含猪脑神经节苷脂成分药物制剂的指纹图谱检测方法及应用技术

本发明专利技术属于药物成分检测分析领域，具体涉及一种含猪脑神经节苷脂成分药物制剂的指纹图谱检测方法，包括如下步骤：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、色谱条件确定和指纹图谱的建立，将色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》分析，从而建立了药物制剂的指纹图谱。本发明专利技术指纹图谱检测方法可同时测定药物制剂中唾液酸、GD1a

【技术实现步骤摘要】
含猪脑神经节苷脂成分药物制剂的指纹图谱检测方法及应用


[0001]本专利技术属于药物成分检测分析领域，具体涉及一种含猪脑神经节苷脂成分药物制剂的指纹图谱检测方法及应用。

技术介绍

[0002]对于药物制剂的质量控制来说，尤其对于注射液制剂成分的复杂及多样性，该类制剂的安全性要求，使得越来越多的药企更加注重采用指纹图谱检测技术，来对药物的中间体成分进行质量控制。因指纹图谱技术具有多指标成分的整体性优势，能够比较全面反映药物制剂中内在质量成分的化学特征，其指纹图谱检测方法在专属性、重现性、稳定性方面有明显优势。其中本专利技术中药物制剂所指的是含有猪脑神经节苷脂成分的复方药物制剂，如复方脑肽节苷脂注射液、复方曲肽注射液、神经节苷脂注射液等产品。
[0003]目前，市场上含有猪脑神经节苷脂成分的复方药物制剂，如复方脑肽节苷脂注射液、复方曲肽注射液等类似产品。但在该类药物制剂的质量标准中含量测定仅以单唾液酸四己糖神经节苷脂和次黄嘌呤含量计算。然而，单唾液酸神经节苷脂(GM1)的生产原料获得主要是从动物脑组织，如：猪脑、牛脑中提取。由于猪脑组织的神经节苷脂(GLS)中，GM1含量较低，其大部分是多唾液酸神经节苷脂，如：GD1a、GD1b、GD3和GT1b等。神经节苷脂主要为唾液酸的鞘糖脂，其组分为鞘氨醇、脂酸和寡糖链。通常根据糖基、唾液酸数目、连接位点不同，可分为四糖基单唾液酸神经节苷脂(GM1)、四糖基二唾液酸神经节苷脂(GD1)及四糖基三唾液酸神经节苷脂(GT1)等。其中，猪脑神经节苷脂提取液主要成分多以单唾液四己糖神经节苷脂(GM1)为主。而GM1对中风、老年痴呆、癫痫、脑瘫和帕金森病都有明显的疗效。
[0004]在国家颁布的GM1原料药质量标准中，对其中的GD1a和GD3两种神经节苷脂进行了控制。通过文献查阅，GD1a和GD3同属于神经节苷脂的，是GM1纯化工艺中较难去除且可能残留的杂质，文献报道GD1a和GD3与肿瘤的转移息息相关。由于猪脑提取液中的成分较多，仅靠单一指标成分难以对其内在质量进行控制，亟待对现行质量检测标准进行探索并改进，以摸索一种有效的控制内在质量标准方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术目的是解决现有技术不足，提供一种含有猪脑神经节苷脂成分的药物制剂的指纹图谱检测方法，该指纹图谱检测方法可同时测定药物制剂中唾液酸、GD1a
‑
1、GD3、GD1a
‑
2、GM1A、GM1B，6个指标成分的含量。且该检测方法专属性及重现性良好，能够全面、准确评价药物制剂的内在质量，从而保证该类药物制剂的临床应用的安全性和有效性。
[0006]本专利技术专利的技术方案为：
[0007]一种药物制剂的指纹图谱检测方法，所述检测方法包括如下步骤：
[0008]⑴
、供试品溶液的制备：将待测药物制剂配制成一定浓度的溶液，优选溶剂为水；
[0009]⑵
、对照品溶液的制备：分别将GM1对照品、GD1a对照品、GD3对照品、唾液酸对照品配制成一定浓度的溶液，得到对照品储备液；具体为：
[0010]GM1对照品储备液：称取GM1对照品，用纯化水稀释至刻度，摇匀；
[0011]GD1a对照品储备液：称取GD1a对照品，用58～62％乙腈水溶液溶解，并定容至刻度，摇匀；
[0012]GD3对照品储备液：称取GD3对照品，用58～62％乙腈水溶液溶解，并定容至刻度，摇匀；
[0013]唾液酸对照品储备液：称取唾液酸对照品，用58～62％乙腈水溶液溶解，并稀释定容至刻度，摇匀；
[0014]⑶
、色谱条件：色谱柱以C18为填充剂，流动相：缓冲盐溶液A
‑
乙腈B，流动相洗脱比例为：0min，40％A，60％B；40min，25％A，75％B；45min，40％A，60％B；检测流速：1.0～1.4mL
·
min
‑1，检测波长：205nm，检测柱温：35～45℃；
[0015]⑷
、指纹图谱的建立：上述步骤
⑴
供试品溶液，注入液相色谱仪，测定记录色谱图，将色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》分析，从而建立了药物制剂的指纹图谱。
[0016]优选的，所述步骤
⑶
中所述缓冲盐溶液A是由0.005mol/l磷酸二氢钾溶液
‑
0.01％三乙胺溶液配制而成。
[0017]优选的，将药物制剂溶液按照步骤
⑶
色谱条件进行测定，按中药指纹色谱图谱相似度评价系统计算，供试品溶液的色谱图与对照品溶液色谱图的相似度不得低于0.85。
[0018]本专利技术猪脑神经神经节苷脂提取液主要成分以单唾液四己糖神经节苷脂(GM1)为主，其还含有GD1a、GD3、唾液酸等其他成分。而本申请的专利技术人通过大量文献查阅发现并认为，GD1a和GD3同属于神经节苷脂，是GM1纯化工艺中较难去除且可能残留的杂质，对上述检测指标成分进行质量控制，显得尤为必要。
[0019]因此，本专利技术选择以唾液酸、GD1a
‑
1、GD3、GD1a
‑
2、GM1A、GM1B为指标含量，对猪脑神经节苷脂提取液中的有效物质进行标定，从而控制其内质量，有效保障药物制剂的安全性和有效性。
[0020]本专利技术所测得6个指标成分的具体成分为：唾液酸化学名称为N
‑
乙酰基神经氨酸，其分子式：C
11
H
19
NO9。GD1a化学名称为双唾液酸四己糖神经节苷脂钠，其分子式为：C
84
H
146
N4O
39
2Na。GD3化学名称为双唾液酸二己糖神经节苷脂钠，其分子式为：C
70
H
123
N3O
29
2Na。GM1化学名称为单唾液酸四己糖神经节苷脂钠，其分子式为：C
73
H
130
N3O
31
Na。其中，GD1a
‑
1与GD1a
‑
2化学结构相类似，GD1a
‑
2的化学结构仅比GD1a
‑
1多一个亚甲基，GM1A、GM1B结构相类似，GM1B分子结构比GM1A多一个亚甲基。
[0021]本专利技术指纹图谱测定方法可用于在该药物制剂中的真伪鉴别及含量成分检测中的应用。
[0022]本专利技术药物制剂含量检测方法具有以下有益效果：
[0023]1.本专利技术的申请人经过大量的预实验研究，对影响该药物制剂中GD1a
‑
1、GD3、GD1a
‑
2、GM1A、GM1B含量成分的分离度关键因素，如：缓冲液pH值、缓冲液浓度、流动相比例、缓冲液调节pH值、柱温变化、流速变化等进行筛选，终于摸索找到本专利技术最佳的流动相成分和比例。按照所筛选检测色谱条件，可以检测到药物制剂中唾液酸、GM1A本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种含猪脑神经节苷脂成分药物制剂的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
⑴
、供试品溶液的制备：将待测药物制剂配制成一定浓度的溶液，优选溶剂为水；
⑵
、对照品溶液的制备：分别将GM1对照品、GD1a对照品、GD3对照品、唾液酸对照品配制成一定浓度的溶液，得到对照品储备液；
⑶
、色谱条件：色谱柱以C18为填充剂，流动相：缓冲盐溶液A
‑
乙腈B，流动相洗脱比例为：0min，40％A，60％B；40min，25％A，75％B；45min，40％A，60％B；检测流速：1.0～1.4mL
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min
‑1，检测波长：205nm，检测柱温：35～45℃；
⑷
、指纹图谱的建立：上述步骤
⑴
供试品溶液，注入液相色谱仪，测定记录色谱图，将色谱图导入《中药色谱指纹...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵建东，王海月，王东厚，李学彩，裴巧英，张永利，
申请(专利权)人：吉林天成制药有限公司，
类型：发明
国别省市：