具有共同轻链的转基因兔制造技术

本文报道了包含人源化轻链基因座的转基因载体，其中所述人源化轻链基因座包含(a)衍生自人轻链V区段IGKV1

【技术实现步骤摘要】
具有共同轻链的转基因兔
[0001]本申请是中国专利申请201680063211.7的分案申请，原申请的申请日是2016年10月27日，专利技术名称是“具有共同轻链的转基因兔”。
[0002]本文报道了可用于产生生产人抗体的转基因兔的共同轻链基因座。本文还报道了共同轻链可变结构域氨基酸序列，包含共同轻链可变结构域的多特异性抗体和包含相应共同轻链基因座的转基因兔。

技术介绍

[0003]多特异性抗体的产生受到链错配导致未配对和错配副产物形成问题的阻碍。根据所选择的形式，可以形成这些副产物的不可忽略的数目和量。
[0004]已经开发了解决这个问题的不同方法。
[0005]为了减少重链错配，已经报道了结入扣(knobs
‑
into
‑
hole)技术(参见例如Ridgway，JB等人，Prot.Eng.9(1996)617
‑
621)或CrossMab形式(参见例如Schaefer，W等人，Natl.Acad.Sci USA 108(2011)11187
‑
11192)。
[0006]为了减少轻链错配，可以使用共同轻链。这种方法固有地要求对于每个都由一对抗体重链可变结构域和抗体轻链可变结构域形成的两个结合位点，必须使用相同的抗体轻链可变结构域。
[0007]包含人免疫球蛋白基因座的非人动物可以用于产生具有共同轻链的单特异性抗体。这些动物中的人免疫球蛋白基因座通常包含减少且有限数量的重链种系基因，重排的种系重链基因或重链V基因区段和单个轻链基因。当为了产生抗体而免疫这种非人动物时，引发的免疫应答包含具有多种不同重链可变结构域但仅有单一轻链可变结构域的抗体。
[0008]需要设计并开发适合于配合从头产生抗体的新型共同轻链。因此，这种方法不被认为是开发重组多特异性抗体的首选，因为很可能需要进一步优化并且不得不进行序列修饰。
[0009]例如在WO 98/50431，WO 2010/084197，US2013/045492，WO2011/097603和WO2012/148873中报道了共同轻链和产生这种共同轻链的方法。
[0010]在WO 2004/009618中，在SEQ ID NO：1中报道了共同VL(包含在UBS54和K53中)。在SEQ ID NO：18中报道了从针对CD22(克隆B28)、CD72(克隆II
‑
2)和HLA
‑
DR(II类；克隆I
‑
2)的噬菌体获得的共同轻链。
[0011]在US 2007/098712中，使用抗Ob
‑
R抗体克隆26和抗HER3抗体克隆18的共同VL序列构建双特异性抗体。还报道了抗Mpl scFv 12B5(GenBank登录号AF048775)和抗HER3 scFv克隆H6(GenBank登录号AF048774)利用相同的VL序列和基本上不同的VH序列。
[0012]在WO2010/84197中报道了包含重链和轻链的重组抗体，其中轻链包含如SEQ ID NO：8所示的序列。SEQ ID NO：8是V区段VKVI
‑2‑1‑
(1)
‑
A14(IGKV6D
‑
41*01)的氨基酸序列。共同轻链的其他氨基酸序列在SEQ ID NO：12
‑
14中报道。
[0013]在US2010/0331527中报道了另一种共同轻链方法，其中不同特异性的两种抗体使用相同的轻链。
[0014]在WO2011/097603中报道了基于人Vκ1
‑
39Jκ5基因座，人Vκ3
‑
20Jκ1基因座和人VpreBJλ5基因座的工程化人Vκ和Vλ共同轻链。
[0015]在US2012/0192300，US2012/021409，US2011/0195454和US2013/0045492中报道了共同轻链及其制备方法。
[0016]在WO2012/018764中报道了遗传修饰的小鼠以及制备和使用它们的方法，其中小鼠包含用至少一个轻链V基因区段和至少一个轻链J基因区段替代全部或基本上全部的免疫球蛋白重链V基因区段、D基因区段和J基因区段。
[0017]在WO 2013/157953中报道了衍生自重排的种系人κ轻链IgVK1
‑
39/Jκ或IGVK3
‑
20/JK的种系样共同轻链。
[0018]在WO2014/22540中概述了通用轻链可以是选自Vκ1
‑
39和Vκ3
‑
20轻链的κ轻链或选自VL1
‑
40和VL2
‑
14轻链的λ轻链。在一个具体实施方案中，人VL基因区段是人Vκ1
‑
39Jκ5基因区段或人Vκ3
‑
20Jκ1基因区段。
[0019]在WO2014/51433中报道了共同轻链012，其是人重排κ轻链IgVK1
‑
39*01/IgJK1*01。该序列是在人库中经常使用的种系序列，并且具有与许多不同VH区配对的优越能力，并且具有良好的热力学稳定性、产量和溶解性。
[0020]在US2015/037337中报道了人JH6*02是人中共同的保守变体，并因此是构建转基因IgH基因座的良好候选者。
[0021]在WO 2015/052230的SEQ ID NO：6中报道了修饰的重链CH3
‑
CH2
‑
CH1
‑
VL的氨基酸序列，其中VL是共同轻链(CLC
‑
Fc cross
‑
MAb)的可变结构域。
[0022]在WO 2015/153765中，报道了在SEQ ID NO：78和79的N
‑
term
‑
VL
‑
CK
‑
C
‑
term融合多肽中的共同轻链。
[0023]在WO 2000/46251，WO 2002/12437，WO 2005/007696，WO 2006/047367，US 2007/0033661和WO 2008/027986中报道了包含人免疫球蛋白基因座的转基因兔。
[0024]专利技术概述
[0025]本文报道的一个方面是具有以下氨基酸序列的共同抗体轻链可变结构域：
[0026]DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQSIS SYLNWYQQKP GKAPKLLIYA ASSLQSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ SYSTPLTFGG GTKVEIK(SEQ ID NO:01)
[0027]或其变体。
[0028]本文报道的一个方面是包含具有以下氨基酸序列的轻链可变结构域的共同抗体轻链
[0029]DIQ本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有人源化免疫球蛋白轻链基因座的转基因兔，所述人源化免疫球蛋白轻链基因座包含多个V基因元件，其中仅一个V基因元件与启动子有效连接。2.根据权利要求1所述的转基因兔，其包含(1)衍生自兔免疫球蛋白重链基因座的转基因，其中用8个人VH元件、人JH1
‑
JH6元件、与人bcl2编码序列融合的人Cμ编码区、和人Cγ编码区取代；(2)衍生自兔免疫球蛋白轻链基因座的转基因，其包含人Vκ元件IGKV1
‑
39
‑
01和人IgKJ4 J元件；(3)衍生自人CD79α和CD79β基因座的转基因；和(4)兔Cμ和兔Cκ基因座内的功能丧失的突变。3.根据权利要求1或2所述的转基因兔，其包含i)包含多个免疫球蛋白重链基因区段的人源化重链免疫球蛋白基因座，其中(a)所述重链基因区段中的至少一个基因区段是VH3家族的人重链V区段，作为3'近端V基因区段，侧翼为包含(介于20个和1000个连续核苷酸之间的来自)SEQ ID：06的兔间隔序列的核苷酸序列，(b)所述基因区段以未重排、或部分重排或完全重排的构型并置，和(c)所述人源化免疫球蛋白基因座能够进行基因重排，根据需要，以及能够进行基因转变和/或超变，并且在所述兔中产生人源化免疫球蛋白的库，和ii)人源化轻链免疫球蛋白基因座，其包含(a)衍生自人轻链V区段IGKV1
‑
39
‑
01的V基因区段，(b)启动子，其3
’
近端连接有所述轻链基因区段，和(c)至少一个人IGKJ4 J元件的片段，其5
’
近端连接有所述轻链基因区段。4.根据权利要求1至3中任一项所述的转基因兔，其中所述转基因兔对于人源化重链基因座和人源化轻链基因座是纯合的。5.根据权利要求1至3中任一项所述的转基因兔，其中所述转基因兔对于人源化重链基因座和人源化轻链基因座是杂合的。6.根据权利要求1至5中任一项所述的转基因兔，其中所述转基因兔对于内源性抗体重链表达和/或内源性抗体轻链表达失活。7.根据权利要求2至6中任一项所述的转基因兔，其中所述免疫球蛋白轻链基因座包含(a)衍生自人轻链V区段IGKV1
‑
39
‑
01的V基因区段，(b)启动子，其3
’
近端连接有所述轻链基因区段，和(c)人IGKJ4 J元件的至少一个片段，其5
’
近端连接有所述轻链基因区段。8.根据权利要求2至7中任一项所述的转基因兔，其中所述免疫球蛋白轻链基因座包含25至30个人Vκ元件和人Cκ编码区，其中(a)3'近端Vκ元件是衍生自人轻链V区段IGKV1
‑
39
‑
01的V基因区段，(b)启动子(3
’
近侧)有效连接至所述3
’
近端轻链基因区段，和(c)人IGKJ4 J元件的至少一个片段5
’
近端有效连接至所述轻链基因区段。9.根据权利要求2至8中任一项所述的转基因兔，其中在免疫球蛋白轻链基因座中，V基因区段是人轻链V区段IGKV1
‑
39
‑
01并具有SEQ ID NO：02的核酸序列。10.根据权利要求2至9中...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：