Ⅱ期IMN组/Ⅲ期IMN组、Ⅲ期IMN组/对照组的差异蛋白质富集的通路。
[0016]图2是利用三个免疫相关通路对差异磷酸化蛋白质的筛选结果，其中，A是对6个分析方法分别筛选出的10种关键蛋白质取交集的结果，B是三个通路上的差异磷酸化蛋白质形成的互作网路图。
[0017]图3中EZR(T567)免疫组化实验结果，其中，A是对照组的免疫组化实验结果，B是Ⅱ期IMN患者的免疫组化实验结果，C是阳性细胞率的统计比较结果。
具体实施方式
[0018]以下将结合实施例对本申请的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本申请的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本申请的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本申请的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本申请保护的范围。
[0019]下面详细描述本申请的实施例，描述的实施例是示例性的，仅用于解释本申请，而不能理解为对本申请的限制。
[0020]在本申请的描述中，若干的含义是一个以上，多个的含义是两个以本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.定量检测蛋白质EZR的T567位点的磷酸化水平的试剂在制备膜性肾病诊断试剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述膜性肾病为特发性膜性肾病。3.根据权利要求1至2任一项所述的应用，其特征在于，所述试剂包...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴勇，李珊珊，汤冬娥，何敬全，
申请(专利权)人：权利要求书一页说明书五页序列表三页附图一页，
类型：发明
国别省市：